大口黑鲈肝脾肿大病病原研究

为了查明2009年10月广东省佛山地区养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)中暴发的传染性疾病的病原,对病鱼的肝脏、脾脏和腹隔膜进行切片电镜观察,发现细胞质中有大量病毒颗粒,切面为六角形,直径约145～150 nm,病毒为二十面体对称结构、无囊膜、似虹彩病毒的病毒粒子.用除菌的病鱼组织滤液感染健康大口黑鲈,被感染鱼死亡率达90%以上.根据已知虹彩病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因序列设计特异引物,提取人工感染发病鱼的肝脏、脾脏、肾脏组织的DNA进行PCR扩增,将扩增片段进行序列测定与分析,结果表明该序列与已报道的鳜(Siniperca chuatsi)传染性脾肾坏死病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus,ISKNV)MCP基因同源性为98%.电镜观察和MCP基因测序分析结果显示,该病毒的分类地位为虹彩病毒科(Iridoviridae)细胞肿大病毒属(Megalocytivirus).     

美国红鱼病害防治实用技术

美国红鱼 (Reddrum )即眼斑拟石首鱼(Sciaenopsocellatus) ,又称红拟石首鱼、黑斑石首鱼、红鼓鱼、黑斑红鲈、斑尾鲈等。原产于美国东南沿海 ,是美国近几年重要商业养殖鱼类 ,也是我国引进养殖的新品种。据报道 ,美国红鱼病害有二三十种 ,本文将已发现的主要病害介绍如下。1病毒性疾病1 .1病毒性红细胞坏死病病原 :属DNA病毒 ,虹彩病毒科 ,对热不稳定。病状 :幼鱼对该病的敏感性大于成鱼。病鱼的鳃和内脏呈苍白色 ,活动无力 ,对外界刺激的反应弱 ,摄食差或拒食。高温季节易发生此病。防治方法 :适当投一些抗菌或抗病毒的药饵 ,以减少因合…     

真鲷虹彩病毒引起养殖斑石鲷大规模死亡的研究

2017年8月,山东省烟台市某养殖场网箱养殖的斑石鲷(Oplegnathus punctatus)幼鱼突然发病并大量急性死亡。疾病调查显示,养殖海域水温为26℃~28℃;病鱼为4~5月龄,全长为(16.3± 1.6) cm,体重为(156.9±37.0) g;80万尾斑石鲷幼鱼2周内累积死亡率达90%以上,经济损失惨重。临诊检查发现,病鱼体表无明显损伤,但活力差、呼吸急促。剖检可见病鱼脾肿大、质地脆、易碎,肾糜烂,肝有出血点。组织切片观察发现,病鱼脾、肾造血组织中可见许多直径约为20 μm的肿大细胞,肿大细胞内含有大量直径约为145 nm、呈六边形的病毒颗粒。用过滤除菌的病鱼脾组织匀浆液,腹腔注射感染健康斑石鲷,感染组14 d内累积死亡率达95%。人工感染病鱼表现出与自然发病鱼类似的外观症状,且在脾、肾组织切片中也可观察到大量的肿大细胞及相似的病毒粒子。使用特异性PCR引物,从自然发病鱼和人工感染病鱼的肝、脾和肾组织中均检测到鱼类虹彩病毒的高强度感染。克隆、测序得到了1362 bp的病毒主要衣壳蛋白基因(MCP),序列比对显示,该病毒的MCP序列与真鲷虹彩病毒(RSIV) RIE12-1的相应序列完全相同。构建的虹彩病毒系统发育树也显示,该病毒属于虹彩病毒科肿大细胞病毒属RSIV类群,是RSIV的一个分离株。本研究首次证实RSIV可以导致斑石鲷大规模死亡,研究结果为诊断和防治斑石鲷病毒病提供了重要参考。     

