马梨形虫病及其诊断方法概述

本文概述了马梨形虫病的流行特点及其诊断方法，并分析了各种诊断方法的优缺点。病原学诊断可快速诊断病例，但大量检测时操作较为困难；ELISA 技术已经十分成熟，是世界动物卫生组织推荐的标准诊断方法；CFT可准确诊断早期（急性）感染，但无法识别经过药物已产生抗补体反应的个体；PCR方法可直接检测病原体核酸，敏感性较高，但操作较为复杂；real-time PCR特异性强、灵敏度高、稳定性强，但所需仪器昂贵；LAMP技术敏感、简便、快速，但常出现假阳性结果。除病原学检测外，以上方法大多不适于田间检测。因此，需要建立一种操作简便、诊断准确、成本低廉的田间检测方法，未来研究方向将主要侧重于免疫学和分子生物学。     

几种布鲁氏菌病诊断方法的比较

布鲁氏菌病的诊断通常采用细菌学和免疫学方法,尽管细菌学方法是最直接的方法,但培养布鲁氏菌需要较长时间。随着免疫学技术的不断成熟和发展,出现了免疫电泳、补体结合试验、反向间接血凝、酶联免疫吸附试验及放射免疫分析方法等布病的诊断方法,使布鲁氏菌病能够早期诊断。但这些方法也存在假阳性和假阴性等问题。PCR技术提供了其他技术无法比拟的细菌检测手段,具有敏感、快速、准确的优点。PCR方法为布鲁氏菌病的早期诊断开辟了一条新途径。     

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策

PCR(polymerase chain reaction,聚合酶链式反应)技术是美国Cetus公司人类遗传研究室的科学家Mullis于1985年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,又称为基因的体外扩增法。这种技术操作简单,容易掌握,有极高的灵敏度,结果可靠。近几年,随着PCR相关技术的发展,复合PCR、定量PCR、荧光PCR等PCR技术在动物疫病的快速检测方面得到了广泛应用,为动物疫病的诊断及检验检疫提供了良好的依据。但该方法较强的扩增能力也带来了令人头痛的问题?易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。1引起PCR污染的因素1.1 PCR试剂的…     

PCR假阳性的原因分析及控制措施

近二十年来,PCR作为一种重要的分子生物学技术,广泛应用于动物疫病的病原学、诊断方法、基因工程疫苗研究、检验检疫、疫病诊断、疫情监测及流行病学调查等动物疫病防控实际工作。如何控制好PCR检测的质量,减少假阳性,一直是研究者普遍关注的问题。本文分析了PCR假阳性形成的原因,提出预防及控制措施,为促进实验室PCR实践工作提供参考。     

猪伪狂犬病PCR与ELISA检测方法研究进展

猪伪狂犬病(PR)在全球广泛流行,给猪养殖业造成了严重的损失。如何实现对该病快速、准确、方便、价廉地的诊断具有重要意义。PCR和ELISA具有操作简便、灵敏度高、结果判定简单、成本低等优点,可广泛应用于一线兽医队伍快速检测PR。本文就PCR和ELISA技术在猪伪狂犬病诊断方面的最新研究情况进行了综述,以期为PR的快检快筛检测提供参考。     

实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用

聚合酶链反应(PCR)技术自1985年问世以来,以其灵敏性高、特异性强和速度快在分子生物学等科研领域得到了广泛应用。但是,由于传统的PCR技术不能准确定量,在操作过程中易受污染而使假阳性率偏高;因此,使其应用受到限制。实时荧光定量PCR技术拥有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点,已成为了分子生物学研究的重要工具。文章对实时荧光定量PCR技术的原理、检测方法、定量方法及其应用进行了综述。     

原位PCR及其在兽医分子生物技术中的应用

原位 PCR是一种将常规 PCR的高效扩增与原位杂交技术结合起来的新方法 ,其类型主要有直接原位 PCR、间接原位 PCR、原位 RT-PCR和原位再生序列复制反应 ,其中间接原位PCR应用最为广泛。原位 PCR技术的基本步骤包括标本处理、蛋白酶消化、原位 PCR扩增和扩增后产物的检测。原位 PCR技术操作比较复杂 ,同时在操作中易出现假阳性结果和假阴性结果。尽管如此 ,原位 PCR技术作为一种特异性、敏感性高的靶序列定位检测技术 ,作为研究基因信息和细胞、染色体等的形态信息的有力工具 ,在兽医分子生物技术中仍然具有广泛的应用和发展前景     

