胰岛素和FSH对体外培养猪卵泡颗粒细胞雌激素的影响

旨在研究胰岛素(Insulin)和促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)对猪卵泡发育过程的影响。猪屠宰后收集卵巢,选择健康卵泡并分离颗粒细胞(Granulesa cells,GCs),设定对照组和重复组,胰岛素、FSH浓度梯度下Long-term体外培养,7d后显微镜观察细胞增殖情况并计数,竞争法测定雌激素(E_2)浓度。数据分析表明:当FSH为0ng·mL~(-1)时,随着胰岛素浓度的增加,猪卵泡GCs细胞密度增加,细胞计数显示GCs数量呈上升趋势,且胰岛素浓度为100ng·mL~(-1)时,细胞数量最高(P0.05);当胰岛素为0ng·mL~(-1)时,随着FSH浓度的增加,细胞密度增加,细胞计数显示GCs数量呈上升趋势,且FSH浓度为5和25ng·mL~(-1)时,细胞数量显著高于其它两组(P0.05);E_2测定结果显示,当FSH为0ng·mL~(-1),胰岛素为100ng·mL~(-1)时,培养液E_2浓度显著高于他不同浓度胰岛素组(P0.05);当FSH为1ng·mL~(-1),胰岛素为10ng·mL~(-1)时,培养液E2浓度最高,但与不同浓度胰岛素各组差异不显著(P0.05);FSH浓度为5和25ng·mL~(-1)时,不同浓度胰岛素各组之间E_2浓度差异不显著。猪卵泡发育过程中,胰岛素和FSH均有促颗粒细胞增殖和E_2分泌的能力,FSH超过一定生理浓度会降低卵泡颗粒细胞分泌E_2。     

神经生长因子对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响

本研究旨在探索神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。试验建立了小鼠卵巢颗粒细胞的原代培养体系,并通过免疫荧光技术对颗粒细胞进行鉴定和检测NGF及其受体在卵巢颗粒细胞上的表达,采用MTS法检测不同浓度的NGF对昆明小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。卵巢颗粒细胞在10、50、100、500 ng/mL NGF作用24 h,用酶标仪测定细胞D_{490 nm}值,试验组与对照组相比均有促进增殖的影响（P<0.05）,50 ng/mL NGF试验组与对照组相比差异极显著（P<0.01）。结果表明,NGF在昆明小鼠的卵巢颗粒细胞中有表达,在一定浓度范围NGF可以促进卵巢颗粒细胞的增殖。     

BMP15对藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

为探究骨形态发生蛋白15(Bone Morphogenic Protein 15,BMP15)对体外培养的藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响，研究体外分离、培养并鉴定藏鸡等级卵泡F1颗粒细胞后，用0、25、50、100 ng/mL四种不同浓度的BMP15蛋白单独处理或者联合25 ng/mL促卵泡素（FSH）处理细胞，72 h后采用ELISA法检测不同处理组细胞培养液中的孕酮含量。同时，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测不同处理组细胞中孕酮合成关键基因StAR、CYP11A1和HSD3B1 mRNA相对表达量。结果显示：免疫组化法鉴定体外分离培养的藏鸡F1卵泡颗粒细胞卵泡刺激素受体（FSHR）抗体阳性率95%以上；BMP15单独处理细胞后，随着BMP15浓度的升高，孕酮分泌量呈下降的趋势，且100 ng/mL处理组的孕酮分泌量极显著低于其他组（P<0.01）;BMP15联合FSH处理细胞后，随着BMP15浓度的升高，孕酮分泌量呈现上升的趋势，其中100 ng/mL处理组的孕酮分泌量极显著高于其他组（P<0.01）；不同处理组细胞中孕酮合成关键基因StAR、CYP1...     

Kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞的表达及功能研究

为明确kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞的表达和功能,本试验首先利用免疫荧光技术研究了kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞的表达,随后利用MTT和ELISA技术研究了不同浓度的kisspeptin-10(Kp10)对牛卵巢颗粒细胞增殖和孕酮分泌的影响。结果表明,kisspeptin在牛卵巢颗粒细胞有表达,10、100、1 000nmol/L的Kp10处理24h,均可以极显著提高牛卵巢颗粒细胞活力(P0.01);100nmol/L的Kp10处理24、72h,可极显著提高牛卵巢颗粒细胞的活力(P0.01),但处理48h未能显著提高细胞活力(P0.05)。100nmol/L的Kp10处理24h,可显著提高牛卵巢颗粒细胞孕酮的分泌水平(P0.05),而10、1 000nmol/L的Kp10对孕酮分泌无显著影响(P0.05)。研究结果提示kisspeptin可促进牛卵巢颗粒细胞增殖和孕酮分泌。     

维生素E通过间隙连接蛋白Cx43对牛颗粒细胞凋亡及增殖的影响

本研究旨在研究维生素E对间隙连接蛋白Cx43的影响和其对牛颗粒细胞增殖与凋亡的作用及其机制。将从牛卵巢中分离获得颗粒细胞进行体外培养,用不同浓度的维生素E (0、25、50、100、200、500 μmol/L)处理细胞24 h。采用流式细胞术检测颗粒细胞的凋亡率、实时荧光定量PCR法检测凋亡标志基因BCL2/BAX、P53及Cx43 mRNA的表达变化、CCK8法检测颗粒细胞的增殖变化。结果表明:流式细胞术检测显示,与对照组相比,体外培养过程中添加100 μmol/L维生素E可显著抑制颗粒细胞凋亡(P<0.05),实时荧光定量PCR检测显示维生素E能引起BCL2/BAX、P53及Cx43基因表达显著变化(P<0.05),CCK8检测显示维生素E处理细胞24和36 h时可以显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05)。此研究结果为深入解析维生素E通过影响颗粒细胞增殖、凋亡进而影响卵母细胞发育、成熟的机制及提高雌性动物繁殖能力提供了理论依据。     

抑制素对绵羊颗粒细胞雌激素和孕酮分泌及相关基因表达的影响

本试验旨在研究RNA干扰抑制素α亚基(Inhibinα-subunit,INHα)基因和添加抑制素A(InhibinA)对绵羊颗粒细胞雌激素(Estrogen,E2)和孕酮(Progesterone,P)分泌及相关基因表达的影响,以探索抑制素在绵羊颗粒细胞E2和P分泌中的作用。从1.0~1.5岁小尾寒羊的卵泡(3~7mm)中分离培养颗粒细胞,分为2个处理组:干扰组(脂质体介导法转染颗粒细胞)和InhibinA添加组(200ng·mL~(-1))。利用ELISA试剂盒检测E2和P的分泌,荧光定量RT-PCR检测E2和P的分泌相关基因(CYP11、3β-HSD和CYP19)的表达量。结果表明,与对照组相比,干扰组siRNA转染颗粒细胞48h后,INHα基因的抑制率达87%,E2和P的分泌量显著降低(P0.05);InhibinA添加组E2和P的分泌水平显著升高(P0.05);干扰组3β-HSD和CYP19的mRNA表达量显著降低(P0.05),CYP11的表达量显著升高(P0.05);InhibinA添加组CYP19、CYP11和3β-HSD的mRNA表达水平均显著升高(P0.05)。综上表明,抑制素在绵羊颗粒细胞中起关键调控作用,通过调节绵羊颗粒细胞类固醇激素的分泌参与调控卵泡发育和排卵过程。     

胰岛素、催乳素和氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在探讨胰岛素(A)、催乳素(B)和氢化可的松(C)三种泌乳激素对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响。将正常的荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,采用L9(34)正交试验设计,以无血清无激素培养基作为对照,研究了在培养液中添加不同浓度的三种泌乳激素组合对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响。结果表明,泌乳激素的添加能够促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖,48 h之前,A2B3C1组合最有利于奶牛乳腺上皮细胞的增殖,60 h之后最优组合为A3B2C1即50 ng/mL催乳素、500 ng/mL胰岛素和0.1 ng/mL氢化可的松,三种激素对试验结果影响的主次顺序为A>C>B;泌乳激素对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响不大,但A1B2C2,即500 ng/mL催乳素、50 ng/mL胰岛素和0.1 ng/mL氢化可的松组能减少凋亡细胞数量。说明,在正常的奶牛乳腺中,泌乳激素主要是通过促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖为进一步的泌乳和乳品质的提高奠定坚实的生理基础。     

