退化非洲菊的根段组织培养与植株再生

【目的】开展退化非洲菊根段的组织培养和植株再生研究,旨在为恢复其退化性状,实现优良品种的可持续利用提供技术保障。【方法】以退化非洲菊瓶苗的不同长度根段作为外植体,以MS为基础培养基,研究不同激素及其配比对不定芽分化、增殖和组培苗生根的影响。【结果】最适宜根段长度为0.5 cm;适合不定芽分化的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L,分化率为48.3%;不定芽增殖最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L,增殖倍数为5.07,且在此条件下,不定芽以较高倍数增殖的同时保持旺盛的生长势;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+蔗糖15~20g/L,第20天时生根率达到97.8%,根系粗壮较整齐且生长较快。【结论】建立了以根段为外植体的非洲菊最佳组织培养体系,在该体系下不定芽分化率、增殖倍数高,组培苗生根情况好。     

‘秦美’猕猴桃叶片高频直接再生体系的建立

以‘秦美’猕猴桃无菌苗叶片为外植体,通过不定芽诱导、继代增殖和生根培养基的筛选,建立高频直接再生体系.结果表明,叶片出芽最佳培养基为MS+5.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA,40d出芽率达100%,每个叶盘平均出芽7.4个;不定芽继代增殖最佳培养基为MS+5.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.1mg/L GA3,每30d继代1次,1~5代平均繁殖系数达6.43;不定芽生根最佳培养基为1/2 MS+0.7 mg/L IBA,30d生根率为91.11%.在土壤营养钵中,试管苗30d移栽成活率达92.47%.本试验成功建立了‘秦美’猕猴桃的叶片高频直接再生体系,为其遗传转化奠定了基础.     

光皮桦叶片再生体系的建立

【目的】建立光皮桦叶片高效再生体系,为光皮桦的良种培育及遗传转化研究提供依据。【方法】以光皮桦无菌叶片为外殖体,分别用含0.6 mg/L TDZ 的MS、WPM和1/2MS培养基进行不定芽诱导分化,筛选最佳基本培养基;向筛选出的最佳基本培养基中添加0.05 mg/L NAA及不同质量浓度（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mg/L）TDZ的激素组合组成不定芽分化培养基,用于诱导不定芽分化,筛选最佳不定芽诱导分化培养基;以1/2MS培养基为基本培养基,分别附加0,0.05,0.1,0.5,1.0,2.0 mg/L的IBA或0.5,1.0,2.0,3.0 mg/L的NAA组成生根培养基,用于再生苗生根,筛选最佳生根培养基,建立光皮桦叶片再生体系。【结果】光皮桦无菌叶片诱导不定芽的最适基本培养基为MS培养基,其诱导的不定芽最多,且芽生长状况良好,颜色深绿;最适不定芽诱导分化培养基为：MS+TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上叶片丛生芽诱导率可达到80.00%,平均不定芽数高达12.00个,且芽生长健壮,呈深绿色;最适再生苗生根培养基为：1/2MS+IBA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上再生苗的生根率达100%,平均根数为14.5个,平均根长为11 cm,根较粗壮,基部无愈伤组织,且产生了很多毛细根。【结论】建立了光皮桦无菌苗叶片的高效再生体系。     

箭杆杨组织培养再生体系的建立

【目的】探讨常温下适宜箭杆杨试管苗腋芽增殖、生根的最佳培养条件。【方法】以MS培养为基本培养基,附加不同浓度的吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)以及6-氨苄基腺嘌呤(6-BA)组成试验培养基,对箭杆杨组织进行培养,观察其生根情况和愈伤组织诱导情况。【结果】箭杆杨脱分化最佳培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,该条件下的愈伤组织诱导率为90%;不定芽分化诱导培养基为:1/2MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L6-BA,该条件下的诱导分化率为67.1%;芽增殖培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,该条件下的增殖数为5.8;最佳生根培养基为:1/2MS+1.0 mg/L IBA,该条件下的生根率为81.3%。【结论】建立了箭杆杨组织培养再生体系,为其种质资源的试管保存奠定了基础。     

喀什哈尔葡萄组织培养及再生体系的建立

以喀什哈尔葡萄单芽茎段为材料,进行了离体组织培养并以实验获得的喀什哈尔葡萄组培苗进行了外植体器官直接再生研究.结果表明:喀什哈尔葡萄单芽茎段最适初始培养基是:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L,侧芽萌芽率达100;;最适继代培养基是:MS+KT 0.1 mg/L+IBA 0.4 mg/L,同时伸长生长与生根生长,生根率达100;.探讨了喀什哈尔葡萄器官再生的影响因素,并以叶片为试材,建立了植株再生体系.叶片不定芽再生的最佳培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L ,再生率为14.3;;最佳生根培养基是MS+KT 0.1 mg/L+IBA 0.4 mg/L,生根效果良好,生根率为92;.     

