24个水稻抗稻瘟病单基因鉴别品系悬浮细胞系的建立

以IRRI-Japan24个水稻抗稻瘟病单基因鉴别品系和对照普感品种丽江新团黑谷（LTH）的成熟种胚为材料诱导愈伤组织,诱导过程中发现不同基因型愈伤组织诱导能力差异极大,愈伤组织诱导率在14．3％-97．1％,将2,4-D浓度从3．0mg／L提高到5．0mg／L时,可提高愈伤组织诱导率。经诱导成功的水稻愈伤组织继代培养一段时间后,不同基因型的愈伤组织继代特性出现明显差异,选取生长状态良好的单株系愈伤组织建立了水稻悬浮细胞系。悬浮培养过程中对胚性悬浮系的细胞形态变化进行了观察。发现细胞的形状由开始的不规则、长条形逐渐转交成近椭圆形、椭圆形;细胞质由很淡、透明、具明显的大液泡逐渐转变成浓厚、不透明、较小的液泡。大多数品系的单细胞率由30％-40％提高到60％～90％。本研究通过努力,建立了14种单基因型水稻材料的稳定悬浮细胞系,构建过程中发现基因型、继代培养特性、愈伤组织类型选择是影响胚性悬浮细胞系建立的重要因素。该悬浮细胞系的建立为进一步研究稻瘟菌分泌蛋白与水稻细胞互作的生化机理奠定基础。     

人参果组织培养技术研究

以人参果的幼嫩茎段和叶片作外植体,在MS基本培养基附加不同浓度6-BA+IAA,6-BA+NAA和KT+2,4D组成的固体培养基中进行培养。结果显示:MS+6-BA 0.07mg/L+IAA 0.03mg/L,MS+6-BA 0.70mg/L+IAA 0.03mg/L,MS+6-BA 0.70mg/L+IAA 0.05mg/L,MS+6-BA 1.00mg/L+IAA 0.05mg/L 4种培养基中的材料愈伤组织长势比较好,分化明显。经继代培养,丛生芽大量形成,丛生苗根系发达。其他培养基则停留在愈伤组织阶段或只长出极少数短的根。     

水稻细胞悬浮系及其单细胞培养的研究

以水稻的不同遗传型材料的幼穗为外植体诱导愈伤组织,通过继代培养,最终筛选出了来自于品系“１４５”的胚性愈伤组织．在附加１．５～２．０ｍｇ／ｌ２,４—Ｄ的ＮＭＢ固体培养基上继代７次后,转入同种液体培养基上进行悬浮继代培养,由此形成的悬浮系是由单细胞和小细胞团组成的．倒置显微镜下几乎观察不到管形细胞,细胞的成活率达９０％以上．未发现酵母抽提物对细胞悬浮培养具有促进作用．在液体培养基中附加６００ｍｇ／ｌ的肌醇能够大大提高愈伤组织的分散程度,从中分离出的单细胞经初步培养再生了愈伤组织．     

虎尾兰的组织培养技术研究

虎尾兰(Sansevieria trifasciatavar.harnii)是龙舌兰科虎尾兰属植物,不但具有观赏价值,还有较高的营养价值,并且有净化空气的功效。为了在短时间内获得大量的虎尾兰植株,以短叶虎尾兰的叶片为外植体进行组织培养试验,采用组织培养育苗方法,建立从愈伤组织到再生植株的培养体系。结果表明,基本培养基为MS;诱导愈伤的最佳PGR浓度配比为1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-12,4-D;诱导芽的最佳PGR浓度配比为1 mg·L-16-BA+0.8 mg·L-1NAA;诱导生根的最佳PGR浓度为0.1 mg·L-1NAA。     

桔梗组织培养技术的研究

研究桔梗组织培养的最适条件。以MS为基本培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA,诱导桔梗茎段外植体的再生植株,结果表明:MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L,是诱导外植体产生愈伤组织的最佳培养基配方,诱导率高,在继代培养时,以MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L为培养基能获得较高的分化率,生根培养基以1/2 MS+NAA 0.5mg/L为最佳。     