添加外源激素FSH对绵羊卵丘颗粒细胞增殖的影响

为了分析外源激素促卵泡激素(FSH)对绵羊卵丘颗粒细胞增殖的影响,试验分离并体外培养了绵羊卵丘颗粒细胞,然后使用促卵泡激素受体(FSHR)免疫组织化学法鉴定了分离培养的细胞,进而分析了添加不同浓度FSH对细胞增殖速度的影响。结果表明:将卵丘颗粒细胞从卵丘颗粒细胞-卵母细胞复合体(COCs)上分离24 h之后,能够观察到部分卵丘颗粒细胞开始贴壁,传代之后细胞形态未发生明显变化。FSHR免疫组织化学法鉴定结果证明分离培养的绵羊卵丘颗粒细胞能够特异性地表达FSHR。培养基中添加FSH后,在培养前4 d,高浓度(100 ng/mL)和低浓度(10 ng/mL)的FSH均能促进卵丘颗粒细胞的增殖,但在培养6 d之后,高浓度的FSH对卵丘颗粒细胞的增殖存在抑制作用。说明外源激素FSH在不同浓度下对卵母颗粒细胞的增殖具有不同的影响。     

17β雌二醇对鸡胚原始生殖细胞体外培养的影响

为探讨17β雌二醇（E2）对体外鸡胚原始生殖细胞（EPGC）发育的影响,采用EDTA 胰酶解离法获得第28期鸡胚性腺中的PGCs,依据差速贴壁原理分离纯化PGCs,然后置于添加不同浓度 （0、5、10、20 ng/mL）17βE2的培养液中进行培养。结果显示,5 ng/mL 17βE2添加组与0 ng/mL 17βE2对照组相比,PGCs的发育能力无显著差异,而10 ng/mL和20 ng/mL 17βE2两添加组与0 ng/mL及5 ng/mL组相比,PGCs的发育能力差异显著（P<0.05）。但是,10 ng/mL和20 ng/mL 17βE2两添加组相比,PGCs的发育能力无显著差异。由此说明在体外环境中,一定浓度的17βE2（10 ng/mL、20 ng/mL）可促进鸡原始生殖细胞的发育。     

SMAD7对山羊卵泡颗粒细胞增殖、凋亡的影响

旨在探究SMAD7对山羊卵泡颗粒细胞增殖和凋亡的影响。本试验收集3~4月龄大足黑山羊母羊的卵泡颗粒细胞,通过过表达或siRNA干扰、ELISA、qRT-PCR、Western blot及流式细胞术等技术与方法探究SMAD7对颗粒细胞增殖、凋亡及类固醇激素分泌的影响。结果发现,SMAD7过表达显著下调颗粒细胞增殖活力并促进细胞凋亡,抑制PCNA表达（P<0.05）,下调BCL2/BAX的比值（P<0.01）;同时,SMAD7干扰显著上调颗粒细胞增殖活力,显著上调PCNA表达（P<0.05）与BCL2/BAX表达量比值（P<0.05）。SMAD7过表达极显著上调颗粒细胞的孕酮分泌,下调雌二醇表达水平（P<0.01）;同时SMAD7干扰极显著下调孕酮分泌,上调雌二醇分泌（P<0.01）。进一步研究发现,SMAD7过表达显著抑制SMAD2、SMAD3的mRNA和蛋白表达（P<0.05）;SMAD7干扰则显著促进SMAD2、SMAD3的mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结果表明,SMAD7抑制山羊卵泡颗粒细胞的增殖和雌二醇分泌,促进凋亡和孕酮的合成,并且抑制SMAD2、SMAD3的表达,进而调节卵泡的发育与闭锁。     