PCR技术及其在禽流感诊断中的应用

目的:分析PCR技术原理并探讨其在禽流感诊断中的应用价值。方法:回顾分析近几年PCR(多聚酶链式反应)技术在禽病中的应用研究资料,并对该技术的特点进行总结。结果:PCR技术具有比较好的灵敏性、特异性等优点,操作十分迅速便利。既可单独运用于实验、检测中,还可同其他技术相配合,其应用对象比较广泛,几乎覆盖了所有生物,在DNA检测和RNA扩增检测中同样适用。结论:PCR技术在禽流感诊断中具有较高的应用价值,对禽流感病毒检测十分灵敏准确,可在实际诊断过程中予以利用和推广。     

实时定量PCR技术在动物疫病研究中的应用

实时定量PCR（real-time quantitative PCR）是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。实时定量PCR继承了PCR技术灵敏、快速、特异的优点,同时又克服了PCR技术中存在的假阳性率高、易污染、EB染料对实验人员的危险以及不能进行准确定量等缺点。实时定量PCR实现了PCR从定性或半定量到准确定量的飞跃,目前,已经成为分子生物学和医学研究等领域的重要工具。本文就实时定量PCR技术及其在动物研究领域中的应用作一综述。     

内参PCR法在布鲁氏菌病诊断中的应用

本试验以布鲁氏菌致病力因子VirB7下游至VirB9上游基因序列为目的扩增片段,设计上、下游引物,优化血样、奶样中布鲁氏菌基因组DNA的提取方法,建立布鲁氏菌内参PCR(IR-PCR)检测方法,用于血液、奶液样本中布鲁氏菌的检测。结果显示,内参PCR法有效地降低了PCR法诊断布鲁氏菌的假阴性率,且检测结果与常规的布鲁氏菌的诊断方法(细菌培养分离鉴定、iELASA)一致,该方法不仅提高了常规布鲁氏菌诊断方法的效率及灵敏度,而且降低了其假阴性和假阳性率。对血样、奶样的检出量分别为35CFU/mL、350 CFU/mL,适合于血样、奶样中布鲁氏菌的检测。     

禽衣原体病实验室诊断技术研究进展

禽衣原体病（avian chlamydiosis）主要由鹦鹉热衣原体（Chlamydophila psittaci）引起。鹦鹉热衣原体可感染禽类等多种动物,在禽类中广泛流行,也可感染人类,对公共卫生构成了威胁。禽衣原体病的早期诊断成为该病防控重要手段之一。病原学诊断是禽衣原体病诊断的金标准,但需要在生物安全级别较高的实验室操作,且耗时较长和操作繁琐,已不再是禽衣原体病实验室诊断的主流方法。目前,禽衣原体病的血清学检测主要是补体结合试验（CFT）和酶联免疫吸附试验（ELISA）,其中ELISA方法在流行病学调查和大规模监测中起到了很重要的作用。分子生物学方法中以荧光PCR方法最为普及,成为了禽衣原体核酸检测的主流方法,与传统的病原学检测方法相比,其速度、通量、特异性、敏感性各方面都有提升,相较于免疫学诊断,避免了获得性免疫带来的假阳性结果,是未来禽衣原体病实验室诊断的主要发展趋势。本文从病原学、血清学和分子生物学方面对禽衣原体病的诊断方法进行论述,介绍各种诊断方法的研究进展和应用现状,并分析其优缺点,以期为禽衣原体病的诊断和防控措施的制定提供参考。     

石蜡切片的制作及其免疫组化染色技术

正随着兽医临床诊断技术快速发展,动物传染病的诊断经常采用准确快速的PCR、荧光PCR等分子生物学方法、血清学检测方法等;但是,若想更直观详细地了解病理、确定病情发展进程,组织切片技术往往是必不可少的。根据不同的制作工艺,组织切片技术可分为石蜡切片和冰冻切;其中石蜡切片具有直观性、可保存时间长、成本低廉、运用范围广等优点,在疾病诊断、病理学研究等方面的运用尤其成熟,是兽医诊断中是最权威的诊断方法之一。因此,本文将对石蜡切片     

