吉林省不同地区牛肠道病毒遗传变异分析

为了解近年来吉林省牛肠道病毒(bovine enteroviruses,BEV)感染流行情况及病毒株分子变异特征,本研究利用双抗体夹心ELISA方法,对采集于吉林省不同地区的326份疑似BEV感染的牛粪便样品进行检测,并对ELISA检测出的阳性样品进行病毒分离培养;同时对分离毒株5′UTR基因序列进行扩增、序列比对分析。结果表明,不同地区的牛群均存在程度不同的肠道病毒感染;BEV分离毒株的核苷酸序列与本实验室2012年分离的国内首株E种牛肠道病毒HY12基因序列的同源性为86.2%~96.9%。其中从公主岭地区分离的毒株GZL-6与HY12毒株差异性最大,其同源性只有86.2%;而与HY12同地区分离出的HY68毒株同源性只有86.3%。国内外现有BEV毒株序列遗传进化树分析结果显示,从吉林省新分离到11株BEV与HY12处在同一个分支。上述结果表明,新近分离的BEV毒株,无论源于HY12毒株的原地区还是其他不同地区,均有不同程度的核苷酸序列差异。本研究为BEV感染的诊断、防治及肠道病毒进化变异研究打下基础。     

广西地区水牛E2型牛肠道病毒的分离和鉴定

为了解广西地区水牛感染中肠道病毒(BEV)的情况，本研究在广西南宁某水牛规模养殖场腹泻粪便样品中成功分离出2株BEV,分别命名为GXNN2106和GXNN2102。将2株病毒空斑纯化后测定GXNN2106毒株TCID₅₀为10^7.99/0.1 mL,GXNN2102毒株TCID₅₀为10^7.37/0.1 mL。多步生长曲线结果显示，GXNN2106毒株在MDBK细胞中复制增殖良好。经BEV VP1、5′UTR特异性引物逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定，2株病毒均属于E2型，与其他E2型BEV 5′UTR核苷酸同源性为75.7%～78.6%,VP1核苷酸同源性为87.1%～91.1%。本研究首次在广西地区水牛粪便中分离得到E2型BEV毒株，为广西水牛源牛肠道病毒的流行分布情况和疫苗的研发提供数据支持。     

从暴发严重腹泻羊群中检出G种肠道病毒

从吉林省某羊场暴发的临床上以严重腹泻、发热、流涎、口腔黏膜严重溃疡为特征的未明疫病病羊体内分离到大小为20~30nm病毒粒子。病毒生物学特性、理化学特性和分子生物学特性鉴定发现,该病毒粒子为肠道病毒,命名为OEV-JL14毒株。核苷酸序列测定与比对分析发现,OEV-JL14与OEV-TB4的同源性最高,只有68.8%。进化树分析表明OEV-JL14为G种肠道病毒。本研究首次在国内从病羊体内分离鉴定出羊肠道病毒,该结果将为羊新发肠道病毒感染的诊断及防制提供理论依据。     

牛肠道病毒的分离鉴定

本研究从内蒙古某奶牛场的犊牛粪便样品中分离的一株牛肠道病毒(BEV),命名为BHM26,通过电镜观察显示和分子生物学鉴定,发现病毒粒子在细胞浆中呈结晶状排列,单一病毒粒子呈典型小RNA病毒粒子形态,直径为25nm～30nm,无囊膜;病毒的部分3D蛋白编码区和全长3'UTR区段的1 026bpDNA片段的RT-PCR扩增和序列分析表明,其核苷酸序列与GenBank登录的参考病毒株核苷酸序列同源性为71.9%～87%,其中与BEV Wye-3A株同源性最高,为87%.分析表明中国BEV分离株与国外参考毒株具有较大差异.     

