甘蓝型油菜中油杂8号种子纯度的SSR鉴定

细胞质雄性不育三系杂交种的纯度鉴定是油菜种子生产中重要的一环。选用173对SSR引物在中油杂8号的亲本间扩增,从中筛选到6对扩增效果好、条带清晰且差异片断在亲本间能够重复出现的引物,其中P051、P078和P203三对SSR引物在杂种F1中同时表现出父母本的特征条带。用这3对引物对32份中油杂8号的DNA进行鉴定,发现P078和P203的鉴定结果完全相同,因此采用其中的P078引物对经过田间种植鉴定的中油杂8号样品进行了鉴定。结果表明,SSR鉴定的结果与田间种植鉴定的结果非常接近,说明采用P078或P203都可以对中油杂8号进行快速准确的鉴定。     

用酯酶同工酶和AFLP标记鉴定甘蓝型油菜"中油杂2号"的种子纯度

对甘蓝型油菜“中油杂2号”杂交种及其父母本的酯酶同工酶分析结果显示，父本和杂种F1比母本多一条迁移率(Rf)为0．8的条带，该特征条带可用来进行杂种纯度鉴定。在“中油杂2号”的父母本问筛选了20个AFLP引物组合，发现E33M59不仅扩增产物多态性好，而且有3条母本特异带和7条父本特异带在杂种F1中出现，因此该引物组合被用来进行“中油杂2号”种子纯度的鉴定。对5个“中油杂2号”样品进行纯度鉴定的结果表明，酯酶同工酶和AFLP标记鉴定与田间种植鉴定的结果相吻合。     

运用SRAP分子标记对胡麻杂交种纯度的鉴定研究

以胡麻杂交种陇杂1号、陇杂2号及其父母本自交系为试材,从9对引物中筛选出2对M10/E3和M2/E5分别进行SRAP分析。结果表明,在陇杂1号母本1S和父本873中均能扩增出至少1条特征带。陇杂1号与父母本相比均有差异带,陇杂2号中产生双亲互补带型。这2对引物均可应用于陇杂1号和陇杂2号的纯度鉴定。     

利用SSR标记检测两系杂交稻两优培九种子的纯度

以两系杂交稻两优培九及其双亲的DNA为模板,采用294对SSR引物进行PCR扩增,筛选在亲本中有多态、杂种中能表现共显性的引物,试图在分子水平上区分两优培九杂交种子及其母本培矮64S低温自交结实的种子.结果表明,有26对SSR引物在双亲中表现多态性,其中12对引物能在F1表现明显的共显性.选择扩增条带清晰、PCR产物的分子量差异明显的6对引物进行二重PCR扩增试验,发现66号和175号两对SSR引物组合后,在F1中扩增得到6条电泳迁移率明显不同的条带(其中2条来自母本,4条来自父本),可以很清楚地区分两优培九杂种种子中混入的母本自交种子.进一步对两优培九南繁鉴定田中常见的几种类型杂株,用66号和175号两对SSR引物进行二重PCR扩增,未发现与两优培九杂种一样的谱带类型.由此建立了两优培九种子纯度的分子鉴定体系,应用该体系可在5～7 d内完成未知样品的检测,准确率在99.9%以上.     

甘蓝型油菜“甘杂1号”种子纯度的SSR鉴定

【目的】建立有效的鉴定"甘杂1号"种子纯度的SSR分子标记方法,为提高"甘杂1号"大田制种纯度提供分子辅助工具。【方法】以"甘杂1号"杂交种及其母本3131A和父本3116C种子为供试材料,利用SSR分子标记技术鉴定"甘杂1号"种子纯度,从200对引物中筛选出特异性强、稳定性高的SSR引物,并将SSR引物鉴定的"甘杂1号"种子纯度与田间种植鉴定结果进行比较。【结果】在200对SSR引物中,筛选出了2对在杂交种和父母本之间存在显著差异的引物(CB10569和Na12E03),且条带清晰可辨,即杂交种含有父母本的特异互补带型。将这2个引物在120株"甘杂1号"杂交种群体中进行重复验证,发现CB10569和Na12E03 2对引物鉴定出"甘杂1号"的种子纯度分别为82%,79.5%。SSR标记的鉴定结果与田间种植鉴定结果(83%)基本一致。【结论】得到的2对SSR引物CB10569和Na12E03,可用于甘蓝型油菜品种"甘杂1号"种子纯度的鉴定。     

