应用间接荧光抗体试验检测猪繁殖和呼吸综合征抗体

应用间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）进行了猪繁殖和呼吸综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的检测。共检测２个猪场，计２７份血清。其中Ｐ猪场猪血清２２份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２０份，阳性率为９０９％；Ｌ猪场猪血清５份，检出ＰＲＲＳ阳性血清２份，阳性率为４０％。首次证实我区存在ＰＲＲＳＶ感染猪群。     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。     

检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立

本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。经三氯－三氟乙烷处理后,作为ＥＬＩＳＡ试验的标准抗原,并建立了检测ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ方法。该方法与ＩＦＡ、ＩＰＭＡ和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测ＰＲＲＳＶ抗体的方法。间接ＥＬＩＳＡ方法在敏感性上要优于ＩＦＡ和ＩＰＭＡ》     

应用重组猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白为抗原建立I—ELISA检？…

用重组杆状病毒表达的钎生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）Ｎ蛋白作为抗原，建立了诊断猪生殖和呼吸综合征（ＰＲＲＳ）的Ｉ－ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司试剂盒检测结果的符合率为９７．３％，与间接 光抗体试验９ＩＦＡ）的符合率为１００％。用该方法的检测国内猪血清８５份，阳性率为１８．８％；能检出ＰＲＲＳ疫苗免疫猪６ｄ的血清抗体，；与猪瘟、伪狂犬病、猪巴氏杆菌病、猪霉形体病阳性血清无交叉反应。     

Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测     

Dot─ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１∶１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１∶６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳性率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测结果表明：６１份１９９１年进口美国猪血清阳性率为０％，１８２份１９９５年进口加拿大猪血清阳性率为４．９４％。本法不需特殊仪器，适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查     

犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究

用犬瘟热（ＣＤ）弱毒和自制的高免犬血清，建立了检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体的中和（ＳＮ）试验、间接荧光抗体技术（ＩＦＡＴ）和间接免疫酶染色法。这３种方法对３８份ＣＤ弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明，当被检血清稀释度为１∶１００时，ＳＮ试验、ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为２９，７和３１份，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定结果相对于ＳＮ试验结果的符合率分别为４２．１％和９４．７％。同时发现，当ＳＮ试验测定的血清效价在１∶１００以上时，ＩＦＡＴ测定结果总是在１∶２５以上，间接免疫酶染色法测定结果总是在１∶１００以上。３种方法以各自初步确定的ＣＤＶ血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率，ＳＮ试验为７６．３％，ＩＦＡＴ为７８．９％，间接免疫酶染色法为８１．６％。据此认为，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法均可部分代替ＳＮ试验用于ＣＤ疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及ＣＤ的流行病学调查     

用于检测猪血清中猪生殖—呼吸道综合征病毒抗体的一种…

为了提高检测猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染猪抗体的血清中和试验（ＳＮ）的敏感性，对不同条件进行了评价和改进，通过在病毒稀释液中添加２０％新鲜猪血清及使用派生于ＭＡ－１０４细胞系的一种受纳细胞克隆（ＭＡＲＣ－１４５），可自始至终获得较高的ＳＮ抗体效价，用于评估ＳＮ试验的待检血清来自两组３周龄，经鼻内感染ＰＲＲＳＶ（ＭＮ－１ｂ株）的猪。用此改良法，在接种后９～１１天首次检出ＳＮ抗体，且于接     

猪生殖—呼吸道综合征病毒抗原在死胎及新生仔猪体内的分布

应用抗猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）单克隆抗体所做的间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ）,对人工接种ＰＲＲＳＶ的３头妊娠母猪所产９头死胎和２头新生仔猪体内的ＰＲＲＳＶ抗原分布进行了观察。结果表明,ＰＲＲＳＶ抗原在死胎主要分布于脾脏（９／９）和淋巴结（３／４）的巨噬细胞内,而少见于肺（２／９）和肾（０／９）等其他脏器。但新生仔猪则仅在肺脏（２／２）的巨噬细胞内检出了ＰＲＲＳＶ抗原。此结果说明ＰＲＲＳＶ可通过胎盘屏障垂直传播给胎儿,而且ＰＲＲＳＶ对组织的嗜性在胎儿和新生仔猪之间存在差异     