大口黑鲈病毒性溃疡病病原的分离和鉴定

对广东省佛山地区2008年夏季高温时期暴发的大口黑鲈溃疡病的病原进行分离,从患病鱼的病灶肌肉组织中分离到5株嗜水气单胞菌,人工感染健康大口黑鲈,均未出现溃疡暴发病的典型症状病鱼体表大片溃烂,裸露肌肉坏死并有出血,尾鳍、胸鳍和背鳍基部红肿溃烂。制备病灶肌肉组织的除菌过滤液,背部肌肉注射感染健康大口黑鲈,7 d后出现典型的溃疡病症状。取自然发病鱼和人工感染的患病鱼病灶肌肉组织制作超薄切片,经电镜观察,均发现组织中有大量病毒颗粒,病毒粒子有囊膜,呈六角形,为正20面体对称结构,大小约为145.5 nm。根据已知虹彩病毒主要衣壳蛋白（MCP）基因序列设计特异引物,提取人工感染发病鱼病灶肌肉组织的DNA进行PCR扩增,将扩增片段进行序列测定与分析,结果表明该序列与已报道的虹彩病毒MCP基因有着较高同源性（39.5％～100％）。从电镜观察和MCP基因测序分析结果确认该病毒为虹彩病毒科蛙病毒属中的一种病毒,与国外报道的大口黑鲈病毒（LMBV）在分子特性和引起的疾病特征上有一定差异。研究结果表明引起大口黑鲈溃疡性暴发病的病原是虹彩病毒,将该病暂命名为大口黑鲈病毒性溃疡病。     

五种理化因子对眼斑拟石首鱼苗种的影响

报道了眼斑拟石首鱼苗种对盐度、有效氯、高锰酸钾、硫酸铜耐受力的实验,测定了它的呼吸耗氧量和窒息点：缺氧浮头时的溶氧值为1．86mg／L,窒息点范围为0．79～0．38mg／L。实验表明：有效氯毒性极强,高锰酸钾次之,CuSO4·5H2O较弱。采用1×10(－6)以下的CuSO4·5H2O处理眼斑拟石首鱼鱼苗是安全的。     

鲜卤美国红鱼片加工工艺

美国红鱼（Sciaenops ocellatus,见彩中插2）生物学名称为眼斑拟石首鱼,属鲈形目石首鱼科拟石首鱼属,为广温广盐性鱼类,适温为10～30℃。最适为18～25℃,有报道可耐2℃的低温,盐度的适应范围很广,淡水、半咸水、海水中均可正常生长,为肉食性鱼类,在自然水域主要摄食贝壳类、头足类、小鱼等,人工饲养可用配合饵料。     

真鲷虹彩病毒自然感染杂交石斑鱼“褐龙斑”的组织病理分析

褐龙斑是雌性褐石斑鱼(Epinephelus bruneus)和雄性鞍带石斑鱼(E. lanceolatus)杂交产生的子代。作为杂交石斑鱼的新品种,国内外尚没有褐龙斑疾病的报道。2017年7月,某养殖场褐龙斑出现急性死亡,10 d内累积死亡率高达80%。现场调查发现,病鱼外观无明显异常,但反应迟钝,伏底死亡。临床检查和剖检可见脾和肾严重肿大、易碎。组织病理切片观察发现,各组织中存在数量不等的嗜碱性、细胞质均一、直径为10~15 µm的肿大细胞。超薄组织切片中发现,肿大细胞胞质内存在大量直径为130~150 nm的虹彩病毒样颗粒。使用特异性的PCR引物,从病鱼脾、头肾等组织中均检测到真鲷虹彩病毒(Red seabream iridovirus, RSIV)的高强度感染。测定了该病毒主要衣壳蛋白(Major capsid protein, MCP)基因1362 bp的全长编码区,构建了19种(株)虹彩病毒系统发育树,结果显示,该病毒属于虹彩病毒科肿大细胞病毒属RSIV类群。本研究首次描述了褐龙斑虹彩病毒病的组织病理特征,揭示了褐龙斑是RSIV新的敏感宿主,为杂交石斑鱼病毒病的诊断与防治提供了重要的参考依据。     

杂种石首鱼生长快于双亲

杂种石首鱼生长快于双亲眼斑拟石首鱼亦称红石首鱼，多须石首鱼亦称黑石首鱼，已在美国海淡水中广泛养殖。为比较其生长速度，美国海洋渔业研究站将眼斑拟石首鱼、多须石首鱼及其杂种进行了对比养殖试验。催产用眼斑拟石首鱼雌性体重８．４ｋｓ，多须石首鱼雌性体重１２．...     

美国红鱼

<正>美国红鱼,又称眼斑拟石首鱼、红拟石首鱼、红鼓鱼、黑斑红鲈、斑点尾鲈等,属鲈形目,石首鱼科,拟石首鱼属。形态特征美国红鱼外形与国产大黄鱼相近,体呈纺缍形,侧扁,背部略微隆起。成鱼腹部以上体色微红。尾鳍呈黑色,尾鳍边缘呈蓝色,最显著的特征是尾基部侧线上方有一黑色圆斑。生长特性美国红鱼为广温、广盐、溯河性鱼类。适温为10℃~30℃,最适为18℃~25℃,但有报道可耐2℃的低温。盐度的适应范围很广,淡水、半咸水、海水中均可正     