一株牛肠道病毒的分离与鉴定

本研究从内蒙古某牛场患呼吸道病牛鼻拭子中分离到1株病毒,命名为NM575,并对其进行了鉴定。分离的病毒能够抵抗100μg/m L的DNA抑制剂5-溴脱氧尿苷,确定为RNA病毒。电镜观察可见无囊膜球形的病毒粒子,直径约30 nm,与小RNA病毒形态学特征相符。理化特性鉴定结果表明分离病毒对乙醚、氯仿及胰酶具有一定抵抗力,耐酸,对热敏感,与牛肠道病毒特性相符。应用牛肠道病毒P1基因的特异性引物,通过RT-PCR可从病毒细胞培养物中扩增出特异性片段,对其进行序列测定并与Gen Bank中登录的牛肠道病毒参考毒株及其他种属的肠道病毒参考株相应的序列进行比对及系统进化分析,结果显示分离毒株NM575与牛肠道病毒BHV-261株的核苷酸同源率为80%,进一步说明分离株为牛肠道病毒,且基因分型为EV-F1。病毒的体外细胞培养嗜性试验结果显示,NM575株可感染牛、仓鼠、猪、犬和鸡等多种动物细胞,尤其在牛源细胞中复制滴度最高,为10~(7.6) TCID_(50)/m L。综合以上结果分析确定所分离的病毒株NM575为牛肠道病毒,这是我国首次从患呼吸道病牛鼻拭子中分离获得。     

吉林省某羊群暴发小反刍兽疫

2014年3月底,从吉林省某羊群发生的临床以发热、流涎、口腔黏膜严重溃疡、呼吸困难、严重腹泻和高死亡率为特征的羔羊体内检测到130¹50nm的病毒粒子,该病毒命名为GZL-14毒株。应用RT-PCR从病羊体内扩增出小反刍兽疫病毒的基因序列。序列分析发现,GZL-14毒株N蛋白基因的核苷酸序列与国外分离株INDIA_1994和PRADESH_95的同源性最高,为99.3%,而与国内分离毒株China/Tib/07的同源性为99%;GZL-14毒株F蛋白基因的核苷酸序列与Izatnagar-94和Morocco-2008毒株的同源性最高,为98.1%,而与国内分离株China/Tib/07的同源性为97.2%,表明GZL-14株可能为新近由国外传入国内的毒株。本研究应用分子生物学手段,从病毒核酸水平首次确定吉林省某羊群新近发生的临床上以发热、流涎、口腔黏膜严重溃疡、呼吸困难、严重腹泻和高死亡率为特征的疫病为小反刍兽疫。     

一株牛肠道病毒的分离与鉴定

本研究从山西某奶牛场的泌乳奶牛粪便样品中分离得到一株牛肠道病毒(BEV),命名为HLJ-3531/2013。理化特性鉴定结果表明,该病毒粒子呈典型小RNA病毒粒子形态,直径为25~30nm,无囊膜;该病毒在p H3~9时稳定,对氯仿、乙醚、胰酶等均有一定的抗性,但50℃可迅速被破坏,1mol/L Mg SO4能显著提高该病毒对热的抵抗力。采用随机引物通过RT-PCR扩增获得病毒部分VP2及VP4蛋白编码区的DNA片段,序列分析结果表明,其核苷酸序列与Gen Bank登录的参考病毒株核苷酸序列同源性为65.0%~79.2%,其中与德国分离株D3/98株同源性最高,为79.2%。进化树分析其可能为EV-E种群中新的基因型。此前中国已分离得到的三株牛肠道病毒均为EV-F,该病毒株与中国已分离株分属于不同的血清型。     

攀西地区牛肠道病毒遗传变异分析

为了解攀西地区牛肠道病毒(BEV)遗传进化关系,本研究采集新鲜牛粪便,应用RT-PCR方法对样品进行检测,对BEV分离株5’UTR进行克隆、测序,应用生物信息软件进行遗传进化关系分析。结果显示：攀西地区牛场BEV感染率达13.98%,其中E种BEV感染率为4.30%(4/93),F种BEV感染率为9.68%(9/93);同一奶牛场内存在E种和F种BEV感染;攀西地区BEV分离株与国内其他地区BEV毒株具有较高的同源性(73.1%～96.5%);攀西地区BEV分离株间同源性达75.5%～99.8%。本研究为攀西地区BEV流行情况与防控提供理论参考依据。     

