不结球白菜小孢子胚成苗及倍性变异研究

以不结球白菜小孢子胚为外植体,对胚发育成苗过程中基本培养基、激素配比、基因型及生根条件进行了研究,并对再生植株的染色体倍性进行了鉴定。研究表明：适于小孢子胚芽分化的培养基为B5＋GA30.1 mg/L＋蔗糖3%＋琼脂1.2%,在此培养基上6号、14号、31号的子叶型胚状体的出芽率分别为53.33%,85.24%,75.55%,平均出芽数分别为5.66,3.83,3.28个;为了诱导获得健壮新根,提高植株再生率,最适宜的生根培养基为MS＋IBA 0.1 mg/L＋蔗糖3%＋琼脂0.6%,生根率达100%,平均根数9.70条。对133株再生植株进行了染色体倍性鉴定,结果发现不结球白菜自然加倍率很高,且倍性变异情况比较复杂,其中四倍体植株所占比例最高,达到56.39%,二倍体植株占39.10%,三倍体植株占3.01%,而单倍体植株仅占1.50%。     

菜心小孢子胚再生体系优化及植株倍性鉴定

为进一步优化菜心游离小孢子胚再生技术体系,本研究以3份不同基因型的菜心小孢子胚状体为试验材料,研究不同培养基类型、培养基中不同琼脂浓度和不同胚龄对胚再生的影响,并对再生植株进行倍性鉴定。结果表明,使用B5培养基时各基因型的成苗率均高于MS培养基,褐化率低于MS培养基,B5培养基是菜心小孢子胚状体再生的适宜培养基;培养基中添加适宜浓度的琼脂可提高再生植株的成苗率,随着琼脂浓度的增加,出苗率呈先升后降的趋势,琼脂浓度为1.0%时,各基因型的出苗率达到最高;胚状体再生的最佳胚龄是25～29 d,胚龄时间过长或过短均不利于胚状体出苗,其中40 d以上胚龄的胚状体几乎不出苗;倍性鉴定发现菜心小孢子再生植株中同时存在单倍体、二倍体和多倍体,3个基因型的二倍体自然加倍率在62.22%～71.11%之间;75 mg/L秋水仙素处理可提高菜心再生株系的二倍体率。本研究为菜心游离小孢子胚再生体系优化及再生植株倍性鉴定提供了技术基础。     

黑农51子叶节和胚尖再生体系的建立及优化

为建立一个高效的大豆再生体系用于大豆的遗传转化,选用黑农51的子叶节和胚尖作为外植体,建立了黑农51的子叶节和胚尖再生体系,并研究了6-BA和IBA对大豆再生的影响。结果表明,黑农51子叶节最适芽诱导培养基为MSB5+1.0 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA,最适生根培养基为MSB5+1.0 mg/L IBA;胚尖最适芽诱导培养基为MSB5+0.4 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,最适生根培养基为MSB5+2.0 mg/L IBA。黑农51子叶节再生体系的出芽率、出芽数、芽伸长数和生根率四个指标均高于胚尖再生体系,更适合作为遗传转化的受体材料。     

薄荷叶片离体再生体系的建立

本试验以薄荷试管苗叶片为外植体,研究了激素、光照、褐变抑制剂对不定芽诱导的影响,进而筛选出合适的生根培养基。研究结果表明:薄荷叶片最佳不定芽诱导的培养基为MS+1.4 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+5.5 g/L琼脂,诱导率达27.78%;暗培养20 d后再转接一次,叶片不定芽诱导率提高至64.29%,褐化率低至11.90%;最佳生根培养基为MS+0.1 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+5.5 g/L琼脂,生根率达97.50%;再生苗经生根、炼苗后移栽,植株成活率达100%。本试验建立了薄荷叶片离体再生体系,为薄荷无菌苗生产和遗传转化研究提供了技术支撑。     

魔芋愈伤液体培养与植株再生的研究

以魔芋颗粒状愈伤组织为试材,进行了液体培养及植株再生诱导的探讨。结果表明,MS BA 1.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L 蔗糖30 g/L 琼脂6.0 g/L培养基适合从芽鞘诱导颗粒状愈伤组织。获得的愈伤组织切割成0.3cm左右在MS BA 0.05 mg/L NAA 0.1 mg/L 蔗糖30 g/L PVP 1.0 g/L液体培养基中振荡培养,建立液体培养体系。液体培养材料的生长曲线呈上升的半抛物线型,从第6天到第12天期间增重占整个培养周期增重的80%以上,随着液体培养材料的生长,培养液pH值上升。将液体培养12 d的材料转到1/2MS BA 0.6 mg/L NAA 0.1 mg/L 葡萄糖30 g/L 维生素C100 mg/L 琼脂6.0 g/L培养基上,进行愈伤组织的分化培养;然后将长到出叶期的大芽切割转入到1/2MS NAA 0.1 mg/L 蔗糖30 g/L 琼脂6.0 g/L生根培养基诱导生根,形成再生植株。     