维生素E对蛋种鸡卵巢等级前颗粒细胞增殖的影响

通过对蛋种鸡颗粒细胞进行原代培养,研究维生素E(VE)对颗粒细胞增殖的影响.取海兰褐蛋种鸡颗粒细胞,培养7d,观察细胞的生长趋势,确定VE干预方案.细胞培养24 h后,开始VF的干预,试验分为6组,每组分别以含VE 0、10、50、150、200和250 mg/L培养液培养,每组3个重复,连续培养24、48、72 h后,用MTT法进行细胞增殖检测.结果显示:颗粒细胞体外培养的适应期为1d,3d细胞数量达到高峰,之后细胞进入停滞衰退期.VE干预后48 h内,各组细胞增殖率随VE浓度的增加而升高,72 h时,与对照组相比,10 mg/L组细胞增值率基本不变,其他各组随着剂量的升高有降低趋势.结果表明,维生素E能够促进体外培养颗粒细胞增殖,降低细胞凋亡率.     

GDF9对绵羊卵丘细胞增殖的影响

本试验旨在探究生长分化因子9（GDF9）对卵丘细胞扩展相关基因和激素受体基因表达量及激素分泌的影响,为GDF9在绵羊卵泡发育中的作用提供依据。以绵羊卵丘细胞为研究对象,通过在低血清细胞培养液中添加不同浓度（0、50、100、200、400 ng/mL）的GDF9,培养绵羊卵丘细胞48 h后,提取细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术,以β-actin为内参基因,检测卵丘细胞扩展相关基因透明质酸合酶2（HAS2）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、穿透素3（PTX3）及激素受体相关基因卵泡刺激素受体（FSHR）、促黄体生成素受体（LHR）和雌激素受体（E₂R）的mRNA相对表达量;利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇（E₂）和孕酮（P₄）含量。结果显示：在细胞培养液中添加200 ng/mL GDF9时,HAS2、PTX3、FSHR、E₂R和LHR的mRNA相对表达量极显著高于对照组与其他处理组（P<0.01）;PTGS2 mRNA相对表达量极显著高于对照组、50和400 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组（P<0.05）。当添加400 ng/mL GDF9时,各基因mRNA相对表达量均极显著低于200 ng/mL GDF9组（P<0.01）;E₂分泌量极显著高于对照组与50 ng/mL GDF9组（P<0.01）,显著高于100 ng/mL GDF9组,与200 ng/mL GDF9组差异不显著（P>0.05）。100、200和400 ng/mL GDF9组P₄分泌量显著高于对照组（P<0.05）,与50 ng/mL GDF9组没有显著差异（P>0.05）,且3组之间差异不显著（P>0.05）。综上所述,GDF9能够促进绵羊卵丘细胞扩展,并参与绵羊卵丘细胞激素分泌的调控。     

脂多糖对体外培养猪颗粒细胞增殖、凋亡和雌二醇分泌的影响

旨在探讨脂多糖(LPS)对猪颗粒细胞增殖、凋亡及雌二醇(E_2)分泌的影响。采用不同浓度的LPS(0、500、1 000和2 000ng·mL~(-1))处理体外培养的猪颗粒细胞,并测定细胞增殖、凋亡及相关基因FN1、IGF2、IGFBP2、Cyclin D1、Cyclin D2和P27~(kip)的表达,同时对E_2的分泌及P450arom的表达进行检测。结果表明,1 000或2 000ng·mL~(-1) LPS均可显著促进颗粒细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高活细胞百分率(P0.05)。而500ng·mL~(-1) LPS即可促进与细胞生长增殖、周期相关基因FN1(P0.01),IGF2、IGFBP2(P0.05),Cyclin D1、Cyclin D2(P0.01)的表达,抑制阻碍细胞周期的基因P27~(kip)(P0.01)的表达,同时可以通过强烈抑制芳香化酶P450arom基因的表达(P0.01),显著抑制E_2的分泌(P0.01)。综上表明,LPS可以促进颗粒细胞增殖并抑制细胞凋亡,同时抑制颗粒细胞分泌E_2的功能。     

胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞生长及κ-酪蛋白和胰岛素受体基因表达的影响

本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞生长及κ-酪蛋白(CSN3)和胰岛素受体(INSR)基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞进行体外培养,在以无血清无激素的生长培养基为对照的基础上,分别添加胰岛素5、50、500和5 000 ng/mL,测定CSN3和INSR基因表达量以及CSN3相对含量的变化。结果表明:1)胰岛素能够促进乳腺上皮细胞的增殖,其中5～500 ng/mL的胰岛素促增殖作用较好。2)胰岛素能提高乳腺上皮细胞CSN3、INSR基因表达量和CSN3相对含量,50 ng/mL组CSN3基因表达量和CSN3相对含量均显著或极显著高于对照组(P<0.01)以及5(P<0.01)、500(P<0.01)和5 000 ng/mL组(P<0.05),INSR基因表达量显著或极显著高于对照组(P<0.05)以及500(P<0.05)和5 000 ng/mL组(P<0.01)。结果提示,随着胰岛素浓度的增加,CSN3和INSR基因的表达量及CSN3相对含量均呈先增加后下降的趋势,50 ng/mL时最高,而高浓度(5 000 ng/mL)的胰岛素不利于奶牛乳腺上皮细胞合成乳蛋白。     

外源激素对体外培养家蚕造血器官造血功能的影响

采用已建立的家蚕(Bombyx mori)造血器官(HPO)体外培养系统,研究了2种蜕皮激素ecdysone和20-hydroxyecdysone(20E)以及保幼激素类似物methoprene对体外培养的家蚕HPO造血功能的调节作用。添加0.005~0.5μg/mL20E可促进5龄第2天幼虫(V-2)HPO的血细胞增殖和释放,但会抑制熟蚕开始时期(W-0)HPO的血细胞增殖和释放;添加低浓度(0.036 5μg/mL)ecdysone可以促进V-2和W-0期HPO的血细胞增殖及释放,高浓度(0.365~3.650μg/mL)ecdysone对血细胞增殖无促进作用,但有促进血细胞释放作用;添加低浓度(2μg/mL)methoprene不会阻止HPO的血细胞增殖,但抑制血细胞的释放,高浓度(20~200μg/mL)methoprene可抑制HPO的血细胞增殖和释放。此外,0.036 5μg/mL ecdysone与2μg/mL methoprene共同处理时,ecdysone可以掩盖methoprene抑制血细胞释放的作用。研究结果表明,ecdysone和20E对家蚕HPO的造血功能起促进作用,而methoprene则起抑制作用,ecdysone可以拮抗methoprene抑制血细胞释放的作用。     

OPN5对鸭颗粒细胞凋亡、增殖及类固醇激素生成的影响

旨在研究视神经蛋白（neuropsin,OPN5）对鸭颗粒细胞凋亡、增殖及类固醇激素生成的影响。本研究分别对鸭颗粒细胞进行OPN5过表达质粒和OPN5 siRNA处理72 h （n=6）,应用EdU细胞增殖检测技术、流式细胞技术、Annexin V-FITC、RT-PCR、Western blot及ELISA技术系统地检测颗粒细胞的增殖、凋亡情况及生殖相关基因的mRNA、蛋白水平及激素水平的变化规律。结果显示,OPN5过表达能促进鸭卵泡颗粒细胞增殖,抑制鸭卵泡颗粒细胞凋亡;能极显著地促进GnRHR、FSHR、LHR的表达 ,并抑制GnIH、GnIHR的表达（P<0.01）;能显著或极显著上调StAR、CYP11A1、3β-HSD、CYP17A1、CYP19A1的mRNA水平（P<0.05或P<0.01）;显著升高OPN5、3β-HSD及CYP19A1的蛋白表达水平（P<0.05）和极显著升高E2、P4分泌水平（P<0.01）,并极显著降低INHβ的水平（P<0.01）。OPN5 siRNA能够显著降低OPN5的表达水平（P<0.01）,抑制卵泡颗粒细胞增殖并促进凋亡,极显著下调GnRH、GnRHR、FSHR、LHR（P<0.01）,促进GnIH、GnIHR的表达（P<0.01）;并极显著抑制StAR、CYP11A1、CYP17A1的表达（P<0.01）;显著降低OPN5、3β-HSD及CYP19A1蛋白表达水平（P<0.05）及极显著降低E2、P4的分泌水平（P<0.01）,并能极显著升高INHβ的水平（P<0.01）。研究表明,OPN5能促进鸭卵泡颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡,促进颗粒细胞中类固醇激素的生成和分泌。     