火龙果(Hylocereus undatus)快速繁殖技术研究

组织培养是火龙果(Hylocereus undatus)进行快速繁育的有效途径。本实验以火龙果幼嫩茎作为实验材料,通过筛选其最适培养基,使其快速繁殖,获得最大的经济效益。本论文通过研究不同激素配比对其不定芽诱导的影响、不同激素配比对其不定芽增殖的影响、不定芽生根培养,再生植株移栽来建立火龙果的再生体系。实验结果表明,MS + 6-BA 5.0mg/L + NAA 0.08 mg/L培养基为最佳不定芽诱导培养基;MS + 6-BA 6.0mg/L + NAA 0.08 mg/L为最佳不定芽增殖培养基,培养基MS + NAA 0.9mg/L +IBA 0.1mg/L + IAA 0.9mg/L最适于火龙果生根,此外采用继代4-5代的材料能提高其增殖率。     

豌豆离体再生体系建立及遗传稳定性研究

【目的】提高速豌豆诱伤组织和不定芽的诱导率,建立豌豆高效离体再生体系.【方法】以半无叶型豌豆品种‘陇豌1号’和蔓生型豌豆品种‘S3008’的茎段为外植体,研究不同基因型、培养基激素配比对愈伤组织诱导、分化的影响.【结果】‘陇豌1号’茎段愈伤组织诱导率和分化率较高,分别达到88.7%和76.7%,‘S3008’茎段最高愈伤组织诱导率和分化率分别为86.7%和74.7%.诱导愈伤组织最适培养基是MS+2mg/L TDZ+0.2mg/L 2,4-D;诱导不定芽形成的最适培养基为MS+2mg/L TDZ+1mg/L 6-BA,平均不定芽数为4.3;在不定芽诱导生根培养基(1/2MS+20g/L蔗糖+1.5mg/L ABT)上,生根率为74.0%,移栽后再生植株成活率达86.0%.两个豌豆品种都能得到再生植株且繁殖系数高.【结论】本培养体系适宜豌豆离体再生.通过染色体分析,再生植株染色体数和供体亲本材料一致,初步表明再生植株遗传稳定.     

真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系的初步建立

【目的】初步建立真梅系梅花叶片的再生体系,为真梅系梅花良种培育及叶盘法基因转化等研究奠定基础。【方法】以真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片为试验材料,通过正交试验对外植体处理方法以及愈伤组织诱导、分化和生根培养基进行筛选,探讨真梅系梅花叶片再生的影响因素。【结果】选用梅花‘三轮玉蝶’1年生枝条基部的叶片,背面向上接种并黑暗培养,有益于愈伤组织形成。在培养基1/2MS+TDZ 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L中,叶片愈伤组织诱导率可以达到85.04%;愈伤组织转接在培养基1/2 MS+TDZ 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L中,分化率可达46.44%;分化出的不定芽在添加6-BA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.3mg/L的1/2MS培养基上诱导生根效果较好,生根率达88.29%。【结论】明确了处理方法和部分外源激素对梅花‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织形成的影响,初步建立了梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系。     

‘黄花倒水莲’离体快繁技术研究

【目的】研究并建立‘黄花倒水莲’离体快繁技术体系.【方法】以‘黄花倒水莲’嫩茎为外植体,经不同方法消毒后,接种于MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.05mg/L的培养基中诱导不定芽发生,继而将不定芽接种在附加不同种类及浓度外源激素的培养基进行培养,根据增殖和生根情况,筛选适宜的‘黄花倒水莲’增殖及生根培养基;然后将生根试管苗移栽于不同的基质中,依据成活率,确定其最佳炼苗基质.【结果】用75%酒精消毒10s,0.1%升汞消毒15min获得了较好的消毒效果,污染率低至3.15%;适宜‘黄花倒水莲’增殖的培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA 0.05mg/L,增殖系数为5.50;在1/2MS+IBA 0.1mg/L+NAA 0.3mg/L+0.2g/L活性炭的生根培养基中,其生根率可达96%;‘黄花倒水莲’试管苗炼苗的最佳基质为红壤∶腐殖土∶珍珠岩=1∶1∶1,成活率为94.5%.【结论】成功建立了‘黄花倒水莲’离体快繁技术体系.     

