单克隆抗体诊断家蚕浓核病

<正> 养蚕中流行的家蚕浓核病,是造成蚕茧歉收的原因之一。本病是由家蚕浓核病病毒(BmDNV)感染蚕体后引起发病的,这种病毒是一种没有包涵体的昆虫病毒,与过去报导的传染性软化病病毒(IFV)不同,浓核病病毒为直径21nm的球状粒子,病毒核酸为单链DNA,侵入家蚕中肠,在园筒细胞核内形成病毒粒子,而传染性软化病病毒为单链RNA,直径约27nm的球状粒子,侵染家蚕中肠杯状细胞,在细胞质内形成病毒粒子。     

重口裂腹鱼消化道黏膜的超微结构

用透射电镜技术对重口裂腹鱼消化道黏膜的超微结构进行了观察。结果显示:口咽腔和食道黏膜上皮均为复层上皮,上皮中存在大量粘液细胞,相邻细胞间通过发达的犬牙交错的桥粒紧密相连,表层和中间层细胞中有较多致密颗粒,表层细胞游离端表面有绒毛状突起。前肠吸收细胞微绒毛长而密,细胞质中线粒体、滑面内质网、粗面内质网、高尔基体发达。后肠吸收细胞微绒毛短而粗,终末网区中吞饮小泡较多。巨噬细胞中有多量溶酶体,其中见有凋亡细胞。2种形态的肥大细胞含大量分泌颗粒。肠黏膜上皮中存在少量凋亡细胞,其胞体、胞核和胞质均见有明显的形态学变化。     

副轮状病毒实验感染山羊羔的病理学初报

两头禁食初乳的新生山羊羔实验感染副轮状病毒(B组轮状病毒)后12小时发病,36小时死于严重腹泻。病理学特征为小肠中后段肠绒毛明显萎缩变短,被复上皮脱落,固有膜萎陷和轻度炎性反应。超微结构还有肠细胞基底膜裸露与缺损,残留的肠细胞微绒毛丧失,扩张的内质网池内有病毒颗粒,胞浆内偶见病毒前体(病毒蛋白)。     

家蚕传染性软化病病毒荧光定量PCR检测技术及浙江省流行病学调查

荧光定量PCR检测技术可实现对病原微生物的早期或快速检测,根据家蚕传染性软化病病毒(BmIFV)的RNA序列,设计了具有物种特异性的引物和探针,建立了荧光PCR检测BmIFV的方法。将设计的引物和探针同时对BmIFV、家蚕微孢子虫(Nb)、家蚕核型多角体病毒(BmNPV)、家蚕浓核病病毒(BmDNV)和桑叶进行特异性验证,结果显示只有BmIFV得到阳性结果。该方法对含BmIFV目标片段质粒的检测灵敏度达10~(-3)ng/μL,对目标病毒的检测灵敏度为3.4ng/μL。同时,对浙江省嘉兴市秀洲区、湖州市南浔区、嘉兴市桐乡市、嘉兴市海宁市、杭州市淳安县5个蚕区家蚕感染BmIFV情况进行了流行病学调查,结果显示这5个蚕区BmIFV感染率约为3.6%,为浙江省家蚕传染性软化病防治提供参考。     

猪流行性腹泻的病理学研究——人工感染乳猪的空肠上皮电镜组化研究

观察了人工感染流行性腹泻病毒乳猪的空肠上皮内碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、琥珀酸脱氢酶和5′—核苷酸酶的动态学变化。结果,肠上皮内碱性磷酸酶对病毒侵袭的反应最敏感,染毒18h后,乳猪肠上皮微绒毛排列整,碱性磷酸酶反应明显降低;45h后,断裂脱落的微绒毛内可见到较弱的酶反应;染毒18h后,肠上皮内的酸性磷酸酶的活性增强。酶反应见于整个溶酶体,溶酶体数量增多、体积变大,多位于细胞的游离缘和扩张的内质网附近,此种内质网中可见到病毒。染毒45h后,肠上皮的溶酶体内可见到亚细胞碎片。染毒13～45h后,肠上皮内线粒体扩张呈不整圆形、内嵴破损,但其外膜的琥珀酸脱氢酶的反应却增强。肠上皮内5′—核苷酸酶的活性以感染18h为高。以上四种肠上皮内酶反应,在感染96h后活性均明显降低或消失。     

