小菜蛾颗粒体病毒增效基因的初步研究

小菜蛾颗粒体病毒增效基因的初步研究①吕颂雅孟小林徐进平郜金荣叶林柏（武汉大学病毒研究所,武汉４３００７２）ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＹＯＮＴＨＥＳＹＮＥＲＧＩＳＴＩＣＦＡＣＴＯＲＧＥＮＥＯＦＴＨＥＰＬＵＴＥＬＬＡＸＹＬＯＳＴＥＬＬＡＧＲＡＮＵＬＯ...     

昆虫病毒重组增效蛋白的广谱增效活性

室内生物测定表明 ,大肠杆菌表达的粉纹夜蛾颗粒体病毒重组增效蛋白P96可显著或极显著提高棉铃虫核型多角体病毒、苏云金杆菌和阿维菌素对棉铃虫幼虫的致死率 ,分别提高1 6 9.78%、73.90 %和 36 .0 4 % ;对苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒感染甜菜夜蛾幼虫也有明显增效作用。Na2 CO3 溶解的P96对棉铃虫初孵幼虫有一定致死作用。     

增效物质对核型多角体病毒AcMNPV的感染增效作用

由于昆虫病毒制剂与化学农药相比,其速效性较差,因而影响了其应用.因此,人们设想通过改造昆虫病毒来提高其杀虫效果,Merryweather将人工合成的蝎子毒素基因重组到苜宿尺蠖蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)中去,建立了重组病毒AcMNPVAaIT.将该重组病毒接种于粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)幼虫,结果该幼虫取食量显著减少,发育不良,死亡时间缩短[1].为了提高昆虫病毒的感染能力,人们研究了感染增效物质,如硼酸、卵磷脂、阳离子表面活性剂等均具有感染增效作用.近年来研究表明,某种荧光增白剂对数种昆虫病毒具有感染增效作用.本研究应用野生型AcMNPV-C6和基因重组AcMN-PVAaIT经口感染东方粘虫(Pseudaletia separata),并添加感染增效物质,研究基因重组病毒与野生型病毒对东方粘虫的杀虫效果,以及感染增效物质的增效作用.     

荧光增白剂与增效蛋白对美国白蛾核型多角体病毒(HcNPV)的增效作用

围食膜是昆虫中肠细胞与肠腔之间的一种防御性屏障,破坏围食膜即能促进病原微生物对昆虫的侵染。分别研究了荧光增白剂FB28和棉铃虫Helicoverpa armigera颗粒体病毒增效蛋白(En-Ha)对美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus,HcNPV)的增效作用,分析了活体条件下FB28与En-Ha对美国白蛾幼虫围食膜的破坏作用,解释了其增效作用机理。生物测定结果表明,FB28和En-Ha均能够影响围食膜蛋白的表达谱,提高HcNPV的感染率,使其毒力显著提高:单独饲喂HcNPV时的LC50值为1.11×105 PIBs/mL,添加FB28和En-Ha后,其LC50值分别降低为1.91×103和7.70×103 PIBs/mL,增效比值(SR)分别为58.12和14.42。SDS-PAGE电泳结果发现:用FB28饲喂处理幼虫后,分子质量为60 ku的蛋白条带消失,37 ku的新蛋白条带逐渐出现;幼虫摄取含有En-Ha的饲料后,分子质量为75 ku的蛋白条带消失,44.3 ku的新蛋白条带逐渐出现。经过10～24 h后,FB28和En-Ha处理的幼虫围食膜都能够恢复正常,表明其破坏作用是短暂的。     

苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白增效物质与增效机理

苏云金芽胞杆菌的主要特征是在芽胞形成的同时,能产生对多种昆虫具有特异杀虫活性的晶体蛋白,该蛋白对人畜和环境安全无害。但因在应用过程中杀虫毒力有限,影响了其巨大潜力的发挥。因此,如何提高杀虫蛋白的毒力,寻找更有效的增效物质成为新的研究热点。本文主要综述目前对苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白具有增效作用的物质与增效机理的研究进展。     

促进杆状病毒感染的增效因子

简要综述了增强杆状病毒感染的各种增在子及其作用。     

荧光增白剂对芹菜夜蛾核型多角体病毒的增效作用

杆状病毒作为生物杀虫剂有许多优点,但因其毒力较低、杀虫速度缓慢、在太阳光下易受紫外线影响而活力迅速下降、宿主域狭窄等缺点,在大规模应用中受到极大的限制.为了提高杆状病毒的毒力,人们已经做了不少的努力.     