眼斑拟石首鱼养殖密度与经济效益分析

眼斑拟石首鱼俗称美国红鱼、红鼓、白花鱼、红鱼、斑点鲈、尾斑鲈。属鲈彤目、石首鱼科、拟厂首鱼属。     

Genetic similarity of iridoviruses from Japan and Thailand

Iridovirus infection causes serious economic damage in marine cultured fish in Japan, Hong Kong and Singapore, and the incidence of this disease has been increasing. Iridovirus of sea bass from offshore Hong Kong was isolated to determine the genetic similarities of the causative agents. The genomic DNA of iridovirus was purified and cloned. Four DNA clones were randomly chosen and sequenced to generate primers for the polymerase chain reaction (PCR). Corresponding DNA fragments of iridoviruses from sea bass from offshore Hong Kong, red sea bream in Japan and grouper in Thailand were detected. The analogous PCR products from geographically diverse iridoviruses may indicate a widespread distribution of an iridovirus of a single origin.     

鲈脾肿大症的病原及细胞病理学的初步研究

首次报道了鲈脾肿大症的发病情况。病鱼以脾脏肿大为主要症状，死亡率高达50％以上。对病鱼进行显微镜检查和细菌分离培养，未见寄生虫和病原菌。经电镜检查，在脾、肝等组织中发现大量病毒颗粒。该病毒颗粒为六边形，没有囊膜，衣壳直径180-220nm，认为该病毒屑虹彩病毒(Iridoviridae)。细胞病理变化表现为感染细胞肿胀，细胞超微结构破坏，细胞质出现大面积空泡。血细胞中出现大量异形淋巴细胞，占淋巴细胞总数的50％以上。     

大黄鱼(Pseudosciaena crocea)内脏白点病的组织病理和超微病理分析

利用组织切片及超薄切片电镜技术对患内脏白点病大黄鱼(Pseudosciaena crocea)的肝脏、脾脏和肾脏3种组织进行病理学分析,探讨该病的致病机理.结果显示,大黄鱼的临床症状为体表无明显病症,脾、肾、肝等内脏有大量白色结节;组织病理显示,肝、肾和脾是感染损伤的主要靶器官,出现组织变性坏死,空泡化严重,炎性细胞浸润;病变组织均出现病理性结节.超微病理显示,病鱼肝、肾、脾细胞超微结构受损严重,尤以线粒体和细胞核损伤明显.线粒体肿胀,嵴断裂消失,空泡化;细胞核核膜破裂,染色质浓缩边集;肾脏和脾脏均发现大量菌聚集成团的病原.研究表明,大黄鱼内脏白点病的组织细胞病理变化特征显示了病原菌的入侵和危害,造成鱼体生理代谢紊乱,免疫力和抵抗力下降,鱼体终因无法维持正常的生命活动而导致死亡.     

养殖大黄鱼“白鳃病”一种新病毒病原的初步研究

运用组织病理学、电镜观察及PCR扩增等方法对近年来网箱养殖大黄鱼暴发的"白鳃病"进行了研究,以探讨引起养殖大黄鱼"白鳃"关联病毒的致病机理。临床解剖观察显示:患"白鳃病"的鱼表现出极度的贫血症状、鳃丝苍白色、血液稀薄且血细胞数显著减少;内脏组织病理观察结果显示:鱼的肝、脾、肾脏内脏组织发生严重的病理变化,组织内红细胞发生明显的退行性变化,同时鱼体的红细胞数量显著减少;采用针对真鲷虹彩病毒(red sea bream iridoviral virus,RSIV)的引物对病鱼内脏组织核酸样本进行PCR检测,结果显示,患"白鳃病"病鱼样本RSIV核酸呈阴性;组织超薄切片电镜观察结果显示:在患"白鳃病"病鱼脾脏和肾脏组织细胞的胞质中可见直径约40~45 nm的病毒粒子。由此初步判断,浙江地区网箱养殖大黄鱼的"白鳃病"不是由RSIV导致,而与一种直径为45~50 nm的病毒有直接关联,本研究为大黄鱼疾病的诊断与防治提供了参考依据。     

Myxobolus erythrophthalmi sp. n. and Myxobolus shaharomae sp. n. (Myxozoa: Myxobolidae) from the internal organs of rudd, Scardinius erythrophthalmus (L.), and bleak, Alburnus alburnus (L.)