利用SCAR-PCR检测杂交油菜"蜀杂9号"的杂种纯度

用两个分别能在“蜀杂9号”父、母本之间稳定产生多态性的随机引物S18和S31,对父、母本DNA样品进行RAPD扩增,将得到的特异标记片段S18750和S31550进行回收、克隆和测序。根据测序结果设计序列特异性扩增(SCAR)引物SZ9SP1和SZ9SP2,将“蜀杂9号”的亲本RAPD标记转化为序列特异的SCAR标记。当用两对引物分别扩增杂种F1代单株总DNA时,能分别获得父、母本特异序列扩增带,表明获得的SCAR标记能可靠地用于“蜀杂9号”杂种纯度的检测。     

两系杂交粳稻精量用种高产栽培技术研究

用当前在湖北大面积推广的晚稻品种鄂粳杂1号和鄂粳杂3号做精量播种及化学试剂调节试验,结果表明：在秧苗1叶1心喷施多效唑能有效降低苗高,在秧龄30d左右时苗高20 cm左右,这样的苗高则可以应用抛秧。另外产量的方差分析结果表明,各处理间没有显著差异,这为双季晚稻单本插植提供了可能,从而减少种子用量,节约生产成本。     

茎瘤芥(榨菜)杂交种涪杂2号种子纯度SSR鉴定

[目的]利用SSR分子标记技术对茎瘤芥涪杂2号种子纯度进行检测,为茎瘤芥及其他杂交种纯度鉴定提供参考,也为加快涪杂2号的推广应用打下基础.[方法]以茎瘤芥杂交种涪杂2号、父母本及易混杂植株为试验材料,应用SSR分子标记技术结合改良CTAB法快速提取DNA,进行特异引物筛选及验证,对涪杂2号种子纯度进行快速检测,并对检测结果进行田间表型鉴定.[结果]从80对SSR特异引物中筛选出6对特异性强的引物,其中引物Na14-G06能清晰地扩增出父、母本的特异性条带,并且双亲互补,该引物同时可将杂交种中的异源花粉植株分离出,其余5对引物可将机械混杂植株区分开;两对引物联用Na 14-G06+O11 1-H02、Na 14-G06+Na 14-G 10或Na14-G06+O112-D09能较好区分假杂株.利用所筛选引物对涪杂2号杂交种群体进行SSR检测,检测结果显示种子纯度为95.8%,与田间生物学表现性状检测结果(96.7%)基本一致.[结论]两对引物联用可用于涪杂2号杂交一代种子纯度的快速检测和准确鉴定,SSR分子标记技术应用于茎瘤芥杂交种子纯度检测具有可行性.     

春性双低甘蓝型油菜杂交种和亲本指纹图谱构建及杂交种纯度鉴定

从140对SSR引物中筛选出13对多态性好的引物,构建了14份材料的DNA指纹图谱,筛选出青杂2号、青杂5号共显性SSR标记,检测了青杂2号、青杂5号大田抽样F1群体L15、L41的纯度。结果表明SSR标记鉴定检测方法比大田检测更快更准确。     

基于 SSR 分子标记的‘粤秀 3 号’黄瓜杂交种子纯度及真实性鉴定

【目的】‘粤秀 3 号’黄瓜具有生长势强、产量高、抗病及抗逆性强的特点，是华南地区推广面积较多的品种，本研究以期为其建立一套快速、准确、有效的种子纯度鉴定方法。【方法】利用 200 对 SSR 引物，根据杂种带为父母本互补带型的原则，对‘粤秀 3 号’黄瓜及其亲本进行特异性 SSR 标记物的筛选。将种子纯度鉴定结果与田间生物学鉴定结果进行比较，鉴定所筛选 SSR 引物的准确性。选取‘中农 108’‘园丰 6 号’‘津绿 5 号’‘中农 8 号’‘津研四号’5 个黄瓜品种种子及其他 49 份黄瓜种质材料，与‘粤秀 3 号’黄瓜品种同时检测，对所筛选的 SSR 引物特异性进行鉴定。【结果】从 200 对引物中筛选出符合父母带间成互补带要求的两对 SSR 引物（3B-10 和 2B-41）。3B-10 引物经 PCR 扩增后产生 160 bp 的母本特异条带（P1-A）及 190 bp 的父本特异条带（P2-B），测序比对这两条特异性条带，发现 P2-B 在 49~79 bp 处比 P1-A 多了 5 个 6 碱基的简单重复序列。2B-41 引物经 PCR 扩增后产生 218 bp 的母本特异条带（P1-C）和 206 bp 的父本特异条带（P2-D），经测序比对后发现，与 P2-D 相比，P1-C 在 120~131 bp 处有 12 个碱基的缺失。表明两对 SSR 引物均可有效区分‘粤秀 3 号’杂交种子及其父母本，可快速准确地鉴定‘粤秀 3 号’黄瓜种子纯度。此外，两对 SSR 引物的种子纯度鉴定结果均与田间生物学鉴定结果一致。两对引物均可有效区分‘粤秀 3 号’黄瓜种子与‘中农 108’‘园丰6 号’‘津绿 5 号’‘中农 8 号’‘津研四号’5 个黄瓜品种种子及其他 49 份黄瓜种质资源。但 3B-10 在 49 份种质资源中多态性较高，故 SSR 标记 2B-41 更适用于‘粤秀 3 号’的真实性鉴定。【结论】3B-10 和 2B-41 两对 SSR 引物可快速、准确、有效地对‘粤秀 3 号’杂交种子纯度进行鉴定，鉴定操作较简单、成本较低，可替代传统杂交种子纯度鉴定的方法，其商业应用价值极高。     