春尺蠖新病毒株的鉴定及其对春尺蠖核型多角体病毒的增效作用

春尺蠖在我国危害严重,为了挖掘具有开发潜力和应用前景的生防因子,本文分离纯化一株能够感染春尺蠖幼虫的新病毒,生物活性测定了新病毒株的毒力及其对春尺蠖核型多角体病毒（ApciNPV）的增效作用。新病毒株的超微结构观察表明,该病毒多角体多为切面呈六边形的多面体,直径大小为0.32～1.20 μm,病毒粒子呈近球状,具有质型多角体病毒的结构特征,命名为春尺蠖质型多角体病毒（ApciCPV）。生物活性测定结果显示,ApciCPV对春尺蠖3龄幼虫有很强的毒力,半致死浓度（LC₅₀）为1.42×10⁴ OBs/mL。当感染春尺蠖3龄幼虫时,ApciCPV可使ApciNPV半致死时间（LT₅₀）缩短0.50～10.90 d,使ApciNPV对春尺蠖的最终致死率提高6.70%～43.33%。根据最终致死率、LT₅₀以及ST三个值综合决定,当ApciNPV和ApciCPV配比浓度分别为1.0×10⁶和1.0×10⁴ OBs/mL时,对春尺蠖3龄幼虫的感染效率最高。新分离的ApciCPV病毒株是控制春尺蠖虫口密度的理想生物因子。     

重组增效蛋白对Bt和氯氰菊酯防治棉铃虫的增效作用

前期在大肠杆菌中表达得到具有显著生物活性的含粉纹夜蛾颗粒体病毒增效蛋白C端818个氨基酸的融合蛋白P96。以毒饲料法研究P96对苏云金芽孢杆菌和氯氰菊酯杀棉铃虫敏感、抗性品系的增效作用。结果表明：P96对Bt杀棉铃虫敏感、低抗、中抗品系的增效比分别为3．34、4．72和9．82；对氯氰菊酯杀棉铃虫敏感、低抗、中抗品系的增效比分别为2．53、3．38和6．24。随棉铃虫抗性升高，P96的增效作用愈为明显。单对汰选是快速选育棉铃虫抗Bt品系的有效方法。     

SpltNPV和SeNPV几丁质酶基因大肠杆菌表达产物对病毒的增效作用

为明确杆状病毒几丁质酶对病毒杀虫剂的增效作用,采用PCR扩增获得斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltNPV)不含N-端信号肽序列的几丁质酶基因片段SpltNPVChiA/S-和甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)几丁质酶基因编码区全序列SeNPVChiA,分别克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达,表达蛋白的分子量为62 kD和66 kD.将含有表达产物SphNPVChiA/S-和SeNPVChiA的大肠杆菌菌液分别与SphNPV或SeNPV一起加入人工饲料,饲喂3龄斜纹夜蛾或甜菜夜蛾幼虫,两种幼虫取食后致死时间均显著缩短,其中,SpltNPV Spit-NPVChiA/S-和SphNPV SeNPVChiA的LT50比SphNPV对照处理缩短0.90天和0.89天,LT90缩短1.90天和1.97天;SeNPV SphNPVChiA/S-和SeNPV SeNPVChiA的LT50比SeNPV对照处理缩短0.47天和0.50天,LT90缩短0.57天和0.59天;而pET-28a/BL21对病毒的侵染无明显增效作用.两种病毒几丁质酶基因的大肠杆菌表达产物对病毒早期侵染均有明显的增效作用,但同源几丁质酶和异源几丁质酶对病毒的增效作用没有显著差异.     

真菌源蛋白类激发子及其转基因植物研究进展

真菌源蛋白类激发子是广泛存在于植物病原真菌的信号传导分子,不仅在植物与病原菌互作中起重要作用,而且还具有广谱诱导植物抗性和促进植物生长的功能。本文就真菌源蛋白类激发子的种类、功能及蛋白激发子基因转化植物等研究进行了综述。     

Serological Identification of Arthropod Bloodmeals and Its Application

Abstract

The yield losses caused by the Asian rice gall midge Orseolia oryzae Wood‐Mason in 15 traditional or high yielding varieties, studied by the paired plot (unprotected and protected) technique, ranged from‐0.06 in CR.1014 to 1.1% in CR.58‐MR.1538 for every unit per cent increase in silver shoots. Based on this, CR.1014 was identified as highly tolerant with no yield loss (‐0.06%) followed by Jagannath with 0.27%, while the other entries were rated as either moderately tolerant (0.3–0.60%) or least tolerant (0.61 % and above).     

