15株禽源沙门菌的分离鉴定与耐药性试验

本试验旨在对沙门菌临床分离株进行鉴定及其耐药性进行研究。通过收集2012年2月-7月间具有典型沙门菌病病变特征的病例,无菌采集病死禽的肝脏、心、卵巢等脏器接种血清营养琼脂培养基,以麦康凯琼脂培养基纯化分离菌,并检测其生化特点,16S rDNA基因测序法快速鉴定分离菌株,然后进一步鉴定血清型;同时用15种抗菌药物进行药敏试验。结果显示,有15株细菌在麦康凯琼脂培养基上为无色、透明的菌落,能利用葡萄糖、甘露醇,不发酵乳糖、蔗糖,符合沙门菌的生化特性。同时,15株沙门菌的16S rDNA序列分析结果显示,分离株的同源性达到97%以上。15株沙门菌的血清学试验结果显示,有7株鼠伤寒沙门菌、5株伤寒沙门菌、2株肠炎沙门菌、1株鸡白痢沙门菌。药敏试验结果显示,分离细菌对链霉素、萘啶酸、强力霉素和美洛西林耐药率高。     

禽沙门菌多重PCR检测方法的建立与应用

沙门菌是重要的人畜共患病原菌,血清型很多。不同种类、不同日龄的家禽均可感染,是严重危害养禽业的病原之一。本文通过血清学、分子生物学方法对上海部分鸡场的沙门菌进行了检测,与传统检测方法相比,缩短了检测时间,提高了检测的特异性和敏感性。实验结果发现禽伤寒/鸡白痢沙门菌、鸡肠炎沙门菌血清学为阳性的,经多重PCR鉴定,发现绝大部分不是禽源性沙门菌,由此可见,沙门菌多重PCR检测为临床诊断提供了一种快速、敏感和特异性高的诊断方法。     

禽沙门菌病检测技术研究进展

禽沙门菌病是家禽养殖领域中的常见病与高发病,给家禽产业中造成严重的经济损失,同时也严重威胁着禽产品消费者的健康安全.文章从沙门菌分类学、禽沙门菌流行血清型、快速检测技术以及分子分型技术等方面阐述了当前禽沙门菌的研究进展,以期为禽沙门菌病的防治提供参考.     

华中地区鸡源沙门菌分离鉴定及耐药性分析

为了探明华中地区种鸡场沙门菌(Salmonella)的优势血清型和耐药情况,本研究从湖北、河南、湖南等省市22个规模化鸡场采集病鸡、死胚及弱雏组织样品3 724份,通过分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型试验确定分离菌种属及其血清型,并采用Kirby-Bauer法对分离菌株进行了耐药性分析。结果显示,本试验从3 724份病料中共分离鉴定出124株沙门菌,其中79株为D群肠炎沙门菌(63.71%,79/124),34株为D群鸡白痢沙门菌(27.42%,34/124),8株为B群鼠伤寒沙门菌(6.45%,8/124),有3株沙门菌未能确定血清型。O抗原鉴定79株肠炎沙门菌和34株鸡白痢沙门菌为O9,8株鼠伤寒沙门菌为O4。H抗原鉴定79株肠炎沙门菌为Hg,m,8株鼠伤寒沙门菌为Hi。药敏试验结果显示,124株分离菌株对萘啶酸、氨苄青霉素、四环素和多西环素耐药率分别为95.97%(119/124)、91.94%(114/124)、57.26%(71/124)和70.16%(87/124);对复方新诺明和红霉素耐药率分别为25.81%(32/124)和12.10%(15/124);对氯霉素、庆大霉素、头孢噻肟和卡那霉素耐药率分别为6.45%(8/124)、1.61%(2/124)、1.61%(2/124)和0.81%(1/124);对左氧氟沙星、阿米卡星和多黏菌素B完全敏感。99.19%(123/124)的分离株至少对一种药物耐药,87.10%(108/124)的分离株表现多重耐药。本研究为华中地区养鸡场沙门菌的诊断及防控提供了数据支撑。     