During a survey of myxosporean parasites of cyprinid fish in Hungary, infections caused by unknown Myxobolus spp. were found in the internal organs of rudd, Scardinius erythrophthalmus, and bleak, Alburnus alburnus . Small plasmodia developed in blood vessels of the kidney, liver, testes and intestinal wall. The parasites were studied on the basis of spore morphology and by histological and molecular methods. In most cases, plasmodia were surrounded by host tissue without a host reaction; however, in advanced cases, a connective tissue capsule was seen around plasmodia. Spores collected from the two fish species differed from each other and from the known Myxobolus spp. both in their morphology and 18S rDNA sequences. The two species, described as M. erythrophthalmi sp. n. from rudd and M. shaharomae sp. n. from bleak, are characterized by a specific histotropism to blood vessels, while the organ specificity involves the kidney and for the latter species, most internal organs.     

斑石鲷TGF-β1基因克隆和表达分析

虹彩病毒是造成斑石鲷(Oplegnathus punctatus)工厂化养殖中大规模死亡的主要病原,其感染力极强,感染后的斑石鲷死亡率高,严重影响了斑石鲷养殖产业发展。转化生长因子TGF-β1是一种重要的免疫调节因子,在病毒免疫应答中发挥重要作用。为研究TGF-β1在斑石鲷被虹彩病毒感染过程中发挥的作用,运用RACE和实时荧光定量qRT-PCR技术对TGF-β1进行了基因克隆,并对其进行在不同组织、不同时间点相对表达量的差异分析。结果显示,斑石鲷TGF-β1基因c DNA序列全长为3157 bp,5’非编码区长712 bp,3’非编码区长1278 bp,开放性阅读框长1167 bp,编码388个氨基酸,基因组包含6个外显子和5个内含子。同源分析发现,TGF-β1和鱼类相似度较高,与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)的同源性最高,为76.67%。TGF-β1在斑石鲷健康组织(肝脏、脾脏、肾脏、头肾、心脏、鳃、胃、肠和皮肤)中均有表达,在头肾、肠、肝脏和皮肤组织中表达量较高,而在脾脏和肾脏组织表达量较低。为进一步研究TGF-β1在病毒感染过程中相对表达量的变化,对健康斑石鲷注射虹彩病毒进行刺激,随后比较了TGF-β1在脾脏、肝脏、肾脏、头肾4个不同组织、不同时间点的相对表达量的差异,在头肾、脾脏和肝脏中,病毒刺激后TGF-β1的表达量均出现升高,但在脾脏和肝脏中,峰值出现在刺激后第4天,而在头肾中峰值出现在感染后的第10天。在肾脏中,病毒刺激后的TGF-β1的表达呈现下降趋势,0 d表达量最高,4、7 d依次降低,7 d降至最低,10 d有所恢复。以上研究表明,TGF-β1可能响应了虹彩病毒对机体的刺激,可能在对病毒免疫应答中发挥作用。而病毒感染后不同组织中TGF-β1相对表达量的差异,则值得进一步研究。     

Tissue distribution and cellular uptake of Aeromonas salmonicida lipopolysaccharide (LPS) in some marine fish species

Τhe uptake and distribution of lipopolysaccharide (LPS), isolated from Aeromonas salmonicida, was investigated in Atlantic cod, Gadus morhua L., turbot, Scophthalmus maximus L., and Atlantic halibut, Hippoglossus hippoglossus L. LPS was radiolabelled by bromine oxidation and subsequent sodium borotritide reduction (³H-LPS), and fluorescence-labelled by introducing a fluorescein isothiocyanate derivative (FITC-LPS). After intravenous and intraperitoneal injections in cod, high amounts of radioactive LPS (³H-LPS) were present in heart, spleen and kidney throughout the experimental period (1–168 h). After peroral administration, a high amount of ³H-LPS was observed in intestinal tissues, whereas internal organs and tissues contained considerably lower amounts. Following intravenous administration of ³H-LPS in turbot, high contents of radioactivity were revealed in spleen, liver and kidney, whereas the content in heart was lower than in blood at the sampling times (1–24 h). The same pattern was observed after intraperitoneal administration. The spleen and liver contained high amounts of radioactivity when the turbots were intubated perorally with ³H-LPS. The spleen, kidney and heart were the main scavenging organs following intravenous administration of ³H-LPS in Atlantic halibut. A minor amount of radioactivity was present in the liver. The same pattern emerged after intraperitoneal injection in halibut. As observed for turbot, the spleen was the main accumulation site for ³H-LPS following peroral administration. Fluorescence microscopy of sections of organs and tissues from cod, intravenously and intraperitoneally injected with FITC-LPS, revealed that endocardial cells of both atrium and ventricle contained large amounts of the fluorochrome, whereas in turbot and halibut only atrial endothelial cells accumulated the substance. In all species, macrophages in kidney and spleen contained FITC-LPS and in the spleen the fluorochrome was trapped in the ellipsoidal walls. At later time points (e.g. 48 h) in the turbot spleen, FITC-LPS was located in cells adjacent to the ellipsoidal walls. Halibut endothelial cells that were located in the connective tissue of the intestine and gills also contained FITC-LPS. After peroral administration to the different fish species, specific fluorescence was found only in intestinal epithelial cells of halibut and in cells located in the lamina propria. Fluorescence was not detected in internal organs such as the kidney, spleen and liver after peroral administration of FITC-LPS. Gel chromatographic analysis of plasma samples from cod, turbot and halibut after intravenous and intraperitoneal injections showed that high molecular weight radioactivity was present. A minor amount of radioactivity that corresponded to low molecular weight substances was also observed. In conclusion, there is a high degree of variation with respect to the site of accumulation and some variation in the type of cells involved in the uptake of purified LPS in cod, turbot and halibut.     