金龟子绿僵菌CQMa421农药及应用情况

金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae是一种重要的生防真菌,具有安全、易在害虫种群中流行、环境友好、不易产生抗药性等优点,已在中国、美国、欧盟等多个国家或地区登记和应用。本文对我国广谱金龟子绿僵菌CQMa421农药的菌株选育、产品登记、应用技术及产品应用情况等方面进行了概述。     

内蒙古中北部球囊霉素相关土壤蛋白的分布及其环境影响

以内蒙古中北部半干旱区为研究区域,探讨球囊霉素相关土壤蛋白(GRSP)的分布,以及GRSP与土壤因子和气候因子之间的关系。研究发现：研究区土壤EE-GRSP（易提取GRSP）和T-GRSP（总GRSP）的平均含量分别为0.79 mg•g-¹和1.44 mg•g-¹,占有机碳平均值的6.83％和12.86％,且所占百分比均随有机碳的增加而降低。各地区之间GRSP含量差异显著,海拉尔地区显著高于锡林浩特地区。相关性分析表明,GRSP与有机碳、氮和 C/N比呈显著正相关,与容重、pH和年平均气温呈显著负相关。另外,在半干旱区适当提高土壤黏粒含量可以增加GRSP的积累。建议通过接种AM（丛枝菌根）真菌来提高土壤中GRSP的含量,以改善土壤质量,增加土壤的有机碳库,这对脆弱区的生态修复具有重要的理论和实践意义。     

QSAR及其在农药设计中的应用和进展

在介绍定量结构 -活性关系 (QSAR)的基本原理后 ,重点评述了 QSAR各种方法的主要原理、优缺点及其在农药设计中的研究应用进展 ,包括取代基多参数法 (Hansch法 )、Free- Wilson法、分子轨道法 (MO)、距离比较法 (DISCO)、比较分子力场分析法 (Co MFA)、分子模拟法 (MS)、分子对接法 (MD)、人工神经网络法 (ANN)以及 Leapfrog法等。     

昆虫几丁质酶及其应用研究综述

几丁质作为自然界的一种含氮多糖类生物性高分子,是昆虫表皮、中肠围食膜和气管系统的主要结构成分,保护昆虫免受化学侵蚀、物理损伤和病原入侵。昆虫几丁质酶可以降解昆虫体壁和围食膜中的几丁质,近年来受到了越来越多的关注。通过对昆虫几丁质酶的调控,可直接影响其生长发育,实现对害虫的有效防治。本文综述了昆虫几丁质酶结构、体内表达特性、生理功能和影响因素,及其在害虫防治中的应用与存在的不足,旨在为昆虫几丁质酶在植物保护领域更深入的开发应用提供科学依据。     

碱基编辑技术及其在昆虫中的应用和展望

基因编辑是一种能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的一种基因工程技术.近年来,基因编辑技术不断突破与发展,以CRISPR编辑系统为基础的单碱基编辑和先导编辑引起了科研人员的关注,随着基因编辑技术的不断成熟,已成功应用到各种动、植物以及其他生物中,为基因治疗和基因功能研究等方面提供了重要的技术支持.本文主要回顾了CRIS...     

Transmissibility of Cucumber mosaic virus by Aphis gossypii Correlates with Viral Accumulation and Is Affected by the Presence of Its Satellite RNA

ABSTRACT Satellite RNAs (satRNAs) are associated with Cucumber mosaic virus (CMV) in tomato, most often causing severe epidemics of necrotic plants, and not associated with specific host symptoms. Laboratory studies on virus transmission by the aphid vector Aphis gossypii were performed to better understand the dynamics of field populations of CMV. The presence of satRNAs correlated with lower concentrations of virus in infected plants and with a decrease in the efficiency of transmission from satRNA-infected plants. Both the concentration of virus in CMV-infected tomato and the efficiency of transmission varied more extensively with nonnecrogenic satRNAs than with necrogenic satRNAs. A negative effect of satRNAs on virus accumulation can account, in part, for a decrease in the field transmission and recovery of CMV + satRNAs. Aphids behaved differently and probed less readily on plants infected with CMV + necrogenic satRNAs compared with plants containing non-necrogenic satRNAs. Aphid-mediated satRNA-free CMV infections were observed in test plants when aphids were fed on source plants containing CMV + nonnecrogenic satRNA; no comparable satRNA-free test plants occurred when aphids were fed on source plants containing necrogenic satRNAs. These results indicate that factors associated with transmission can be a determinant in the evolution of natural populations of CMV and its satRNA.