抗鸡IgG单克隆抗体酶结合物的制备

抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体酶结合物的制备张春红，杜伟贤，伍惠卿等（广东省农科院兽医研究所广州５１０６４０）近年来，核酸探针等一系列新技术不断问世并逐步投入了生产应用，但在兽医临床体液免疫效果及疫病情况监测量方面，血清抗体（主要是ＩｇＧ）水平的测定仍以其准确...     

抗鸡IgG,抗鸭IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究

抗鸡ＩｇＧ、抗鸭ＩｇＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究张春红伍惠卿杜伟贤黄忠（广东省农业科学院兽医研究所，广州５１０６４０）自１９７５年Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ首次利用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术生产单克隆抗体（ＭｃＡｂ）以来，为所有需要制备和使用抗...     

抗鸡IgG单克隆抗体的研究

利用小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞系与纯化鸡IgG免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,成功地建立了5株能持续分泌抗鸡IgG单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞株。选择产生抗体效价高、生长快的C_(44)株,扩大培养后注射于小鼠制备腹水,经硫酸铵盐析粗提后,用HRP标记,制备出McAbs酶结合物。将制备的McAbs酶结合物和多克隆抗体(PcAbs)酶结合物,采用间接ELISA,对35份鸡血清中鸡新城疫病毒(NDV)抗体以及19份鸡血清中鸡嗜血杆菌(HG)抗体进行检测,McAbs和PcAbs两者的相关系数分别为0.928和0.921,证明制备的抗鸡IgG McAbs具有特异性强、效价高的特点.     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备

本文主要论述了ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经传染性法氏囊病病毒三次免疫后的ＢＡＬＢ／Ｃ的小白鼠的脾细胞，在融合剂ＰＥＧ（ＭＷ４０００）的作用下，融合形成杂交瘤细胞，融合率可达９６％，将杂交瘤细胞上清液用ＥＬＩＳＡ法检测，其阳性率可达８０％，将阳性杂交瘤细胞进一步克隆化，进行抗体检测，阳性率可达９９％，单克隆产生的抗体经大量生产后，为以后的抗原血清型鉴定，抗独特型抗体疫苗的制备打下了基础。     

抗猪IgG单克隆抗体的制备与应用

采用辛酸一硫酸铵盐析和SuperdexTM-200 凝胶层析分离纯化猪血清IgG,免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术获得8株稳定分泌抗猪IgG 单克隆抗体的杂交瘤细胞.Ig 亚类分析表明,所制备单克隆抗体的轻链亚类均为K,重链除6H3为IgG2b外,其余7株均属于IgG1.Western blot分析显示,5株单克隆抗体识别猪IgG轻链,3株单克隆抗体识别猪IgG重链.以蛋白G亲和层析纯化单克隆抗体7H1腹水,用改良过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,结果显示,HRP 标记抗猪IgG单克隆抗体对纯化猪IgG的工作浓度达1:12 800.将HRP标记鼠抗猪IgG单克隆抗体与HRP标记羊抗猪IgG多克隆抗体应用于猪血清圆环病毒抗体检测,二者符合率为95.12%,其ELISA和Westem blot的工作浓度为1:2 000和1:10000,表明HRP标记抗猪IgG单克隆抗体具有高度的敏感性.本研究制备的酶标抗猪IgG单克隆抗体为猪病的免疫诊断试剂研究和猪细胞生物学研究提供了一种基础工具.     

抗鸡IgG单克隆抗体及其酶标记抗体的研制

鸡源疾病种类繁多,一般鸡场均接种过菌(疫)苗,鸡血清中IgG水平的测定,已是疫苗免疫效果评定和体液免疫研究的常用指标.抗鸡IgG的单克隆抗体与常规免疫血清相比,具有特异性高、成分均一等优点.     

抗鸡β干扰素单克隆抗体的制备及初步鉴定

以鸡β干扰素（IFN-β）的重组蛋白pCold-ChIFN-β免疫8周龄Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗鸡β干扰素单克隆抗体,获得两株抗鸡IFN-β的单克隆抗体。经ELISA鉴定,两株单抗的腹水效价均达到10-3以上;Western blot检测结果证明2株单克隆抗体均能与表达的鸡IFN-β发生特异性反应;其中一株单抗可检测浓度小于15 pg/mL的鸡IFN-β。本研究为检测鸡IFN-β提供了一种重要工具,也为评价鸡用疫苗的免疫效果等奠定了物质基础。     

抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究

本实验将鸡传染性支气管炎病毒（澳大利亚Ｔ株）进行纯化，制成抗原，应用杂交瘤技术建立了５株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白的亚类分别属于ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＭ。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定，长期传代对其抗体分泌能力没有影响。５株单克隆抗体与其它１２株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应，但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ＥＬＩＳＡ效价为１０－６～１０－７，抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征，经快速蛋白分析鉴定其纯度为８９．４９％。竞争ＥＬＩＳＡ法证明其中４株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ＥＬＩＳＡ法，对抗原的检测方法进行了初步探索。     

猪抗鸡IBD血清的研制与应用

将８头健康猪进行ＩＢＤ强化免疫接种常规采集免疫猪血清，用琼扩试验测定血清ＩＢＤ抗体效价为１：６４－１：１２８。抗血清对自然发生ＩＢＤ的病鸡，皮下注射０．５ｍｌ／只，其总存活率达９５－１００％，但发病后期的病鸡治疗存活率一般为７０％左右。     

抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定

用人工合成的氯霉素-人血清白蛋白(CAP-HSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株分泌抗CAP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞1F9.经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目84～96条,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1256,诱生小鼠腹水的抗体效价可达16×105.该细胞连续培养生物学性状稳定,竞争间接酶联免疫吸附试验(ciELISA)显示,其与供试抗生素交叉反应小,表明该单抗具有较大的应用价值.     

DNA免疫法制备抗鸡IL-4单克隆抗体

为建立有效检测鸡IL-4(ChIL-4)的生物学方法,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-4作为免疫抗原,肌肉注射法免疫6周龄BALB/c小鼠,免疫的间隔时间为4周,共免疫5次;于加强免疫3次后,取免疫鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合。以His-ChIL-4为检测抗原,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞株;采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞株进行亚克隆,体内诱生腹水法大量制备腹水单抗;采用ELISA、Western blot法分析mAbs的特异性。结果本研究共获得3株抗ChIL-4mAbs:1C11、5C1和3E10,其亚类分别为IgM、IgM和IgG2a,腹水效价为(1.6~6.4)×104。间接ELISA及Western blot结果显示,所获得的mAbs均只识别重组ChIL-4,而不能识别其他无关抗原,表明所获得的3株mAbs均特异性针对ChIL-4。该mAbs的获得为建立检测ChIL-4的生物学方法及进一步研究ChIL-4的生物学功能提供了有效的生物材料。     

抗鸡败血支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用杂交瘤技术获得了４株抗鸡败血支原体单克隆抗体。４株单克隆抗体与鸡滑液支原体、传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、鸡白痢沙门氏菌和大肠杆菌抗原均无交叉反应。１株单克隆抗体为ＩｇＧ２ａ，其余３株单克隆抗体均为ＩｇＭ。４株杂交瘤细胞染色体均有少量中部或亚中部着丝点染色体。