间接Dot—ELISA检测EDS—76病毒抗原的研究

本研究成功地建立了间接酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＥＤＳ－７６病毒抗原的标准化程序。对纯化ＥＤＳ－７６病毒抗原的最低检出量为１ｎｇ／Ｄｏｔ,其敏感性约为ＨＡ的１５．６倍。ＥＤＳ－７６阳性鸡血清特异性阻断试验及交叉反应试验证明,该法对ＥＤＳ－７６病毒抗原的检测具有特异性。试验结果表明,间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ－７６病毒抗原,具有敏感性高、特异性强、重复性好、经济、方便、快速等优点,适合于大规模样本的检测。     

四种检测猪的繁殖与呼吸综合征病毒血清抗体方法的比较

本试验利用猪的繁殖与呼吸综合征病毒美洲株和上海分离株 Ｓ Ｈ１ 建立了 Ｉ Ｆ、 Ｉ Ｐ Ｍ Ａ 和 Ｄｏｔ － Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ三种抗体检测方法, 对１２０ 份随机抽样猪血清检测表明, 美洲株抗原组 Ｉ Ｆ Ａ 的阳性率为３０ ．８ ％ 、 Ｉ Ｐ Ｍ Ａ 的阳性率为３０ ％ 、 Ｄｏｔ － Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 的阳性率为３２ ．５ ％ , Ｓ Ｈ１ 分离株抗原组 Ｉ Ｆ Ａ 的阳性率为３７ ．５ ％ 、 Ｉ Ｐ Ｍ Ａ 阳性率为３７ ．５ ％ 、 Ｄｏｔ － Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 的阳性率为４０ ％ 。进口 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒的检测阳性率为２６ ．７ ％ 。     

四种检测猪的繁殖与呼吸综合征病毒血清抗体方法的比较

本试验利用猪的繁殖与呼吸综合征病毒美洲株和上海分离株ＳＨ１建立了ＩＦ，ＩＰＭＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ三种抗体检测方法，对１２０份随机抽样猪血清检测表明，美洲株原组ＩＦＡ的阳性率为３０．８％，ＩＰＭＡ的阳性率为３０％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为３２．５％，ＳＨ１分离株抗原组ＩＦＡ的阳性率为３７．５％，ＩＰＭ阳性率为３７．５％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为４０％，进口ＥＬＩＳＡ试剂盒的检测阳性率为２６     

斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒及抗体

采用鼠抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）高免血请作第１抗体，利用酶标羊抗鼠ＩｇＧ作第２抗体，建立间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测ＩＢＶ抗原；利用鸡抗ＩＢＶ血清阻断试验检测ＩＢＶ抗体。试验表明，本程序检测ＩＢＶ抗原及其抗体具有高度过感性和特异性。最低抗原检出量达１０￣（－８）ｇ数量级，阳性检出率９８％，阳性阻断率１００％。     

鸡传染性支气管炎（IB）诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒,收集尿囊液,用１％胰蛋白酶处理制备ＩＵＢＶ血凝抗原,建立了血凝－血凝抑制检测ＩＢＶ抗体的方法,其特异性强,操作简便。另外,本试验建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法用于检测ＨＢＶ,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗ＩＢＶ抗体,经ＰＰＡ－ＤＡＢ－Ｈ２Ｏ２显色,其检测结果与双抗体夹心ＥＬＩＳＡ的检测结果一致。     

Dot—ELISA在鸡IBD免疫检测及诊断中的应用研究

利用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）细胞适应株在鸡胚ＣＥＦ单层培养物上增殖后经超速冷冻离心制备抗原，以国产ＮＣ膜为载体建立了检测与诊断鸡ＩＢＤ的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经与ＡＧＰ、ＶＮ、ＥＬＩＳＡ等方法进行比较，表明本方法灵敏，快速，简易，特异性强，重复性良好。对ＩＢＤ抗体的检测结果表明，采用首次以ＩＢＤ弱毒苗与灭能油乳剂苗同时免疫，再次用油乳剂苗加强免疫的接种程序，可获得显著而持久的抗体水平，带     

Dot-ELISA方法检测鸡肠梭菌抗毒素的研究

将肠梭菌培养液过滤除菌，滤液经硫酸铵沉淀，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析，收集毒素峰洗脱液，浓缩后制成毒素纯化抗原。用混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体，制成检测肠梭菌抗毒素的快速诊断膜。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检查１０份肠梭菌高免鸡血清均呈阳性反应，１５份鸡巴氏杆菌阳性血清、１０份鸡波氏杆菌阳性血清、１５份鸡大肠杆菌阳性血清、１０份鸡葡萄球菌阳性血清及３０份健康鸡血清均为阴性。鸡肠梭菌阳性血清均可被特异性抗原阻断。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ与常规间接ＥＬＩＳＡ差异不显著（Ｐ＞００５），两者的总符合率为９５００％。     

