基因重组酵母细胞检测养殖场污水中环境雌激素

用细胞生物学分析方法,对某养殖场污水处理厂水样中的类雌激素活性进行了分析,其中处理前水样6份,处理后水样9份。水样中的雌激素类化合物分别用大孔树脂富集,依次用丙酮、甲醇、乙醚洗脱,洗脱液经水浴蒸发挥干并用二甲亚砜定容。用重组人雌激素受体酵母细胞测其类雌激素活性,报告基因为编码β-半乳糖苷酶的Lac Z基因。结果发现,处理前水样雌激素活性较高,而处理后水样对β-半乳糖苷酶的诱导水平较低。经17β雌二醇（E2）标准曲线换算成雌二醇当量,发现处理前水样雌激素活性在0．0001至0．15nmol·L^-1 E2当量,而处理后水样雌激素活性明显下降,有17个水样雌激素活性低于检出限,这说明畜牧厂污水中的雌激素类化合物通过污水处理厂处理后可下降。     

动物性食品中β-受体激动剂残留检测的方法验证

本文按照GB 27404-2008 标准方法要求对《动物性食品中β-受体激动剂残留检测 液相色谱-串联质谱法》进行方法验证,方法验证主要包括方法线性范围、方法检出限/定量限、精密度、正确度等方面。同时,对方法中高效液相色谱-三重四级杆质谱仪器检测条件进行了优化。本文对食品中残留检测标准的方法验证具有指导作用,为检验检测机构梳理了方法验证流程。     

人雌激素受体cDNA在酵母细胞中的表达

根据人全长雌激素受体cDNA序列,用RT—PCR方法使乳腺癌细胞MCF-7株扩增人雌激素受体基因(hER cDNA),通过pGEM—T／hER载体克隆到酵母表达载体中,并转化到酿酒酵母细胞中,用Western blot法和免疫组化法检测hER cDNA的表达。结果表明：hER cDNA在酵母细胞中成功表达,可用于建立环境雌激素的酵母细胞检测体系。     

羊肉中β-受体激动剂兽药残留风险评估

本文通过连续两年对宁夏地区羊肉产品的监测,分析羊肉产品中主要β-受体激动剂盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇兽药的残留水平,评估羊肉中β-受体激动剂兽药的残留风险。结果表明:盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的检出率分别为1.5%、12.3%、5.4%,在羊肉样品中残留范围分别是0.31~0.51μg/kg、0.32~1.29μg/kg和0.34~0.63μg/kg。宁夏羊肉阳性样品中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇兽药残留的食品安全指数最小值为1.3×10-3,平均值为2.1×10-3,最大值为3.2×10-3,均远远小于1。表明宁夏羊肉中β-受体激动剂兽药残留对人们的健康不会造成危害,是安全可以接受的。     

环境雌激素调控的β-半乳糖苷酶酵母细胞的建立

为建立环境雌激素的酵母评价体系,将人工合成的雌激素效应元件插入pMP206质粒的上游,并将该质粒转入人雌激素受体基因重组酵母细胞,使LacZ基因置于雌激素的调控之下,以构建可用于评价环境雌激素的酵母细胞。结果表明：经DNA测序发现pMP206／ERE-LacZ报告质粒DNA框架正确。对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因和pMP206／ERE-LacZ报告质粒的特异性条带,说明雌激素受体基因和受雌激素调控的LacZ报告基因已重组于酵母细胞。从而证明以LacZ为报告基因的环境雌激素酵母评价细胞重组成功。     

动物毛发中β-受体激动剂残留消除规律及检测技术研究进展

畜禽养殖环节违法添加β-受体激动剂类药物,导致畜产品安全事件多发,我国政府对畜产品中β-受体激动剂监管高度重视。而动物毛发中β-受体激动剂残留消除缓慢,且毛发取样方便、无创伤、易于保存,作为监管β-受体激动剂在畜禽养殖环节违法添加的靶标具有很大优势。综述了毛发的结构特性与生长规律、药物进入毛发机制、动物毛发中β-受体激动剂残留消除规律及检测技术,旨在为毛发作为可能的监管靶标提供科学依据。     

酵母β-1,3-D-葡聚糖制备过程中细胞破碎方法研究

通过正交试验设计,研究了细胞自溶法和超声波法的工艺条件,结果表明:在T=50℃、pH=7.0、浓度=10%、t=15 h的自溶条件下和在功率240W、占空比0.8、浓度5%、t=20 m in的超声波条件下,细胞破碎程度(即Y,用单位细胞干物质的损失率表示)分别为44.03%、35.87%,达到各自工艺的最优值,并且自溶法具有较好的细胞破碎效果。     