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒分离鉴定及生物学特性研究

为分离鉴定新疆地区牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)流行毒株,掌握该毒株的生物学特性,本试验在新疆北疆部分地区采集牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD/MD)疑似病例的粪便,通过RT-PCR检测、细胞分离培养、间接免疫荧光抗体检测、免疫电镜观察及血清中和试验5种方法对毒株进行分离和鉴定。对毒株的TCID₅₀测定后,再对毒株分别进行乙醚敏感性试验、氯仿敏感性试验、胰蛋白酶敏感性试验、酸碱度敏感性试验、温度敏感性试验及核酸分型试验等理化特性检测。经RT-PCR诊断,病料在286 bp处出现了目的片段。将RT-PCR诊断为阳性的粪便,接种于密度约为80%的单层MDBK细胞出现了细胞病变,盲传5代至出现典型的细胞病变。将F5代细胞培养物采用间接免疫荧光抗体检测,结果产生了与C₂₄V标准毒株相同的特异性黄绿色荧光。免疫电镜观察到了大量呈球形的BVDV粒子,大小20~40 nm。血清中和试验中抗体阳性血清处理组细胞均未出现细胞病变,病毒完全被抗体阳性血清中和。综合以上方法确定分离株为BVDV毒株。对分离株进行毒价和理化特性测定,该毒株TCID₅₀为10^-4.5/0.1 mL,对乙醚和氯仿敏感,对胰蛋白酶敏感,耐碱不耐酸,对温度敏感,经54 ℃ 1 h完全被灭活,属于RNA病毒。本试验成功分离到一株新疆BVDV流行毒株,掌握了该毒株的生物学特性,为今后该病的诊断和防控奠定了基础。     

猪伪狂犬病病毒野毒株的分离鉴定及gC、gD基因序列分析

2019年河南某猪场暴发疑似猪伪狂犬病疫情,本试验采集发病猪的病料组织,进行伪狂犬病病毒(PRV)毒株的分离鉴定,并分析分离毒株的生物学特性。结果显示：分离毒株HNCY的TCID₅₀为10^-8.48/0.1 mL;一步生长曲线显示,分离毒株在12～24 h复制较快,48 h到达最高峰;分离毒株对小鼠具有较强的致死性,且肺脏中病毒含量最高;序列分析显示,HNCY株gC基因核苷酸序列与国内外PRV分离毒株的同源性为95.9%～100.0%,gD基因同源性为98.9%～100.0%;gC氨基酸序列与国内外PRV分离毒株的同源性为92.9%～100.0%,gD氨基酸同源性为97.5%～100.0%,且国内同源性高于国外;遗传进化分析显示,HNCY分离株gC、gD基因与欧美毒株在不同的大分支上,亲缘关系远;与国内分离株在同一分支上,且与2011年之前分离的PRV毒株在不同的小分支上,表明HNCY分离株属于国内变异毒株。     

Give a dog a genome

In 2004 the dog became only the fifth mammal to have its entire genome fully sequenced. The canine genome was sequenced in the hope that it would help scientists understand the complex evolutionary mechanisms that shape genes and genomes and provide a powerful tool for identifying genetic factors that contribute to human health and disease. It is expected that over the coming years the genome of man's best friend will help in the understanding of the genetic cause of many inherited diseases that humans and dogs have in common. Not only of obvious benefit to humans, these studies will enable the development of DNA diagnostic tests that breeders can use to identify which of their dogs carry mutations that put them at risk of developing particular conditions and thus, over time, eliminate those diseases from the breed.     

Leiomyoma of a kidney in a dog: a rare diagnosis

A five-year-old, neutered male, Bernese Mountain Dog was referred because of a two-week history of hematuria and a one-week history of polydipsia and polyuria. Palpation of the dorsomedial mesogastrium revealed a mass on the left side, which was seen via radiography and ultrasonography to be attached to the left kidney. The left kidney and the attached mass were excised surgically, and the dog had an uneventful recovery. Histological examination of the mass revealed a dense proliferation of non-polymorphic spindle cells, which stained positive for smooth muscle actin via immunohistochemistry. Leiomyoma of the kidney was diagnosed. Postoperatively, there was mild azotaemia, which did not affect the general condition of the dog and was still present 15 months after surgery. Leiomyoma of the kidney is a benign tumor, and hematuria may be the only clinical sign.     

Building a practice with a computer

It should be emphasized that the primary function of the computer is information-handling and communication. It remembers who and when and why, organizes the information, and then communicates by reminders, letters, labels, word processing, and statements. The computer becomes a faithful employee, not altogether immune from physical illness but generally ready to work at the flip of a switch. Best of all, the computer never asks for overtime or a percentage of the profits.