鸭源沙门菌的分离鉴定、耐药性及致病性分析

【目的】为防控鸭源沙门菌感染,本试验针对四川德阳地区鸭源沙门菌的感染情况开展研究。【方法】从该地区3个种鸭场和1个鸭孵化场共采集不同类型样本222份,按国标GB 4789.4－2016方法对沙门菌进行分离鉴定,进一步通过K-B法检测分离菌对14种抗菌药物的敏感性,并对鉴定出的稀有血清型沙门菌进行致病性研究。【结果】疑似沙门菌分离株在BS琼脂上呈黑色、灰色或棕褐色、有金属光泽菌落,在XLD琼脂上呈无色透明、或中心黑色或几乎全黑的菌落。将疑似沙门菌株接种三糖铁琼脂斜面进行生化鉴定,疑似沙门菌分离株均能使三糖铁斜面变为红色,底部变为黄色带黑色,符合沙门菌生化特性。通过PCR对沙门菌特异性基因invA进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳后可在500 bp左右观察到目的条带,确认共分离到17株沙门菌,总分离率为7.7%（17/222）,包括鼠伤寒沙门菌、哈托沙门菌和波恩沙门菌3种血清型,其比例分别为47.1%（8/17）、29.4%（5/17）和23.5%（4/17）,优势血清型为鼠伤寒沙门菌。分离菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗菌药耐药率最高,对氨苄西林和链霉素的耐药率分别为82.4%（14/17）和88.2%（15/17）,对喹诺酮类抗菌药最敏感,其中对萘啶酸100%（17/17）敏感。分离菌存在严重的多重耐药现象,其中耐10种以上（包括10种）抗菌药的6株,占比35.2%,且10种抗菌药分别来自至少6类不同种类抗菌药;耐8种抗菌药物的2株,占比11.8%;耐5~7种抗菌药的6株,占比35.3%;耐2~3种抗菌药物的共3株,占比17.6%。通过寇氏改良法测得稀有血清型菌株H4、B2的LD₅₀分别为3.98×10⁶和1.58×10⁶ CFU,致病性试验结果表明,哈托和波恩沙门菌均能引起小鼠急性死亡,脏器充血、出血,细胞变性等。【结论】本研究成功分离到17株鸭源沙门菌,从鸭中分离到哈托沙门菌在国内外属首次。分离菌具有严重的耐药性和多重耐药现象,2株稀有血清型沙门菌对小鼠的致病力均较强,且致病作用相似。本研究结果可为鸭场沙门菌病的防治提供参考。     

沙门菌多重PCR检测方法的建立及其应用

为鉴定临床上常见的3种沙门菌血清型,针对特异性基因invA(沙门菌属)、sdfl(肠炎沙门菌)、Stm4495(鼠伤寒沙门菌)和SPUL-2693(鸡白痢沙门菌)设计引物,利用标准菌株通过优化体系成功建立了沙门菌的四重PCR检测方法.结果 显示:该方法特异性好,敏感性高(检测下限:基因组为500 pg/mL,菌液为10...     

华东地区禽源沙门菌的分布及血清型分析

本文旨在研究中国华东地区沙门菌分布情况及其优势菌的血清型变异情况.收集2010年10月-2012年8月来源于江苏、安徽、上海等地区的1 730份禽源样品,进行增菌、纯化、PCR鉴定、血清学试验及生化试验,并对7株血清型有变异的疑似鸡白痢沙门菌进行进一步序列测定,对血清型进行分析.结果表明,本次调查中共分离沙门菌87株,包括鼠伤寒沙门菌、德尔卑沙门菌、圣保罗沙门菌、鸡白痢沙门菌及阿巴特图巴沙门菌,并且在鸡白痢沙门菌血清型H相存在Hd、Hg阳性的现象.结果提示,中国禽类沙门菌感染以鸡白痢沙门菌感染为主,且存在血清型变异情况,变异概率呈上升趋势.     

青岛地区肉鸡生产链中沙门菌的分离及血清学鉴定

为了解青岛地区肉鸡生产链中各环节沙门菌的分布及其血清型状况,采用常规培养与PCR鉴定对不同环节沙门菌进行分离。采用玻片凝集试验与x MAP~#174;液相芯片分型法进行血清型鉴定。结果青岛地区肉鸡生产链沙门菌总阳性率为10.10%。养殖环节中种鸡场、孵化场、商品鸡场的分离率分别为0.67%、37.76%、9.20%;屠宰加工过程中淋洗前、淋洗后、预冷液、预冷后、分割环节分离率分别为3.69%、3.86%、5.7%、16.16%、31.43%;市售成品为17.15%。78.65%菌株为肠炎沙门菌。结论种鸡场沙门菌净化与孵化场种蛋消毒及淘汰弱雏是青岛地区肉鸡养殖环节沙门菌的关键控制措施;预冷液与分割车间的环境卫生是其屠宰加工环节的关键控制点。青岛地区肉鸡生产链中流行血清型为肠炎沙门菌。     