苜蓿组织培养和再生体系研究

以农菁一号苜蓿和肇东苜蓿无菌苗幼叶和茎段为外植体,在含6-BA和NAA的MS培养基中诱导出愈伤组织,并通过外植体直接再生途径和胚性愈伤组织再生途径获得再生芽。在含有IBA的1/2MS培养基诱导再生苗生根。     

丰花月季愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养

分别以丰花月季叶片、叶柄和茎段为外植体诱导出愈伤组织,并建立细胞悬浮系。结果表明,丰花月季叶片和茎段是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体;诱导松散型愈伤组织的最佳激素浓度配比是NAA 4 mg·L-1+2,4-D 1 mg.L-1+BA 1 mg.L-1;细胞悬浮培养细胞最佳起始密度为1.5×104～3.0×104个.mL-1时;继代培养4～5代时,可得到稳定的悬浮细胞系。     

福建省水稻新品种对稻瘟病菌的抗性鉴定与评价

2004~2005年对福建省18个水稻新品种进行了苗期人工接菌和田间病圃自然诱发抗稻瘟病鉴定。结果表明,参试品种对1996年以前分离的稻瘟病菌株群体抗性水平高于2003和2004年分离的稻瘟病菌株。不同水稻产区采集的菌株对水稻新品种致病性有差异,以福建省的宁德、三明、龙岩三个地区的菌株致病性较强,水稻新品种室内苗瘟和田间穗颈瘟的鉴定结果较为一致。通过分析,认为宜香优673、D优15和冈优148三个水稻新品种抗病性较好,可考虑在生产上示范应用。     

感染叶锈菌的小麦细胞间隙液对小麦悬浮细胞程序性死亡的诱导

以小麦悬浮细胞为材料,分别用感染叶锈菌小种165的小麦细胞间隙液(IWF165)和未接菌的小麦细胞间隙液(IWFck)对其进行处理,处理后不同时间点取样进行形态学观察和DNA电泳。结果表明,用IWF165处理后的悬浮细胞可观察到明显的染色质凝聚化、边缘化和细胞核解体等现象;同时DNA电泳结果显示IWF165处理后的细胞基因组DNA发生降解并形成明显的DNA梯状条带。而用IWFck处理的悬浮细胞,其细胞核结构完整,染色质分布均匀;DNA电泳没有出现DNA梯状条带。在感染叶锈菌的小麦细胞间隙液中存在着激发子,它能够诱导小麦悬浮细胞发生程序性死亡。     

太行菊细胞悬浮培养体系的建立

以太行菊(Opisthopappus taihangensis)作为试材,进行了细胞悬浮培养的初步探讨.结果表明,试管苗茎段诱导愈伤组织最适培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1,诱导出的愈伤组织生长迅速,且排列紧密质地松软适合进行细胞悬浮培养....     

黑暗培养条件下甘薯悬浮细胞黄酮类物质积累的初步研究

    为了研究甘薯悬浮培养细胞黄酮类物质的积累,利用甘薯块根诱导愈伤组织,在黑暗条件下建立悬浮细胞培养体系,通过测定细胞密度和黄酮类物质含量来确定甘薯悬浮细胞的培养条件.结果表明,甘薯悬浮细胞黄酮类物质的含量同甘薯的块根(0.69%,干重)相当,各种培养条件下的平均值为0.64%;理论最佳培养条件为:用添加2.0 mg·L-1 2,4-D的固体MS培养基诱导愈伤组织,经多次继代培养后,在接种量为2 g·20 mL-1、2,4-D为2.0 mL-1的液体培养基中进行摇悬浮培养,其悬浮细胞黄酮类物质的含量达到0.79%.     