杂花苜蓿高效再生体系的建立

通过对新疆塔城杂花苜蓿品种下胚轴再生植株的系统研究，经筛选获得种子萌发培养基为：1／2MS无糖培养基；胚性愈伤组织诱导培养基：MS＋2，4-D2mg／L＋6-BA0．5mg／L＋蔗糖3％。胚性愈伤组织诱导率为100％；胚状体诱导培养基：SH＋2，4-DZing／L＋6-BA0．5mg／L＋CH250mg/L＋蔗糖1％，胚状体诱导率为86．96％；胚状体萌发培养基：SH＋GA30．5mg／L＋CH250mg／L＋蔗糖1％，胚状体萌发率为90％-95％；生根培养基：1／2MS＋IBA0．5rag／L＋蔗糖1％。生根率为100％。完成再生时间120d左右。     

顶坛花椒组织培养再生体系的建立

为建立顶坛花椒组培再生体系,以贵州地方品种顶坛花椒的未成熟果实为外植体,研究不同浓度细胞分裂素(6-BA)和生长素(2,4-D)组合对珠心组织诱导的影响,并对其再生培养过程进行了研究。结果表明,MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.4 mg/L为珠心组织初期培养和胚状体诱导的最佳培养基,WPM+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L为最佳分化培养基,1/2WPM+IBA 0.2 mg/L为生根培养基。以流式细胞仪对再生植株进行染色体倍性分析,结果表明珠心组织再生植株与母株染色体倍性一致,均为二倍体。     

甘蓝未受精子房离体培养及再生植株倍性的鉴定

甘蓝通过未受精子房离体培养诱导获得的再生植株,对再生植株的倍性进行有效的鉴定是将其进一步应用于优良品种选育的基础。本研究利用3种基因型的甘蓝材料(PMQM、QMF、RMQM)培育再生植株,优化甘蓝未受精子房离体培养体系,并通过形态学鉴定法、根尖染色体计数法、流式细胞仪鉴定法对组培植株进行倍性鉴定。结果表明:在0.4 mg/L ZT的分化培养基中,3种基因型材料的愈伤组织分化率明显高于1.0 mg/L 6-BA培养基中的组培苗,其中基因型RMQM的分化效果最好;最终确定诱导愈伤组织分化不定芽的最适培养基配方为MS+0.4 mg/L ZT+2.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA,且通过3种鉴定方法,得出再生植株倍性:单倍体3.4%,双倍体49.8%,四倍体15.9%,嵌合体35.3%。     

巴戟天胚乳诱导愈伤组织及三倍体再生

目的:利用巴戟天种子内胚乳为外植体进行离体培养获得三倍体。方法:选取未成熟巴戟天种子内胚乳,置于不同培养基上诱导愈伤组织和分化再生植株,并对植株倍性进行根尖染色体鉴定。结果:在MS+2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)2.0 mg/L+6-BA(6-苄基嘌呤)1.0 mg/L培养基上诱导获得愈伤组织,诱导频率达58.9%。愈伤组织在MS+6-BA1.0~2.0 mg/L+IBA 0.1~0.5 mg/L分化培养基上分化出不定芽。不定芽在1/2 MS+IBA 0.5 mg/L上诱导生根,生根率100%。再生植株根尖细胞染色体数目为2 n=3 x=33。结论:利用巴戟天胚乳培养获得三倍体是创造多倍体新种质的有效途径。     

活性炭对小白菜游离小孢子培养的影响

以24个小白菜品种为材料,通过在NLN培养基中添加不同浓度活性炭,研究其对游离小孢子培养的影响.结果表明:在NLN-13培养基中添加活性炭(0.5 g/L),有利于小孢子胚的诱导和形成,供试材料(N4,N8)添加活性炭处理胚诱导率较未添加活性炭的处理分别提高19,66.5倍.采用添加活性炭(0.5 g/L)的NLN培养基对24份小白菜品种进行游离小孢子培养,有20份材料诱导出胚,培养成功率为83.3%.表明添加活性炭的培养基对小白菜游离小孢子培养有较好的效果.不同基因型间胚诱导率差别较大,每花蕾诱导胚数为0.4～86.7个.依据胚诱导率的高低可将其分为极易诱导、易诱导、难诱导和不能诱导出胚4类.B5 6-BA 0.2 mg/L NAA 0.02 mg/L 活性炭0.5 g/L 3%蔗糖 1%琼脂培养基有利于幼胚长成植株.