气相色谱-质谱法测定动物肝脏中β-受体激动剂残留

研究了动物肝脏中3种β-受体激动剂(包括盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺)残留量的气相色谱-质谱测定方法。样品经乙酸铵、乙酸乙酯∶异丙醇(6∶4)提取,PCX阳离子交换柱净化,再经BSTFA衍生,HP-5MS毛细管柱分离,基质匹配内标法定量。结果表明:3种β-受体激动剂在1.0~20.0μg/L浓度范围内均有良好的线性关系,相关系数不低于0.998,在17.5 min内获得良好的分离,3种β-受体激动剂加标回收率为85.4%~106.7%,相对标准偏差在4.9%~10.5%之间(n=6)。     

畜产品中雌二醇检测方法的研究进展

 雌激素包括雌二醇、雌三醇、雌酮，雌二醇(E2)是3种雌激素中活性最强的一种，具有很强的生理功能，对畜禽有广泛的药理作用，但是在动物食品中残留会危害人类健康。研究发现人体中雌二醇含量水平与某些肿瘤，如乳腺癌、子宫癌、肝癌等有显著的相关性。就雌二醇的检测方法和抗体的研究进行简述，为建立雌二醇的ELISA检测方法奠定基础。     

快速检测尿液中盐酸克伦特罗残留技术评价

为明确盐酸克伦特罗残留快速检测技术的准确性和可靠性,采用色谱定量验证方法,对目前常用的试剂盒和金标卡检测尿液中盐酸克伦特罗残留技术进行了评价。结果表明,试剂盒检测灵敏度较好,最低为0.29 μg·L-1,最高值1.04 μg·L-1,能达到仪器检测限要求,满足目前国家的判定限。但试剂盒的检测变异系数较大,结果的稳定性有待改进。试剂盒准确性较高,但含量在1 μg·L-1时,容易出现假阳性和假阴性问题,需要经质谱法作进一步确证,总体假阳性和假阴性问题不明显。金标卡检测限相对较高,在尿液中盐酸克伦特罗含量>3 μg·L-1时,准确度较好,但无法满足国家控制限要求,需要进一步改进技术,提高检测限。     

17β-雌二醇对体外培养牛输卵上皮细胞中环氧合酶-2的表达影响

目的:阐明17β--雌二醇(17β-estradiol,E2)对体外培养的奶牛输卵管上皮细胞(bovine oviduct epithelialcells,BOECs)中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达的影响.方法:分离培养BOECs,建立BOECs培养体系作为体外试验模型,分别在培养液中添加10 pg/mL的E2分别培养2h、4h、6h,提取细胞总RNA及细胞总蛋白,利用实时荧光定量PCR,Western blot等实验技术检测COX-2mRNA和蛋白的表达量.结果:输卵管上皮细胞的COX-2基因表达随添加E2培养液增加2h、4h明显高于对照组.结论:试验数据显示在体外培养的BOECs中E2影响牛输卵上皮细胞中COX-2的表达.     

β-受体激动剂及其检测技术研究

β-受体激动剂是一类具有。肾上腺素功能的苯乙醇胺类人工合成化合物,因其能对养殖动物体内营养再分配起到促进作用．改善养殖动物日增重和饲料转化率,因此常被非法用于动物养殖过程。本文介绍了β-受体激动剂的性质、代谢、毒理作用、危害及相关法规,以及不同样品基质中β受体激动剂的检测新技术、新方法及样品前处理技术的最新进展。     

用生物膜干涉技术快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留

[目的]采用生物膜干涉技术建立快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的方法.[方法]首先通过疏水作用力在APS光线生物传感器探头末端固定氨苄青霉素-BSA偶联物,结合40 nm纳米金标记的β-内酰胺类抗生素受体,建立了检测牛乳中β-内酰胺类抗生素的方法.[结果]生物膜干涉技术检测牛乳中的β-内酰胺类抗生素的灵敏度比胶体金免疫层析试纸条的灵敏度高1倍.该技术还具有良好的特异性,与浓度为1 000 ng/ml的黄曲霉毒素M1、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、氯霉素、三聚氰胺无交叉反应.[结论]研究表明,金标记BLI检测β-内酰胺类抗生素的定量范围较小,并不适用于实际生产中的定量检测,但却是一种简便、快捷的定性检测方法,可用于牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的快速检测.     