关于DNV佐久株的研究综述

前言1929年法国的 Paillot 提出家蚕的空头性软化病是由病毒引起的。从此就结束了蚕的空头性软化病由细菌引起的历史。1960年将由此病毒引起的软化病正式命名为:病毒性软化病或传染性软化病。而此病毒即命名为:传染性软化病病毒。通过蚕病学者们的大量研究,确认此病毒属于微核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、肠道病毒属(Entero-virus)的病毒。然而松井(1973年)、古田(1973年)、Himeno等(1974年)、清水(1974年)相继发现了能引起家蚕软化病症,而又不同于原先发现的传染性软化病病毒的新病毒。这些新发现的病毒当时就分别称为:松井株、古田株、姬野株、伊那株。其中姬野株被认为是传染性软化病病毒粒子的未成熟型,而松井、古田、伊那株则是完     

犬传染性肝炎病毒的形态发生学及抗原定位研究

应用免疫金电子显微镜技术研究了犬传染性肝炎病毒(ICHV)在犬肾传代细胞内的增殖过程及其病毒抗原在感染细胞内外的定位.结果显示:(1)吸附在细胞膜表面的病毒粒子,主要通过细胞吞饮作用侵入细胞,而吸附在微绒毛膜表面的病毒粒子则可直接“渗入”细胞;(2)在病毒感染不同时用的细胞核内观察到均质型、微粒型、颗粒型、副晶格型、病毒包涵体型及致密型等6种类型包涵体,其中前5种能被免疫金标记,它们是尚未形成病毒粒子的抗原蛋白、病毒装配后剩余的抗原蛋白或ICHV的病毒粒子结晶,致密型包涵体未被免疫金标记,可能是病毒DNA;(3)感染细胞内出现的某些特殊结构均不具有病毒抗原性,其中纤维样结构和管状结构在病毒增殖过程中起支持作用.     

鸡传染性支气管病毒ZZ2004株致SPF感染鸡小肠损伤的病理与超微病变研究

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV) ZZ2004株引起鸡生长缓慢的发病机理,本实验将100只7日龄SPF雏鸡平均分为两组.实验组经口服病毒进行感染,对照组口服生理盐水,通过临床检查、病理学检查及超微病变观察进行研究.病理解剖学检查表明,实验组鸡各肠段有不同程度卡他性出血性炎性变化.病理组织学显示,小肠绒毛变短,上皮细胞脱落,固有层内炎性细胞增多.扫描电镜观察表明,肠绒毛的游离端常断裂,固有层裸露,在肠上皮细胞之间有大量杯状细胞的开口,并见大块状的分泌物渗出.透射电镜检查显示,残存的肠上皮细胞的微绒毛严重破坏；粗面内质网脱颗粒,滑面内质网明显扩张,呈囊状或泡状,在内质网中出现大量病毒颗粒；核周隙扩张,在核质中能够检出成熟的病毒颗粒.本研究结果表明:IBV ZZ2004株可以在肠上皮细胞中增殖,引起肠的吸收上皮和肠绒毛的一系列退行性病变,从而导致感染鸡代谢障碍,生长缓慢.     

关于家蚕病毒病的高温疗法的研究

讲演者基于对感染软化病病毒的家蚕幼虫用高温处理抑制发病的效果在组织学方面的研究(INOUE and TANADA,1977),对于感染了软化病病毒(IFV)、小型软化病病毒(SFV)以及细胞质多角体病病毒(CPV)等各种病毒的家蚕幼虫的高温疗法进行了研究。     

对我国养蚕业中传染性软化病的思考

本文综述了家蚕传染性软化病病毒（BmIFV)的病毒学和病理学研究进展。分析了BmIFV和家蚕浓核病病毒（BmDNV)在家蚕病毒性软化病发生和流行中的作用。认为开展BmIFV的研究，并调查其在我国蚕业生产中的流行情况，具有重要的理论意义和实用价值。     

家蚕病毒性软化病的研究进展

就家蚕病毒性软化病的病原发现、病毒的蛋白构成、病毒基因组的基本结构、结构蛋白的编码域、多元蛋白序列、翻译起始中相关的RNA元件和细胞因子、蛋白质的加工处理、复制机制,以及流行病学等的研究进行了综述。通过BmFV与其它小RNA病毒(或类似小RNA病毒)的比较,认为开展病毒侵染相关的细胞因子研究、病毒基因的功能和病害流行机制等的研究将是十分有意义的工作。     

家蚕病毒性软化病病毒抗血清的研制及应用

从蚕区农户分离了一株家蚕病毒性软化病病毒,暂命名为BmIFV-CHN001。利用蔗糖密度梯度及差速离心法提纯该病毒,将提纯病毒免疫家兔3次,得到BmIFV抗血清。所制备的抗血清采用琼脂双扩散法检测养蚕农户家蚕样本,调查该病毒病在浙江蚕区的感染现状,调查显示农村饲养家蚕具有较高的感染率。     