同时感染雏鹅的两种血清型沙门菌分离鉴定及遗传进化分析

为了解鹅源沙门菌的病原学特性,本研究从一发病雏鹅体内分离到2株细菌,根据培养特性、染色镜检、生化试验、PCR检测及血清学分型结果鉴定,分离菌分别为鼠伤寒沙门菌与印第安纳沙门菌。药敏试验表明,2个沙门菌分离株均为多重耐药菌株,其中鼠伤寒沙门菌耐3种药物(耐药率16.7%),而印第安纳沙门菌耐12种药物(耐药率66.7%);2个分离株均对头孢曲松钠、呋喃唑酮、多粘菌素B及链霉素表现高度敏感。对分离菌株16S r DNA基因进行扩增测序后,与Gen Bank登录的22株不同血清型沙门菌序列进行比较,构建系统进化树,结果显示:2个分离菌株具有较高同源性,与大多数泛嗜性血清型亲缘性较近,而与鸡沙门菌感染密切相关的血清型亲缘性相距较远。本研究为鹅沙门菌病的流行病学调查积累了数据,也为临床防控提供了试验依据。     

鸡源沙门菌的血清型鉴定与耐药性分析

为了解湖北省鸡源沙门菌的血清型分布及耐药性规律,对分离的56株鸡源沙门菌进行了血清型鉴定。结果显示:鸡白痢沙门菌所占比例最高(62.5%),为优势血清型;肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌所占比例也较高,分别为16.1%、10.7%。采用纸片扩散(K-B)法检测分离菌株对15种药物的敏感性,56株鸡源沙门菌对呋喃妥因均敏感,对磺胺异恶唑和阿莫西林表现为较高的耐药性(大于80%),对其他12种抗菌药物表现出不同程度的耐药性(14.3%~75%);同时多重耐药现象严重,三重以上耐药菌株占分离菌株的96.4%,其中5耐最为严重,占28.5%。     

贵妃鸡死胚和死雏沙门菌的分离与鉴定

沙门菌感染是一种人畜共患病,人的大多数沙门菌感染直接或间接地与所食用的动物性食品有关,且致病因素复杂多变[1-3]。近几年来,人和动物的沙门菌感染十分严重[4]。沙门菌的血清型众多,目前,国际沙门菌中心实验室报告的血清型约有2 300个,我国至1991年底至少已报道37个群、255个血清型及     

禽源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

2013年对江苏、安徽、山东、浙江等地的禽场进行了沙门菌分离、鉴定和耐药性分析。从506份样品中分离获得119株沙门菌,鸡、鸭和鹅的沙门菌分离率分别为28.35%(114/402)、5.40%(4/74)和33.33%(1/30)。鸡源菌株均属于D群,鹅源菌株属于C1群,鸭源菌株分属于C1和E1群。择70株进行了21种抗菌药敏感性试验,结果显示,所有分离株均表现出不同程度的耐药性,分离株对萘啶酸耐药最为普遍,耐药率高达90.00%,其次为四环素(72.86%)、强力霉素(69.57%)、链霉素(62.86%)、复方新诺明(58.57%)和大观霉素(52.86%)。87.14%的分离株耐3种以上抗菌药,其中有1株可耐9种药物。耐6种抗菌药的菌株数量最多,约占37.14%,最常见的多重耐药谱为强力霉素/萘啶酸/链霉素/大观霉素/四环素/复方新诺明。     

鹅源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验

对临床送检疑似鼠伤寒沙门菌感染的病例进行细菌分离,利用沙门菌所具有的种属特异性的亲膜蛋白基因inv A做PCR鉴定,结合生化鉴定和血清型鉴定,并分析分离菌的耐药性。从4例病死鹅病料中共分离到4株细菌,经inv A PCR鉴定、生化特点和血清型鉴定确认为鼠伤寒沙门菌。药敏试验结果显示,4株分离菌对庆大霉素、诺氟沙星、头孢曲松等药物敏感性较强,但对多黏菌素B、多西环素耐药。其中,有2个分离株表现出多重耐药性。     

水禽源沙门菌的分离鉴定与PFGE分子分型

为了明确目前广东省水禽源沙门菌的优势血清型及其分子流行病学动态,采用细菌分离纯化、生化特性鉴定和PCR扩增从316份样品中分离鉴定出188株水禽源沙门菌;采用玻片凝集法将分离株分为4(B、D、C1、E1)个群别8种血清型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型法对分离株进行分子分型,得到PFGE-XbaⅠ带型62种,菌株间相似度为54.1%~100.0%,分为A^I共9个聚类簇与11个单一基因型。结果表明,广东水禽源沙门菌优势血清型为鼠伤寒沙门菌,PFGE-XbaⅠ带型具多样化,其中11种PFGE-XbaⅠ带型在区域和年份小范围集中流行,32种带型跨区域与跨时间交叉分布呈散在"流行暴发",不同血清型分离株的PFGE-XbaⅠ带型差异较大,相同血清型的分离株PFGE-XbaⅠ带型一般具有相同图谱型或聚类在一起。本研究采用PFGE法进行分子分型分析具有流行病学意义,并探明了本地沙门菌分离株血清型与分子分型的关系。     