非洲猪瘟两种核酸提取方法的对比报告

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。目前,非洲猪瘟没有有效的疫苗。建立快速准确的诊断方法对于控制本病的传播至关重要。荧光PCR核酸检测是目前灵敏度最高的检测方法。而荧光PCR检测结果准确与否与非洲猪瘟核酸提取的质量有很大关系。笔者在检测工作中对农业部公布的常用快速检测试剂盒裂解液提取核酸与商品化试剂盒全自动核酸提取仪提取核酸,用同一检测反应液进行扩增,并从检测结果的准确性、操作简便程度、样品的使用范围、成本控制等方面进行比较,从而筛选出最佳的核酸提取方法,以期为非洲猪瘟疫情防控提供技术支撑。     

PCR结合斑点杂交技术在检测禽网状内皮增生病毒中的应用

为评价PCR结合斑点杂交技术在鸡REV检测中的应用价值,采用PCR法制备禽网状内皮细胞增生症病毒特异性地高辛标记DNA探针,同时用PCR技术、斑点杂交方法和PCR产物斑点杂交方法检测了不同地区的病、死鸡的组织样品REV的感染情况。结果表明,PCR产物斑点杂交法的检出率(45.16%,14/31)高于组织DNA直接斑点杂交法(32.26%,10/31),显著高于单纯PCR扩增法(0%,0/31)。PCR结合斑点杂交检测技术能快速、敏感、准确,充分避免PCR中的假阴性和假阳性现象,值得推广应用。     

改善PCR技术应用的关键点

聚合酶链式反应技术自上世纪80年代发明以来,随着技术和仪器的进步已发展至第三代。特别是实时定量PCR由于其灵敏、特异、准确的特点在疾病监测、临床诊断、基因表达调控等方面实现了广泛应用。扬州大学王成明教授长期致力于定量PCR技术在疾病检测与诊断方面的应用研究,基于多年的研究与探索,在PCR技术的应用方面积累了丰富的经验,总结了PCR技术应用的关键点,为提高该技术的应用效果提供了参考。     

一起猪蓝耳病的诊治及防控措施

为了确诊一起疑似蓝耳病病例,本研究采用Elisa法和荧光定量PCR法进行血清学和分子生物学诊断,结果显示:流产母猪的S/P平均值显著超过正常母猪的S/P平均值,且荧光定量PCR结果显示蓝耳病病毒核酸为阳性,综合结果判断该病例为猪繁殖与呼吸综合征。     

实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用

聚合酶链反应(PCR)技术自1985年问世以来,以其灵敏性高、特异性强和速度快在分子生物学等科研领域得到了广泛应用.但是,由于传统的PCR技术不能准确定量,在操作过程中易受污染而使假阳性率偏高;因此,使其应用受到限制.实时荧光定量PCR技术拥有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点,已成为了分...     

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测假阳性的原因与预防措施

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)荧光PCR检测是防控非洲猪瘟(African swine fever,ASF)的关键环节。江苏省动物疫病预防控制中心对两家具备ASF检测资质的实验室,进行了阳性样品复核,发现检测结果存在假阳性。为避免实验室检测中出现检测失误,本文分析了导致ASFV检测假阳性结果的原因:实验室检测功能区域设置以及人员、物品流向不合理;检测人员操作不规范、不熟练,未在独立的生物安全柜中进行样品提取与试剂配制;实验室通风不良、清洁消毒不彻底,样品或提取模板间产生交叉污染,PCR试剂、产物、阳性质粒发生污染。为此,从实验室结构、环境、操作等方面提出控制建议:严格实验室功能分区与管理,规范各种试验操作与流程,加强实验室通风和消毒,控制试验中产生PCR污染的相关因素;同时省级实验室要加强对基层实验室的培训、指导和监督,使其在ASF防控中发挥应有的关键作用。本文为从事ASF等重大动物疫病PCR检测的实验室,在提高检测结果准确性和可靠性方面提供了参考。     

PCR方法检测猪病料的注意事项

本文对猪场临床病料诊断中所用的PCR方法进行了简单介绍,并对其操作方法、硬件设施、样本采集、操作要求及后续结果分析等注意事项进行了详细阐述,以期为猪场疫病诊断中正确应用PCR方法提供参考。     

水貂出血性肺炎的实验室诊断方法研究进展

水貂出血性肺炎是由铜绿假单胞菌引起的严重威胁养貂业的重要疾病之一。文中概述了水貂出血性肺炎的实验室诊断方法研究进展,在病原学方面,主要依靠细菌分离培养、生化试验、特异性抗原及其抗体的检查等;在分子生物学方面,主要依靠国内外相继建立起的PCR技术和LAMP技术等。介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床兽医科技工作者建立快速、简便、准确、实用的诊断提供参考。