Dot－ELISA在鸡IBD免疫检测及诊断中的应用研究

利用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）细胞适应株在鸡胚ＣＥＦ单层培养物上增殖后经超速冷冻离心制备抗原，以国产ＮＣ膜为载体建立了检测与诊断鸡ＩＢＤ的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经与ＡＧＰ、ＶＮ、ＥＬＩＳＡ等方法进行比较，表明本方法灵敏，快速，简易，特异性强，重复性良好。对ＩＢＤ免疫抗体的检测结果表明，采用首次以ＩＢＤ弱毒苗与灭能油乳剂苗同时免疫、再次用油乳剂苗加强免疫的接种程序，可获得显著而持久的抗体水平；带母源抗体（ＭＡｂ）的雏鸡于２１日龄首次免疫，效果良好；带ＭＡｂ的鸡胚于１８日胚龄接种ＩＢＤ弱毒苗，雏鸡出壳后可在较长时间内获得良好的保护。     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

珍禽霉形体抗体检测方法的建立和应用

本试验经培养特性,形态特征,红细胞吸附试验和生长抑制试验等从８株珍禽霉形体中筛选出１株具有代表性的菌株ＭＧ－Ｐ,将ＭＧ－Ｐ和标准株ＭＧ－Ｓ０分别建立了ＨＩ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验,检测了３批１２０份共１００种珍禽动物的血清样本,ＭＧ－Ｐ的阳性检出率为ＨＩ１４．２％（１７／２０）,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ１６．７％（２０－１２０）,两法阳性符合率为８５％（１７／２０）;ＭＧ－Ｓ０的阳性检出率为ＨＩ９．２％     

大片吸虫分泌排泄抗原的分析

取广西牛源大片吸虫成虫制备出分泌排泄（ＥＳ）抗原，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝染色显出７条蛋白带，免疫印迹试验（ＥＩＴＢ）测出其主要特异性免疫成分分子量为３６．３，２８．５及２５．５ｋＤ其中２８．５与２５．５ｋＤ与法国肝片吸虫ＥＳ的部分抗原成分相同，两种片形吸虫与抗血清可以交叉使用无特异性，但与日本血吸虫抗原及抗血清均无交叉反应，人工感染大片吸虫２周后的兔血清即能识别此抗原，ＥＳ抗原提取方法     

伤寒沙门氏菌SOD的提取及抗原性分析

目的：提取伤寒沙门氏菌ＳＯＤ,研究ＳＯＤ的抗原性及为进一步研究ＳＯＤ与细菌毒力的关系提供材料。方法：经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ纤维素柱层析提取伤寒沙门氏菌ＳＯＤ。用聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质染色及酶活性染色鉴别ＳＯＤ纯度。采用原子吸收分光光度法和酶活性抑制试验检测ＳＯＤ的辅基。将提取的ＳＯＤ免疫家兔制备兔抗ＳＯＤ血清,用双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析伤寒沙门氏菌ＳＯＤ的抗原性。结果：所提取的ＳＯＤ比活性为３２７０Ｕ／ｍｇ,其纯度达到了电泳纯,辅基为Ｆｅ原子。双向琼脂扩散试验结果显示抗伤寒沙门氏菌Ｆｅ－ＳＯＤ血清与牛红细胞ＳＯＤ不形成沉淀线,抗血清可抑制伤寒沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌Ｆｅ－ＳＯＤ和Ｆｅ／Ｍｎ－ＳＯＤ活性,对Ｍｎ－ＳＯＤ活性无抑制作用。结论：伤寒沙门氏菌Ｆｅ－ＳＯＤ与牛红细胞ＳＯＤ无交叉反应,但和鼠伤寒沙门氏菌ＳＯＤ之间有共同抗原,也提示ＳＯＤ的辅基似乎决定了其抗原特异性     

副结核分枝杆菌McAb的某些特性鉴定

以超声波粉碎的副结核分枝杆菌地方株Ｃ２抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经与ＮＳ－１骨髓瘤细胞三次融合，获得了３株能稳定分泌抗副结核分枝ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系，其染色体数目为７８－１１０条，分别为ＩｇＭ和ＩｇＧ２。应用间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养液，腹水和血清效价为１０＾－２～１０＾－７。交叉试验证明，ＭｃＡｂＯ１与受试的各株副结核分枝杆菌反应强烈，与牛分枝杆菌和草分枝杆菌有微弱特异性抗原之一。ＳＤＳ－Ｐ     

Dot-ELISA快速检测鱼类运动性气单胞菌的研究

制备了引起常见鱼病的６株运动性气单胞菌的兔抗血清，建立了检测运动性气单胞菌的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法。该法能检出含１０７菌细胞／ｍＬ的菌悬液及１０个菌细胞／ｍＬ增菌２０ｈ的培养物，与运动性气单胞菌群内的菌株，均呈现明显的阳性反应，不与鲁克耶尔森氏菌、荧光假单胞菌、鳗弧菌等１０株对照菌发生影响检测结果的交叉反应。应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ与常规分离法分别对人工感染的４０份样本进行检测，其阳性数分别为３３和３４，两法符合率为９７％。经Ｘ２检验表明，两法检测结果间有显著意义的一致性（Ｐ＜０．０５），但前者可在２４ｈ内报告结果。应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ又对８株鱼源菌检定，结果与细菌学检查相符。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有快速、敏感、特异、实用的优点，可用于引起常见鱼病的运动性气单胞菌群的检测。     