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

用LSAB免疫组化染色法检测猪生殖—呼吸道综合征病毒抗原？…

本研究在国内首次成功建立了辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素－生物系（ＬＳＡＢ）免疫组化染色法检测猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗原。应用ＬＳＡＢ染色技术检测１２头人工感染ＰＲＲＳＶ美洲株（ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２）或国内分离株（Ｂ９６－４，Ｂ９６－５）的ＳＰＦ仔猪组织细胞内的ＰＲＲＳＶ抗原，阳性检出率为１００％。     

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。     

猪繁殖和呼吸综合征（PRRS）血清流行病学调查初报

用美国Ｈｅｒｄｃｈｅｋ猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳ）ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒对来自华北地区和华东地区８个ＰＲＲＳ可疑猪场共４７份血清进行检测。结果是：华北地区６个猪场，华东地区２个猪场ＰＲＲＳＶ抗体阳性检出率分别为５／６和０／２。８个猪场流产母猪、新生弱仔猪，有呼吸症状的育成猪及种公猪阳性检出率分别为１４／２０，５／１６，４／１０和１／１。表明ＰＲＲＳ在我国已经存在，并正在流行     

猪生殖和呼吸综合症的血清学诊断方法

１９９５年以来,国内学者相继建立了猪生殖和呼吸综合症（ＰＲＲＳ）的ＩＦＡ、ＩＰＭＡ、ＥＬＩＳＡ和Ｄ０ｔ－ＥＬＩＳＡ等血清学诊断方法,简述如下。１间接荧光抗体法（ＩＦＡ）细胞板的制备：将生长于培养瓶的Ｍａｒｃ１４５或ＨＳ２Ｈ细胞消化后,用含１０％犊牛血...     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

鸡传染性支气管炎可疑病料的病毒分离及初步鉴定

１９份鸡传染性支气管炎（ＩＢ）可疑病料通过ＳＰＦ鸡和鸡胚感染试验、血凝（ＨＡ）试验、气管环培养（ＴＯＣ）感染试验、单克隆抗体（Ｍａｂ）ＥＬＩＳＡ和电镜形态学观察，初步证明其中１３份病料含ＩＳ病毒（ＩＢＶ）．在用其中９份接种８～９周龄ＳＰＰ鸡进行的发病试验中，全部呈现临床症状，其中３份引起病死亡率（６０～８０％），接种后５周从存活鸡采血作ＩＢＶ血凝抑制（ＨＩ）试验，结果均为阳性．     

阻断ELISA和IPMA检测猪PRRSV抗体的比较研究

建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（ＰｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验一免疫过氧化物酶单层试验（Ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｍｏｎｏｌａｙｅｒａｓｓａｙ，ＩＰＭＡ）加以比较。当使用野外血清和实验感染ＰＲＲＳＶ后早期采集的血清试验时发现，阻断ＥＬＩＳＡ是特异性的，而且比ＩＰＭＡ更敏感。没有遇到在ＩＰＭＡ或间接ＥＬＩＳＡ中所见的底色深的问题。     

猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体的研制

利用猪繁殖与呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）国内分离株Ｊ１,采用反复差速离心法制备免疫抗原,长程免疫法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗体,通过细胞融合技术,并经３次亚克隆获得了１０株能稳定分泌抗ＰＲＲＳＶ单抗的杂交瘤细胞单克隆株（Ａ１Ｄ７Ｈ１０,Ａ１Ｄ７Ｈ１１,Ａ１Ｅ７Ｈ９,Ａ１Ｅ７Ｄ９,Ａ２Ｄ８Ｅ７,Ａ２Ｄ８Ｂ１１,Ｂ３Ｄ１１Ｄ６,Ｂ２Ｇ９Ａ９,Ｂ２Ｇ９Ｆ２）。这些细胞经体外连续传     

阻断ELISA和IPMA检测猪PRRSV抗体的比较研究

建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（ＰｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验－免疫过氧化物酶单层试验加以比较。当使用野外血清和实验感染ＰＲＲＳＶ后早期采集的血清试验时发现，阻断ＥＬＩＳＡ是特异性的，而且比ＩＰＭＡ更敏感，没有遇到的在ＩＰＭＡ或间接ＥＬ