活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎染色体数目的影响

小鼠体内发育的囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的囊胚、扩张囊胚的染色体数目分别是39．00，38．43和42．47，39．56．经统计分析。体内与体外CZB培养的染色体数目无显著性差异．体外CZB培养的不同时期添加外源性H2O2，发育至囊胚、扩张囊胚阶段，制作胚胎标本，观察胚胎的染色体数目．结果显示：扩张囊胚的0～72h组的染色体数目与对照组的染色体数目有显著性差异（P〈0．05），而其它各发育阶段的各处理组染色体数目之间均无显著性差异．说明经H2O2处理之后存活下来的胚胎与正常体外发育的胚胎染色体数目没有差异．     

海巴戟天愈伤组织诱导及细胞悬浮培养试验

以海巴戟天叶脉作为外植体,在B5 培养基上诱导出淡黄色、疏松愈伤组织,通过增殖后接种到液体培 养基中,建立细胞悬浮培养体系,并对影响细胞悬浮培养的培养基种类、接种量、pH 值、蔗糖含量等因素进行了研 究。结果表明院B5 + 1 mg/L 2,4-D + 0.1 mg/L 6-BA 能诱导出淡黄色、质地疏松的愈伤组织;较佳愈伤组织增殖培养 基为B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT;细胞在B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT 培养基中悬浮培养,接种量60 g/L（细 胞鲜重）、蔗糖4%、pH 值5.8、100 r/min、27益下暗培养,海巴戟天悬浮细胞比生长速率为0.0836 d-1,总蒽醌含量 367.8 mg/L,培养周期27~30 d。     

氮、钾、硅肥对水稻苗生长和抗瘟性的影响

通过温室稻瘟病菌人工接种法,研究了氮、钾、硅肥5个不同用量对3个不同抗瘟水平的水稻品种幼苗生长及病情指数的影响。结果表明,与未施肥的对照相比,增施氮、钾肥能明显促进水稻的生长,增加叶长和叶宽。氮肥用量与水稻品种特优627(R)、D奇宝优527(MR)和汕优63(MS)苗瘟病指有显著的正相关关系,钾肥和硅肥用量与品种汕优63苗瘟病指有显著的负相关关系,3个水稻品种的叶宽与苗瘟病指有极显著的正相关关系。增施氮肥有利于苗瘟的发生,而增施钾肥和硅肥能提高中感品种的抗瘟性。     

水稻品种对稻瘟病的抗性分析和利用评价

采用生物间遗传学关于毒力频率和联合致病性分析的方法,用67个稻瘟病菌菌株对35个水稻品种的抗瘟性进行了鉴定和评价。毒力频率较低(<20%)的有两优培九、金优77、汕优晚3、汕优63、Ⅱ优63、早丝苗、汕优10号、威优晚3、9003、金优402、安两优402、汕优647、嘉育948和优Ⅰ402等。联合抗病性系数在0.70以上(含0.70)的两两组合有101对,其中有17对搭配的联合毒性系数为0,即稻瘟病菌不会同时对搭配的双方致病。联合抗病性系数在0.80以上(含0.80)的组合有12对,这12对组合的联合毒性系数为0~0.03,这些两两搭配的双方均对田间稻瘟病菌群体具有较高的抗病性,被评价为高抗稻瘟病的搭配,可以在生产推广中搭配使用。     

活性氧(ROS)对小鼠胚胎分裂指数的影响

小鼠体内发育的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚的分裂指数分别为5．85，4．64，2．16，4．96和6．25，508，2．77，3．03．经统计分析，体内与体外CZB培养的胚胎分裂指数无显著差异，说明体内发育的胚胎和体外CZB培养胚胎的有丝分裂增殖能力没有差异．体外CZB培养的不同时期添加H2O2的胚胎，发育至桑椹胚、早期囊胚、扩张囊胚阶段，制作胚胎标本，胚胎的分裂指数显示：扩张囊胚的0～72h组的分裂指数与0～12h，24～36h组有显著差异（P〈0．05），而与其它各发育阶段的各组分裂指数均无差异，说明经H2O2处理之后存活下来的胚胎与正常体外发育胚胎的有丝分裂增殖能力没有差异．