鹌鹑沙门菌的分离鉴定

对病死鹌鹑的肝脏和心血进行了细菌分离培养、生化鉴定及动物接种试验,确定为沙门菌。在水井、禽舍输水系统处采取的两处水样中,同样分离鉴定出了上述细菌。动物试验结果表明,从脏器中分离到的沙门菌比从水样中分离到的沙门菌致病力更强。药敏试验结果表明,从脏器中分离的沙门菌对强力霉素、多黏菌素B敏感,水样中分离的沙门菌对卡那霉素敏感。     

滁州活禽市场鸡源沙门菌的分离鉴定与药敏试验

从安徽滁州地区某活禽市场采集鸡的肛拭子样品110份,接种到麦康凯培养基分离纯化,再选取典型菌落进行三糖铁、吲哚、甲基红、VP等生化试验及16SrRNA的PCR鉴定,最后对沙门菌分离株进行药敏试验。110份样品经分离纯化得到29株疑似沙门菌菌株,通过生化试验及16SrRNA的分子鉴定,共分离到23株沙门菌,检出率为20.9%;药敏试验表明,沙门菌分离株对链霉素和阿米卡星的耐药率相对较低,而对庆大霉素、大观霉素、哌拉西林的耐药率均高达82.61%。对克林霉素的耐药率为100%。     

成都地区鸡蛋沙门菌污染检测及分离株耐药性分析

为了解成都地区不同饲养方式和不同包装形式鸡蛋壳表面和蛋内容物沙门菌污染情况及菌株的血清型分布与耐药性,本试验对采自成都市不同超市、农贸市场、农户共60枚鸡蛋进行沙门菌检测和血清型鉴定,用K-B纸法进行抗生素药物敏感试验。测得集约化饲养精包装的鸡蛋蛋壳表面和蛋内容物及集约化饲养散包装鸡蛋壳表面均未检测出沙门菌,而集约化饲养散包装鸡蛋内容物的沙门菌检出率为40%,散养精包装鸡蛋的蛋壳和蛋内容物的检出率分别为6.67%、0%,散养散包装鸡蛋的蛋壳和蛋内容物的检出率分别为26.67%、86.67%;共分离出24株沙门菌,包括8种血清型,流行菌株是肠炎型;10种抗生素药物敏感试验中,沙门菌对青霉素、四环素和氨苄西林的耐药率分别为100%、70.83%和87.50%,对洛美沙星、卡那霉素、环丙氟哌酸、链霉素、诺氟沙星、庆大霉素、阿莫西林的耐药率为4.17%~29.17%不等。最终得出成都地区鸡蛋的沙门菌污染状况是:散养高于集约化饲养,散包装高于精包装,除散养精包装鸡蛋外鸡蛋内容物高于或等于蛋壳表面;抗生素选择压力导致不同地区沙门菌分离株的血清型和耐药性有所不同。     

鸡白痢沙门菌等位基因特异性PCR检测方法的建立

根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同，设计和合成了等位基因特异性PCR引物，建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法，并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示，该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌，检测灵敏度达100PgDNA。对35个经常规方法鉴定的鸡白痢沙门菌分离株应用等位基因特异性PCR方法进行鉴定，鉴定出33株鸡白痢沙门菌，符合率为94．3％。表明，建立的等位基因特异性PCR方法能够准确而快速地鉴定鸡白痢沙门菌。     

沙门菌基因分型研究进展

沙门菌是一种常见的致病菌,种类繁多,具有2 600多种血清型。近年来,基于基因序列的分型方法被应用于沙门菌基因分型的研究中,并且显示了很好的分型能力,并成为沙门菌传染病暴发调查和分子流行病学分析中的常规工具。基因分型方法主要有:脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)、基因组重复序列PCR(repetitive extragenic palindromic PCR,Rep-PCR)、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、全基因组单核苷酸多态性分型(whole gene single nucleotide polymorphism,wgSNP)、核心基因组多位点序列分型(core genome multilocus sequence typing,cgMLST)等,每种分型方法也有各自的优缺点和使用条件及适用范围。其中,随着全基因组测序(WGS)时代的到来,cgMLST和wgSNP方法已经成为当前研究热点。