抗原捕捉间接ELISA检测IBDV—vero细胞毒方法的建立

建立了检测用ｖｅｒｏ细胞增殖ＩＢＤＶＸ,Ｎ毒滴度的抗原捕卟间接ＥＬＩＳＡ法,并与常规ＴＣＩＤ５０测定法作了比较,结果表明,ＡＣＩ－ＥＬＩＳＡ法测定的Ｐ／Ｎ值与ＴＣＩＤ５０呈明显的正相关,与Ｘ,Ｎ毒的相关系数分别为０．９６６８,０．９３８。ＡＣＩ－ＥＬＩＳＡ法可用于ＩＢＤＶ－ｖｅｒｏ细胞毒的定量监测     

用双夹心法ELISA检测兔轮状病毒的研究

建立了检测兔轮状病毒抗原的夹心法ＥＬＩＳＡ（ＤＳ－ＥＬＩＳＡ）。用此法检测了６７份兔腹泻粪便样品和腹泻死亡兔肠内容物样品。轮状病毒（ＲＶ）阳性检出率（３１．３４％）明显高于双抗体夹心法ＥＬＳＡ（２５．３７％）和对流免疫电泳（１６．４１％）。经阻断试验和重复性试验，证明了ＤＳ－ＥＬＩＳＡ具有特异性强和重复性好等优点。     

减蛋综合征贵州分离毒全基因组探针的制备及检测

为准确检测鸡群中减蛋综合征病毒感染情况,从减蛋综合征病毒（ＥＤＳ）贵州分离毒株ＨＳ－１中提纯病毒ＤＮＡ后,用地高辛标记制备了全基因组探针。在Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ中该探针不与正常鸭胚尿囊液核酸提取物及马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ发生反应,只与３株ＥＤＳ病毒（国际标准毒ＡＶ－１２７、贵州分离毒ＨＳ－１、南京分离毒（ＧＣ２）ＤＮＡ呈阳性反应,具有较高的特异性;可检测出３０ｐｇ的同源ＤＮＡ,具有较强的灵敏度     

鸭乙型肝炎病毒的致病性及致癌性研究──鸭乙型肝炎病毒表面抗原的纯化

应用氯化铭密度梯度离心技术，结合Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验、￣（３２）Ｐ标记的鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ探针进行斑点杂交试验，从ＤＨＢＶ阳性的启东鸭血清中分离得到高纯度的ＤＨＢｓＡｇ颗粒，直径范围４０～６０ｎｍ，在ＣｓＣｌ溶液中的浮密度为１．１５ｋｇ／Ｌ，大多数呈１０ｎｍ厚的空心结构，形态不规则，近似球形，部分颗粒表面有凹陷结构，少数颗粒表面出现缺刻。以纯化的ＤＨＢｓＡｓ免疫新西兰大白兔，制备了高度特异性的兔抗ＤＨＢｓ血清及其纯化的兔抗ＤＨＢｓＩｇＧ。     

斑点免疫金渗滤法检测鸭肝炎病毒的研究

用胶体金标记提纯后的兔抗鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）ＩｇＧ，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金为标记物的检测ＤＨＶ的斑点免疫金渗滤法（ＤＩＧＦＡ），并确定了最佳试验条件。该法既可定性，亦可定量，对纯化ＤＨＶ的最小检测量为４．１２ｎｇ／点，其敏感性为抗原斑点试验（ＡＳＴ）的２倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＤＩＧＦＡ检测ＤＨＶ具有较高的特异性。对ＤＨＶ鸡胚尿囊液ＤＩＧＦＡ法检出率为１００％。ＤＩＧＦＡ和ＡＳＴ法对３６份临床样本检测阳性率分别为８３．３％和７５％，其阳性符合率为８６．７％。随机抽样的６份ＤＩＧＦＡ阳性肝脏样本经人工发病试验后电镜检查，均发现大量直径３０～４０ｎｍ的病毒粒子。实验结果表明，ＤＩＧＦＡ法是一种微量、敏感、特异、快速、简便的检测ＤＨＶ方法。     

亲和层析法提纯鸡马立克病毒gB基因重组产物

应用针对鸡马立克病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）抗原单克隆抗体ＩＡＮ８６制备亲和层析柱，从感染重组杆状病毒（ｇＢ－ＡｃＮＰＶ）的昆虫细胞中提纯鸡ＭＤＶｇＢ基因重组产物，获得较好效果。提纯的蛋白质在ＳＤＳ－ｐＡＧＥ中出现的５条条带中有４条在免疫印迹试验中出现，其分子量为１００，６０，４９，４０ｋｄ占蛋白总量的５４．７％。试验证明用单克隆抗体亲和层析法提纯ＭＤＶｇＢ基因重组产物是一个行之有效的方法。