锦鲤疱疹病毒GZ1301株的分离与鉴定

2013年4月,广东省一锦鲤养殖场暴发不明病因疾病,濒死锦鲤在塘边游动缓慢直至死亡,死亡率高达100%。现场采样发现,发病锦鲤体长25 cm,眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑点,解剖发现内脏器官包括肝、脾、肾肿大。细菌分离结果显示,内脏器官肝脏和肾脏中未分离到细菌。提取自然发病鱼的肝、脾、肾、鳃组织DNA作为模板,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的锦鲤疱疹病毒(KHV)检测引物进行PCR扩增,均能扩增出预期大小的特异性产物。NCBI的Blast搜索结果显示,扩增序列与KHV胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因核苷酸序列同源性为99%。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾锦鲤,可复制出与自然发病相似的症状,并于7 d内全部死亡。取病鱼的鳃和肾脏研磨过滤除菌后进行细胞感染实验,结果显示,组织滤液感染CCB细胞后,盲传5代可以观察到典型的细胞病变效应(CPE)。将出现典型CPE的CCB细胞进行超薄切片制备和电镜观察,电镜下病毒呈对称20面体,直径约100 nm。将出现典型CPE的细胞进行间接免疫荧光实验,可以观察到特异性荧光。根据TK基因全长序列建立系统进化树,证实该毒株为KHV亚洲型毒株,暂命名为KHV-GZ1301株。研究结果可为KHV起源进化、分类以及疾病防控提供重要材料。     

长丝裂腹鱼温和气单胞菌的分离鉴定及药敏检测

2017年4月,四川省西昌某养殖场养殖的长丝裂腹鱼暴发一种以体表、内脏器官出血及角膜浑浊为特征的传染病。为探究此次疫病的病因,自病鱼的肝、脾和肾组织中分离到1株病原菌LXP170412,在脑心浸液琼脂上28℃培养48h,形成白色、半透明、表面光滑的圆形菌落,人工感染试验证实了其病原性;通过表型特征特性测定、16SrDNA和gyrB基因序列分析鉴定,分离菌LXP170412为温和气单胞菌。药敏试验结果表明,温和气单胞菌LXP170412对强力霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等敏感,对头孢拉定、新霉素、阿莫西林、庆大霉素、丁胺卡那、恩诺沙星、青霉素、罗红霉素等耐药。试验证实,温和气单胞菌为此次流行病的病原菌,药敏试验结果将为临床用药提供参考依据。     

中国对虾淋巴组织培养中的病毒及病理观察

通过对中国对虾的淋巴器官和经过培养的养殖、海捕中国对虾的淋巴组织细胞进行电镜观察 ,均发现在细胞内存在一种形状为球形 ,有囊膜 ,平均直径为 136nm的病毒 ,病毒分布于细胞质内 ,或成团存在 ,似为一种虹彩病毒 ;在养殖对虾淋巴器官及培养过的组织细胞中还发现另一种病毒 ,病毒粒子为正二十面体 ,无囊膜 ,平均直径为 33nm ,分布于细胞质中 ,似为一种小RNA病毒。在体外培养淋巴组织过程中 ,病毒在细胞内没有明显增殖迹象。感染病毒的细胞呈现细胞核固缩 ,细胞质空泡化 ,线粒体内嵴模糊 ,粗面内质网水肿等一系列病理变化。对淋巴组织切片进行光镜观察 ,发现淋巴器官组织部分坏死 ,有些细胞核肿大 ,苏木精深染 ,严重的细胞核结构已经被破坏。