辣椒疫霉EST-SSRs标记的发掘

通过对GenBank上发布的55 848条辣椒疫霉EST的鉴定,在328条EST中发现331个SSR.在筛选的EST序列中SSR平均密度为每23.7 kb含有1个SSR.在鉴定的SSR中,三核苷酸重复基元的SSR类型最多,占鉴定总数的59.5%;其次为二核苷酸乖复基元的SSR类型,为39.3%;四核苷酸重复基元的SSR类型最少,为1.2%.设计40对SSR引物对5个辣椒疫霉菌株基因组DNA进行PCR扩增,有27对引物扩增出SSR特征条带,其中有18对引物在5个辣椒疫霉菌株间扩增出多态性条带25条.基于SSR标记进行聚类分析,可将5个检测大豆疫霉菌菌株划分为3类.该研究是辣椒疫霉的SSR标记开发的首次报道,为辣椒疫霉的遗传变异和分子作图等分析提供了一种有效的分子标记系统.     

多花黑麦草DUS测定中SSR标记品种鉴定比较分析

【目的】多花黑麦草是具世界栽培意义的牧草,但因异花授粉特性,育种材料的频繁交流导致品种间的遗传差异越来越小,传统农艺性状进行品种鉴定变得越来越困难。高效、快速有效地鉴定品种对实现育种目标具有重要作用,可为辅助多花黑麦草品种DUS测试和品种鉴定、知识产权保护等提供科学依据。【方法】基于SSR标记具有稳定性强、多态性高和共显性特点,对6个国审骨干多花黑麦草品种采用30株混合取样策略,每个品种以不同单株构成的30株混合样本量进行3次重复试验,以重复试验中至少出现2次的频率高的强带进行统计,从165对多花黑麦草SSR引物中,筛选出20对引物用于多花黑麦草品种鉴定。并采用30株单株样本扩增与30株混合样本扩增相结合的方法,加之扩增结果的比对,进行品种的鉴定分析。【结果】利用13-07A、01-06D和15-08C引物对6个多花黑麦草品种进行30株单株和30株混合取样对比性分析表明,混合株的某些条带相对于单株条带更为明显,且条带数更多,但也易出现一些弥散带,单株扩增中出现频率在40%及以上的条带则会在混合样本中出现;3组混合取样结果表明,20对SSR引物共扩增出143条清晰可辨条带,其中多态性条带127条,多态性条带的比率为88.81%,每对引物扩增的条带数为5-11,平均为7.15条,平均多态性条带为6.35条,平均多态性信息含量（PIC）为0.571,有的引物虽多态性信息含量较低,但稳定性好,3组混合样本扩增结果几乎一致;6个多花黑麦草品种的遗传相似系数范围为0.4755-0.7552,遗传相似系数最大的为邦德和阿德纳,遗传相似系数最小的为长江2号和特高。在平均遗传相似系数为0.615时可以将6个多花黑麦草品种划分为三大类：第Ⅰ类包括安格斯1号、邦德、阿德纳、达伯瑞;第Ⅱ类是长江2号;第Ⅲ类是特高。20对引物中有9对引物可以直接进行6个品种的鉴定,而其余的引物只能鉴别其中的3个或4个,则可通过不同引物的组合提高鉴别能力。【结论】对于异花授粉植物,多态性并非衡量引物有效性的唯一标准,引物稳定性也是衡量引物有效性的重要指标;相对于单株取样法,采用混合取样法进行品种鉴定更为有效;筛选出的20对SSR引物可以明确区分供试材料,采用SSR分子标记对多花黑麦草进行品种鉴定分析具有可行性。     

应用SSR标记技术鉴定玉米杂交种的纯度

以利用常规盐溶蛋白电泳技术难以进行纯度鉴定的强盛1号玉米杂交种及相应亲本自交系和6对玉米SSR位点引物为材料,筛选出适合该杂交种纯度鉴定的SSR位点引物,结果表明,bilg 116引物的扩增产物呈现双亲互补的特征谱带,易于区分杂交种和亲本自交系。并通过对单子粒DNA提取等技术环节的改进,建立了一套简单、快速、准确、可靠的种子纯度鉴定方法。     

