林可霉素胶体金快速检测试纸条的研制

本文利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中林可霉素的试纸条,经过测试,该试纸条的检测限为20μg/L,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0,该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

牛副结核胶体金免疫层析试纸条的研制

将提纯的牛副结核分支杆菌重组蛋白MAP0862-2154c作为硝酸纤维素膜检测线的包被抗原,兔抗羊IgG作为硝酸纤维素膜质控线的包被抗体,金标羊抗牛IgG点喷到玻璃纤维素膜上,制成用于检测牛副结核抗体胶体金免疫层析试纸条。用牛的副结核标准阳性血清与检测试纸条反应,在检测线处出现红色反应带,而滴加阴性血清的试纸条检测线处未出现反应条带,上述2种血清在质控线处均出现红色反应条带;试纸条可检出牛副结核抗体的最低抗原包被浓度为400μg/mL;试纸条不与牛结核病、牛布鲁氏菌病的阳性血清发生反应;试纸条37℃保存9d后的检验结果与4℃保存的检验结果相同。所制备的试纸条具有灵敏、特异的优点,稳定性良好;10min左右即出结果,操作简便,可用于临床诊断。     

莱克多巴胺胶体金免疫层析法快速检测试纸条的研制

为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺（ractopamine,RAC药物残留）,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。     

胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原（抗体）与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。     

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测。以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带。经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作。     

黄曲霉毒素M1胶体金快速检测试纸条的研制

本文利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中的黄曲霉毒素M1试纸条,经过测试,该试纸条的检测限为0.5ng/mL,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0,该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测.     

鸡毒支原体胶体金免疫层析试纸条的研制和初步应用

为研制一种用于快速检测鸡毒支原体(MG)的胶体金免疫层析试纸条,采用直径20nm的胶体金颗粒标记纯化的MG多克隆抗体,硝酸纤维素膜检测线和质检线分别喷加纯化的MG多克隆抗体和兔抗鸡IgG抗体,制作胶体金试纸条。试纸条检测MG阳性显示两条红色反应条带;阴性为一条红色反应带。本试纸条可检测到1∶1 280倍稀释的MG抗原,即颜色变化单位为8×104 CCU/mL,具有高度的灵敏性。用试纸条检测衣原体、滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡大肠埃希菌和鸡白痢沙门菌等均呈阴性,表明该试纸条具有较好的特异性。对试纸条检测呈MG阳性的38只病鸡进行MG培养验证,所得结果一致;同时对MG培养检测的另外95份病鸡样品进行试纸条测试比对,符合率为96.84%,证明该试纸条具有很高的准确性。该胶体金免疫层析试纸条检测MG操作简单,灵敏度、准确度、特异性等均符合要求,可以用于养殖场批量MG的检测。     

链霉素胶体金快速检测试纸条的研制

本研究建立了一种基于免疫胶体金技术的链霉素快速检测方法。该方法检测灵敏度10ng·ml-(101ppb),蜂蜜样本检出限是40ng·ml-(40ppb),单个样本检测时间为5～10min。所研制试纸条产品检测变异系数小,批1间、批内检测结果重复性良好,可以应用于蜂蜜样本中链霉素的快速检测和现场筛查,具有较高的市场应用前景。     

牛奶中庆大霉素胶体金试纸条检测方法的研究

采用胶体金免疫层析法检测牛奶中庆大霉素残留。制备得到了庆大霉素半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫原和包被原,用免疫原制备特异性单克隆抗体,建立了一种简单、快速和高通量的检测牛奶中庆大霉素残留量的胶体金免疫层析法。试纸条对牛奶样品的检测限为20μg/L,假阳性率为0,假阴性率为0,重复性较好,牛奶样品可直接检测,检测时间只需5min,适合在基层抽检、乳品企业质控、原料奶站现场大量筛查使用。     

鹿布鲁菌病免疫胶体金检测试纸条的研制

利用SUMO-BCSP31重组大肠杆菌表达并纯化了布鲁菌BCSP31重组蛋白,并利用该蛋白研制了布鲁菌免疫胶体金检测试纸条。以BCSP31蛋白作为检测抗原,通过间接法研制胶体金试纸条检测鹿血清抗体。该试纸条与大肠杆菌、沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌和绿脓杆菌无交叉反应;检测阳性血清最大稀释倍数为1∶640,证明试纸条具有良好的特异性和敏感性。临床上对420只鹿进行检测,比对试纸条与虎红平板凝集试验(RBT)检测结果:阳性符合率为100%,阴性符合率为96%,Kappa值为0.73,两种方法符合率较高;比对试纸条与cELISA检测结果:阳性符合率为81%,阴性符合率为100%,Kappa值为0.88,两种方法符合率高。该试纸条简便快捷,具有较高准确性,可用于鹿布鲁菌病的现场初筛检测。     