黑莓‘Kiowa’叶柄离体直接再生体系的建立

以黑莓品种‘Kiowa’无菌苗叶柄为外植体,研究了培养基类型、暗培养时间、着生位置、激素种类配比和生根条件等对叶柄不定芽诱导的影响,建立了叶柄直接再生体系。结果表明,把‘Kiowa’试管苗继代培养30～40 d后,取自上而下第1～2叶位的叶柄为外植体,接种在MS或1/2MS上,暗培养14 d或21 d叶柄的再生效果较好。‘Kiowa’叶柄不定芽再生的适宜培养基为MS+CPPU 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L,不定芽再生率达87.46%,平均叶柄再生芽数目达4.42。芽增殖以MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L效果最好,增殖系数达5.19;再生植株生根以1/2MS+NAA 0.03 mg/L最佳,生根率达91.67%,平均生根条数为4.00。     

豌豆再生体系的建立

【目的】建立用于豌豆组织培养与转基因的再生体系.【方法】利用植物组织培养的外植体的消毒、接种、脱分化、再分化和生根等方法进行豌豆再生体系的建立.【结果】以‘陇豌1号’为试验材料,其胚轴为豌豆愈伤组织诱导最佳外植体;适宜诱导培养基为MS+1.0mg/L 2,4-D+0.2mg/L 6-BA;最佳增殖培养基为:MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA;胚轴在MS+0.2mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA培养基中分化率最高,达26.21%,MS+B5+0.5mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA条件下最适宜子叶的分化(14.80%);不定芽在1/2 MS+0.5mg/L NAA下生根率最高,达66%.【结论】‘陇豌1号’的这一再生体系可用于其转基因受体系统的建立和种苗的组培快繁.     

海棠花离体繁殖技术研究

以海棠花组培苗和叶片为材料,应用正交试验法,以MS培养基为基础,分别加入不同浓度配比的6-BA/IBA组合和TDZ/IBA组合作为增殖培养基和叶盘不定芽再生培养基,研究了不同植物激素及其配比对组培苗增殖、叶片不定芽再生的影响。结果表明:在添加6-BA 1.0mg.L-1+IBA 0.1mg.L-1的MS培养基上最适宜海棠花组培苗的增殖及生长,增殖倍数高达8.11,海棠花组培苗平均高度达2.14cm;在添加TDZ 1.0mg.L-1+IBA 0.5mg.L-1的MS培养基上叶再生效率最高,再生效率为100%,每叶平均再生芽数为6.73。     

库尔勒香梨离体叶片再生体系的建立

【目的】建立库尔勒香梨叶片诱导再生的稳定高效再生体系。为梨的遗传转化研究奠定基础。【方法】以库尔勒香梨离体培养的继代30 d左右的无菌苗叶片为材料,1/2 MS为基本培养基,用 TDZ与 IBA或 NAA分别组合设计配方,研究不同生长调节剂质量浓度组合对不定芽诱导过程中愈伤组织形成率和不定芽形成率的影响,选取最优配方附加不同质量浓度的AgNO₃,获得不定芽再生的最佳培养基。用IBA和NAA分别组合设计生根生长调节剂的配比,根据生根率、平均生根数以及平均生根长度筛选最适宜生根的生长调节剂的配比,建立生根的培养体系。【结果】库尔勒香梨叶片诱导不定芽再生的最佳培养基为1/2 MS+TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+AgNO₃ 0.5 mg/L,愈伤组织诱导率100%,不定芽形成率84.92%。最适宜香梨再生苗生根的培养配方为1/2 MS + 0.5 mg/L IBA + 0.9 mg/L NAA,结合前期暗培养7 d,生根率可达100%,平均生根条数为5.66,平均根长度为 2.8 cm。【结论】建立了库尔勒香梨的再生体系。     