利用SSR和SRAP技术分析广西柑橘种质遗传多样性

利用SSR和SRAP 2种分子标记技术对11份广西野生柑橘种质、13份广西地方品种和10份对照品种,共计34份柑橘类材料进行遗传多样性分析,结果表明:选用22对SSR和11对SRAP引物组合进行PCR扩增,依次获得221和215条多态性条带,平均每对引物获得10.1和19.5条多态性条带;SSR聚类图显示34份柑橘种质两两之间的遗传相似系数为0.78~0.96,SRAP聚类显示遗传相似系数为0.60~0.92;2种分子标记基本上能有效地区分宽皮柑橘类、枸橼类、柚类、大翼橙类、宜昌橙类和马蜂柑;同时,广西地区宽皮柑橘类与道县野橘、皱皮柑类与元橘、印度野橘与枸橼类的尤力克柠檬、大种橙与大翼橙类和阳朔金柑、柚类与大翼橙类亲缘关系紧密。     

基于近缘物种SSR引物和EST-SSR序列的梅花SSR引物开发

为获得更多的梅花SSR引物,本研究筛选了84对梅花近缘物种的引物,并从梅花EST数据库的序列中设计了23对EST-SSR引物,用12个梅花品种对这些引物进行了多态性检测。结果表明,近缘物种的引物有69对能扩增出条带,有效扩增率达82.1%,从中筛选的14对引物共得到85个等位基因,平均值为6个。有效等位基因数在2.07...     

48份糯玉米自交系遗传多样性的SSR标记

为分析48份糯玉米自交系的遗传多样性及其之间的遗传关系,利用总DNA提取方法和微卫星分子标记(SSR)技术,取均匀分布各染色体的45对SSR引物对样品进行PCR扩增分析,筛选出23对扩增带型稳定的SSR引物,从供试材料中检测出141个等位基因变异,每对引物检测等位基因2~14个,平均5.48个。SSR引物的PIC介于0.43~0.89,平均多态性信息量为0.66。UPGMA方法聚类分析表明,供试材料间遗传距离变幅为0.26~0.72,平均值为0.49。SSR标记能将全部自交系区分开来,48份糯玉米自交系可分为六类。     

用SSR分子标记检测杂交油菜秦优7号的种子纯度

杂交油菜中的主要杂株类型是母本不育株和父本恢复株。通过对100对SSR引物筛选,获得1对可将杂交油菜秦优7号及其父母本区分开来的SSR引物SA82,扩增产物杂交种表现为父母本的互补带型,在30 g/L的琼脂糖凝胶上显带清晰稳定。通过简化油菜DNA提取方法、优化反应体系、重复使用琼脂糖凝胶等,建立了适用于杂交油菜秦优7号种子纯度检测的SSR技术系统。经对大量油菜杂交种个体进行验证,证明该方法具有很好的重复性、准确性和可靠性,同时具有快速、经济的特点,可用于杂交油菜种子纯度的实际检测。     

柳枝稷种质遗传多样性的SSR分析

利用从本试验32对引物中筛选得到的7对稳定可靠的SSR标记引物,对10份柳枝稷种质材料进行遗传多样性的SSR分析。结果表明：不同种质材料在7个位点的PIC值在0.669～0.881之间,遗传相似系数在0.385 4～0.905 7范围内波动。依据遗传距离和引物,应用非加权组平均法（UPGMA）对材料进行聚类分析,其中引物5211_B07的聚类结果和遗传距离的聚类结果相同：5个登记品种材料和野生种质材料No.2聚为一类,种质间遗传关系较近;其他4份野生种质聚为另一大类。     

PCR-based screening of BAC clones of different chromosomes in Chinese cabbage

In this paper, taking SSR and functional gene sequence as the primers and the plasmid of first- and second-level pools of bacterial artificial chromosome (BAC) library as templates, the PCR method was used for specific clones of different chromosomes in Chinese cabbage. The results showed that the number of positive clones was 1?C11 per primer and the average number of clone was 3.9 by screening 19200 clones of BAC library using 12 pairs of SSR primers from 10 linkage groups individually, which were nearly consistent with about 3.4 times of genome coverage. Positive clones were acquired in chromosome Nos. 2 to 5 and 8 to 10 without screening with the positive clones in chromosome Nos. 1, 6, and 7. In addition, the primer of FLC1 functional gene of chromosome No. 10 was used for PCR screening, and two BAC clones containing FLC1 gene were acquired. Therefore, different specific BAC clones of chromosomes were taken by using SSR primer and functional gene primer. Specific clone screening of chromosomes could provide a probe for identifying the chromosome accurately. Meanwhile, the BAC library screening method was optimized, serving as an effective technical means for quick BAC clone screening.