禽流感病毒荧光免疫层析检测试纸条的研制

禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞4株。通过抗体的两两配对,基于荧光量子点作为免疫层析抗体的标记探针,借助免疫层析试纸条双抗夹心法原理,筛选出了适用于免疫层析的两株单克隆抗体,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV )荧光免疫层析检测试纸条[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV , AIV -QD-LFIA],并对该试纸条进行了特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析。试验结果显示:本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条检测禽流感标准抗原H5N1-HK的敏感性达到104 EID50 ,检测标准抗原H9N2-HK的灵敏度为102 EID50 ,比商品化的禽流感病毒抗原检测卡灵敏度高100倍,比国家标准实时荧光RT-PCR(rRT-PCR)灵敏度低约100倍;可特异性地检测出H5亚型、H7亚型、H9亚型、H1亚型、H3亚型等A型流感病毒,与 IBV 、 NDV 等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,且经过了国家流感中心标准样本盘的样品测试,特异性强;同时该法具有良好重复性,连续4周检测20个样品重复结果均为阳性;小规模田间试验显示该法用于禽流感病毒的普查监测结果可靠。可见本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条可满足禽流感病毒快速、高灵敏的检测需求,具有广阔的应用空间。     

胶体金免疫层析试纸条在禽病检测方面的应用与展望

胶体金免疫层析试纸条作为检测工具,具有特异性强、使用方便、结果易于判断等优点,被广泛应用于基层和现场检测。目前,已研发出多种应用于禽病抗原和抗体检测的胶体金免疫层析试纸条。本文从胶体金免疫层析试纸条的技术原理、研究进展及发展方向等方面进行简要综述。     

甲硝唑胶体金试纸条的研制

为方便药物残留的现场快速检测,利用胶体金免疫层析技术研制出了一种快速检测蜂蜜样本中甲硝唑残留的试纸条。将人工抗原与二抗包被到硝酸纤维素膜上依次作为检测线和控制线,样本中的甲硝唑与检测线上的人工抗原竞争性结合胶体金结合垫上的抗体-胶体金结合物,根据检测线和控制线的显色情况判断样本的阴阳性。实验结果显示：试纸条上人工抗原MNZ-BSA的包被量为0.5mg/mL,二抗羊抗鼠IgG的包被量为0.54 mg/mL;试纸条对于甲硝唑的检出限为1μg/kg,与4种硝基咪唑类药物有交叉反应,但甲硝唑的检出限最低;样本中添加溶液A处理并用乙酸乙酯作为提取剂,单个样本检测时间为20min。适用于甲硝唑残留的大规模现场快速检测。     

胶体金免疫层析试纸条与ELISA检测猪蓝耳病抗体的比对试验

胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体的结果中强阳性、中阳性、弱阳性、阴性分别为48.67%、18.58%、31.86%、0.88%,检测猪蓝耳病抗体合格率99.12%;ELISA检测猪蓝耳病抗体合格率95.58%,符合率为96.43%。胶体金免疫层析试纸条能够评价猪蓝耳病疫苗临床免疫状况,可进行猪蓝耳病抗体的定性检测。     

胶体金免疫层析试纸条法与血凝抑制试验、琼脂扩散法检测禽流感病毒抗体的比较

用本实验室建立的胶体金免疫层析试纸条法检测了鸡血清中的禽流感病毒抗体，并与传统的血凝抑制试验、琼脂扩散法检测结果进行了比较。结果表明，胶体金免疫层析试纸条具有特异性强、灵敏度高、方法简便、快速等优点，适合于鸡禽流感病毒抗体的现场快速检测。     

T-2毒素免疫胶体金试纸条的研制及其在饲料检测中的应用

本实验采用免疫胶体金技术,建立了一种快速检测饲料中T-2毒素的方法。利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记抗T-2毒素单克隆抗体并喷于玻璃纤维素膜上,T-2-HS-BSA及羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维素膜上,依次将样本垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组装在PVC板上,并组装在试剂板中。测试结果表明,T-2免疫胶体金试纸条的检出限为100μg/kg,性能稳定、特异性强、准确率高,15 min内即可完成检测。     

硝基呋喃类药物胶体金免疫层析试纸条的研制

介绍了检测饲料中硝基呋喃类药物胶体金试纸条的研制方法,主要包括胶体金的制备、金标抗体的制备及试纸条的组装和性能测试等内容。试纸条能同时检测饲料中8种硝基呋喃类药物:呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、硝呋索尔、呋喃苯烯酸钠、硝呋烯腙、硝呋酚酰肼,检测限范围为0.2⁰.8μg/g。因此,该试纸条可应用于饲料中呋喃类药物的快速检测和现场筛查,具有较高的市场应用前景。     

大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

为建立快速检测鼠感染大肠杆菌O157∶H7后的抗体,本研究采用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果表明,该试纸条仅与O157∶H7阳性鼠血清发生特异性反应,用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157∶H7免疫鼠血清,抗体效价分别为1×106和1×105,两者的敏感度相当。该试纸条操作简便,10min可出结果,适用于调查与追溯鼠O157∶H7感染状况时的现场检测。     

弓形虫单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析试纸条研制

弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,TOX)引起的一种重要人兽共患寄生虫病,该虫是一种可寄生于有核细胞的原虫。当前对弓形虫病的诊断和治疗虽已有一些方法,但均不够理想。本文就该病的免疫学诊断方法的研究进展加以概述,以研究SAG2为检测抗原,以制备弓形虫SAG2蛋白的单克隆抗体和免疫胶体金试纸条为核心,建立一种快速、特异、便捷的检测方法,为我国弓形虫病的诊断与防治、弓形虫与宿主关系、以及弓形虫的分子生物学等研究奠定良好基础。     

大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

用E.coliO157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜（NC）上;组装成双抗夹心法O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157∶H7,敏感度为106CFU/mL,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157∶H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1~5 min内可得出检测结果,便于O157∶H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。