两个茄子品种高效再生体系的建立

【目的】建立茄子高效再生体系,为遗传转化、种质创新研究奠定基础.【方法】以‘兰杂一号’和‘兰杂二号’两个茄子品种为试材,通过对不同质量浓度外源激素组合的筛选,研究基因型、外植体类型、苗龄、外源生长调节剂组合对不定芽分化与伸长的影响.【结果】‘兰杂二号’的不定芽分化率显著高于‘兰杂一号’;子叶的不定芽分化能力强于下胚轴和茎段;11~13d苗龄的外植体不定芽分化频率较高;‘兰杂一号’和‘兰杂二号’分别在6-BA/IBA为10∶1和30∶1的配比下,分化率达最高,分别为89.58%、94.97%;在6-BA/IBA为1∶2配比下有利于两个品种不定芽伸长,伸长率分别高达91.67%、96.88%.【结论】适宜‘兰杂一号’和‘兰杂二号’不定芽分化的培养基分别为MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA和MS+3.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IAA;适宜不定芽伸长的培养基为MS+0.1mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA;最佳生根培养基为1/2 MS培养基.     

鄂梨2号叶片高效再生体系的建立

以早熟砂梨品种鄂梨2号组培苗叶片为外植体,建立叶片再生体系。结果表明,鄂梨2号叶片再生不定芽最佳培养基为NN69+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA,愈伤组织再生率达到100%,不定芽再生率为36.67%;不定芽增殖最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,增殖系数为2.19;不定芽在1 000mg/L ABT中浸蘸5 s后接种在添加500 mg/L活性炭的1/2MS培养基上,生根率最高,为66.67%;试管苗移栽成活率为84.44%。     

药用植物刺山柑快繁再生体系的建立

以药用植物刺山柑种子为材料,探讨了不同生长调节剂对种子萌发、芽诱导增殖和生根的影响。结果表明:利于种子萌发的启动培养基为MS附加1.0 mg/L 6-BA和2%蔗糖。从无菌苗上切取下胚轴进行不定芽诱导,其最适芽诱导增殖培养基为:MS 0.10 mg/L 6-BA 0.02 mg/L NAA,在该培养基上其增殖率可达5-6倍。利于生根的培养基为MS附加1.00mg/L IBA和100 mg/L活性炭。本研究初步建立了刺山柑组织培养及植株再生体系。     

红心火龙果离体培养技术研究

【目的】通过红心火龙果离体培养技术研究,建立其组培快繁技术体系,为规模化育苗提供技术支撑。【方法】以红心火龙果幼嫩茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同外源激素配比,筛选出不定芽发生、增殖、壮苗及生根诱导等不同阶段的最适培养基。【结果】最佳消毒方法为使用75%酒精消毒10 s,无菌水冲洗1次,再用0.1%升汞消毒4.5 min,无菌水冲洗5～8次。最适不定芽诱导培养基是配方为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.6 g/L,发芽率达87.03%;最适不定芽增殖培养基的配方为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L+AC 0.2 g/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.6 g/L,不定芽的增殖系数高达7.33;最适生根培养基的配方为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+AC 0.2 g/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.6 g/L,生根率达100%。最佳移栽基质为V (珍珠岩)∶V (红土)∶V (腐殖土)=1∶1∶1,植株成活率高达98.9%。【结论】建立了以茎段为外植体的红心火龙果组培快繁技术体系,不定芽诱导率和增殖系数高,组培苗生根情况好,移栽成活率高。     

杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

姜花离体再生体系的建立

为建立姜花离体再生体系,对姜花离体培养过程中种子萌发诱导与不定芽增殖培养基的筛选,以及试管苗生根、移栽等关键技术进行了试验。结果表明:诱导外植体萌芽的最适培养基为MS;培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L利于诱导丛芽及增殖,芽的增殖系数可达4.76,培养基1/2 MS+IBA 0.5 mg/L适宜再生苗的生根诱导。     

河北杨叶片诱导不定芽再生体系的建立

以河北杨无菌苗叶片为外植体材料,诱导叶片分化产生不定芽,然后对不定芽进行增殖和生根培养,形成再生植株。结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS+0.3 mg·L~(-1)TDZ+0.5 mg·L~(-1)IBA,不定芽诱导率达到100%;最佳增殖培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)KT+0.3 mg·L~(-1)IBA,增殖率可达85%;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L~(-1)IBA,平均生根率可达到92.86%;组培苗移栽成活率为93.7%。本研究建立了河北杨高效植株再生体系,为河北杨的遗传改良和分子育种研究奠定了基础。