转染miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞增殖和激素分泌的影响

为探究miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞(GCs)增殖和激素分泌的影响，本试验通过体外分离培养牦牛卵泡GCs,分别转染miR-106a模拟物(miR-106a mimics)和miR-106a抑制剂(miR-106a inhibitors),利用CCK-8法检测GCs细胞增殖，ELISA法分别检测雌二醇(E₂)和孕酮(P₄)激素分泌情况。结果显示，与对照组相比，24、48、72和96 h时，miR-106a mimics组和miR-106a inhibitors组牦牛GCs的细胞增殖受到极显著抑制(P<0.01)。与对照组相比，GCs转染48 h时，miR-106a mimics组E₂分泌量极显著升高，而miR-106a inhibitors组E₂分泌量极显著降低(P<0.01);GCs转染72 h时，miR-106a mimics组和miR-106a inhibitors组E₂分泌量均极显著降低(P<0.01);GCs转染48 h时，miR-106a mim...     

可变剪接体WNT4-β对山羊卵泡颗粒细胞增殖和激素分泌的影响

旨在研究WNT4的一个可变剪接体（WNT4-β）对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取4~6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,体外分离卵泡颗粒细胞进行培养。通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置;在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后,利用RT-qPCR、Western blot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、CDK4的表达变化;CCK-8技术检测颗粒细胞增殖情况;并通过ELISA分析颗粒细胞中生殖激素水平的变化。免疫荧光染色结果显示,WNT4-β只在山羊卵泡颗粒细胞中表达,在卵母细胞不表达;过表达WNT4-β后,WNT4-β和颗粒细胞增殖因子cyclin-D2、CDK4的mRNA相对表达量极显著增加（P<0.01）,蛋白表达水平显著增加（P<0.05）;WNT信号通路标记因子ROA1、RHOA mRNA表达水平显著增加（P<0.05）,β-catenin蛋白表达水平显著增加（P<0.05）;干扰WNT4-β后,WNT4-β、cyclin-D2、CDK4、ROA1和RHOA 的mRNA表达显著降低（P<0.05）,WNT4-β、cyclin-D2、CDK4及β-catenin蛋白表达显著降低（P<0.05）。CCK-8结果显示,过表达WNT4-β促进颗粒细胞增殖（P<0.05）;ELISA结果显示,过表达WNT4-β后,颗粒细胞中雌二醇（estradiol,E₂）水平显著增加（P<0.05）,孕酮（progesterone,P₄）水平升高但不显著（P>0.05）;干扰WNT4-β后则结果相反,颗粒细胞增殖受到抑制（P<0.05）,E₂和P₄的水平显著降低（P<0.05）。综上所述,WNT4可变剪接体WNT4-β通过调控WNT信号通路促进山羊卵泡颗粒细胞增殖及类固醇激素分泌,本研究为解析WNT4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础。     

铜对体外仔猪软骨细胞增殖和自分泌IGF—I、IGFBP的影响

体外分离、培养仔猪关节软骨细胞，然后在细胞培养液中分别添加0、7．8、15．6、31．2、62．5μmol/L铜。结果表明，软骨细胞在4种浓度的铜中可存活并增殖，而且能增加胰岛素样生长因子（IGF－I）、胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP3）的分泌量。但随铜浓度的增加，其存活率、增殖率、^3H-TdR掺入率及IGF－I、IGFBP3的分泌量有明显的差异。且以培养液中添加31．2μmol/L铜对软骨细胞的增殖作用最强，增殖率、^3H-TdR掺入数、IGF－I、IGFBP3的分泌量显著高于对照组9P＜0．01）。表明31．2μmol/L铜浓度是促进体外软骨细胞增殖和自分泌IGF－I、IGFBP3的最适浓度。