试管扩散法检测牛乳中β-酰胺类抗生素残留研究

试管扩散法是以微生物受阻法为基本原理.用嗜热脂肪芽孢杆茵作为指示茵.在培养基中加入指示剂,根据嗜热脂肪芽孢杆茵在生乳中生长产酸使指示剂变色现象,确定牛乳中β-内酰胺类抗生素残留量,比较试管扩散法和TTC法检测牛乳中6种β-内酰胺类抗生素残留得到的检测限和检测时间等指标.结果表明,试管扩散法比TTC法更适合国内牛乳中β-...     

基于MRM-IDA-EPI技术筛查猪尿中4种β-受体激素残留

建立了猪尿中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林4种β-受体激素残留同时测定的快速前处理-超高效液相(QuEChERS-UPLC)/多反应监测-信息依赖-增强型质谱扫描(MRM-IDA-EPI)的一种方法.10.0 mL猪尿用乙腈溶液提取,乙二胺-N-丙基硅烷、石墨化炭黑、硫酸镁和氯化钠净化后直接进样分析,采用+M...     

双酚A对鲫雌激素受体表达和雌二醇水平的影响

运用定量PCR技术和免疫荧光法研究了内分泌干扰物双酚A（BPA）对雌鲫的雌激素效应。以不同浓度的BPA[质量分数分别为1mg／kg,50mg／kg,100mg／kg（注射剂量／鱼体重）]对雌鲫进行腹腔注射,然后分别于24h和48h检测肝脏中的仅型雌激素受体（ERct）mRNA表达以及血清雌二醇（E2）水平。结果表明1mg／kg和50mg／kgBPA处理组ERamRNA水平与对照组相比在48h内均没有明显变化;100mg／kgBPA处理组ERamRNA水平在注射后24h显著上调（P〈0．05）,48h时仍维持较高水平。1mg／kgBPA处理组E2水平在24h显著下降（P〈0．05）,48h回升至正常水平;50mg／kg和100mg／kgBPA处理组E2水平在24h显著增加（P〈0．01）,48h时仍维持较高水平。结果表明,BPA具有雌激素样效应,高浓度的BPA能够诱导雌鲫肝脏ERαmRNA表达和血清E2水平的上升。     

重组酵母的快速鉴定方法

该文阐述了重组酵母的快速鉴定方法,首先通过MM/MD培养基筛选,然后利用酵母染色体DNA快速制备法获得酵母DNA,经PCR检测发现腈水解酶基因已经完整地整合进酵母基因组.     

双酚A对鲫雌激素受体表达和雌二醇水平的影响

运用定量PCR技术和免疫荧光法研究了内分泌干扰物双酚A（BPA）对雌鲫的雌激素效应。以不同浓度的BPA[质量分数分别为1mg／kg,50mg／kg,100mg／kg（注射剂量／鱼体重）]对雌鲫进行腹腔注射,然后分别于24h和48h检测肝脏中的仅型雌激素受体（ERct）mRNA表达以及血清雌二醇（E2）水平。结果表明1mg／kg和50mg／kgBPA处理组ERamRNA水平与对照组相比在48h内均没有明显变化;100mg／kgBPA处理组ERamRNA水平在注射后24h显著上调（P〈0．05）,48h时仍维持较高水平。1mg／kgBPA处理组E2水平在24h显著下降（P〈0．05）,48h回升至正常水平;50mg／kg和100mg／kgBPA处理组E2水平在24h显著增加（P〈0．01）,48h时仍维持较高水平。结果表明,BPA具有雌激素样效应,高浓度的BPA能够诱导雌鲫肝脏ERαmRNA表达和血清E2水平的上升。     

应用液相色谱—串联质谱法对猪肉中3种β-受体激动剂残留检测与分析

本文建立了高效、准确的测定猪肉样品中β-受体激动剂残留量的高效液相色谱—串联质谱法.应用液相色谱—串联质谱法对来自市场中120批次猪肉样品进行3种β-受体激动剂残留的检测.结果显示,3种β-受体激动剂残留在猪肉中的平均回收率均为76.3％～94.5％.体现该方法具有准确、灵敏的特点,符合兽药残留分析检测的要求.     

快速筛选环境雌激素酵母细胞的试验研究

通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)基本序列插入β-半乳糖苷酶的Lac Z报告基因的上游．并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下。结果表明：当环境雌激素作用于酵母细胞时,会使ER发生变构效应．与ERE结合使LacZ基因得以表达．其表达量与环境雌激素的污染程度具有剂量效应关系,通过检测β-半乳糖苷酶的活性,可反映环境雌激素的污染程度;与双酚A和苯甲酸雌二醇活性相比较,β-雌二醇活性最强,但双酚A活性明显高于苯甲酸雌二醇。