5种家蚕病毒的密码子及密码对使用模式分析

通过分析5种家蚕病毒基因组密码子和密码对使用模式,初步探讨5种家蚕病毒的基因组进化和对宿主的适应策略。采用生物信息学方法对碱基含量(GCall、GC1、GC2、GC3、GC3s)、有效密码子数(ENc)、相对同义密码子使用度(RSCU)、密码对(codon-pair)等进行统计分析的结果表明:5种家蚕病毒的密码子偏好性均较低,病毒间的碱基组成及ENc值差异较小,碱基组成对密码子使用模式影响较小;不同病毒选择不同的偏好性密码子,不同病毒的密码对偏好性程度不同,其中,家蚕类葡萄斑点病毒(Bombyx mori macula-like virus,BmMLV)密码对偏好性最强,家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cypovirus,BmCPV)和家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)密码对偏好性最弱。聚类分析表明BmCPV和家蚕浓核病毒(Bombyx mori densovirus,BmDNV)的密码子使用模式相似,BmNPV和家蚕传染性软化病病毒(Bombyx mori infec-tious flacherie virus,BmIFV)的密码子使用模式相似;BmMLV、BmNPV和BmDNV的密码对使用模式相似,BmIFV和BmCPV的密码对使用模式相似。5种病毒的偏好性密码子和偏好性密码对不同,显示不同病毒的密码子和密码对的进化路径不同,对宿主的适应策略不同。     

Ultrastructure and protein A-gold immunolabelling of HRT-18 cells infected with turkey enteric coronavirus

The Minnesota strain of turkey enteric coronavirus (TCV) was propagated in HRT-18 cells, a cell line derived from human rectum adenocarcinoma. A productive non-cytopathic infection was established, without a previous adaptation, in these cells as shown by the specific hemagglutinating activity in cell culture supernatants. A post-embedding immunochemical technique, using specific antiserum directed against the original egg-adapted virus and colloidal-gold-labelled protein A as the electron-dense marker, was used for the identification of the virus and related antigens in the cells by electron microscopy. Budding of typical coronavirus particles, through intracytoplasmic membranes and accumulation of complete virus within cytoplasmic vesicles or the lumen of rough endoplasmic reticulum, were the main features of the viral morphogenesis. Late in infection, numerous progeny viral particles were shown at the outer surface of infected cells, but budding could not be demonstrated at this level. Two different types of surface projections were observed on the extracellular particles of this avian coronavirus. These morphological characteristics have been thus far described only for mammalian hemagglutinating coronaviruses.     

家蚕传染性软化病病毒(桐乡株)5′端非编码区基因的克隆及序列分析

为了探讨家蚕传染性软化病病毒的复制与翻译机制,利用cDNA 5′末端快速扩增(5′-RACE)技术获得了家蚕传染性软化病病毒桐乡分离株(Bombyxmoriinfectious flacherie virus,BmIFV-2)的5′端非编码区(non-coding region,NCR)。序列比较分析发现:BmIFV-2的5′-NCR由155个核苷酸组成,A+U含量达60.64%,其中包含1个起始密码子AUG;与坂城分离株(BmIFV-1)的5′-NCR相比,BmIFV-2的5′-NCR在5′末端缺少1个核苷酸,但核苷酸识别率为100%(即单核苷酸变异率为0),而且这个缺少的核苷酸并不影响其5′-NCR的二级结构。与已经证实具有内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)活性的Iflavirus属的2种病毒EoPV(Ectropis obliquapicor-na-like virus)和VDV-1(Varroa destructorvirus 1)的5′-NCR相比,BmIFV的5′-NCR可能也具有IRES活性。     

利用杆状病毒Bac-to-Bac系统在家蚕表达猪繁殖与呼吸综合征病毒的E蛋白和M蛋白

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害养猪业的传染性病原。PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白基因是开发PRRSV病毒新型疫苗的目标基因。利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统,将PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白的基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb中,获得重组转移质粒pFastBacHTb-E和pFastBacHTb-M,转化大肠杆菌Bm DH10 Bac感受态细胞,获得重组杆粒BmNPV Bacmid-E、BmNPV Bacmid-M,将这些重组杆粒转染家蚕培养细胞Bm5,获得重组病毒BmNPV-E和BmNPV-M。将2种重组病毒分别接种5龄起蚕,用SDS-PAGE和Western blotting方法在重组Bacmid DNA转染的Bm5细胞和感染重组病毒的家蚕幼虫血细胞中分别检测到分子质量约20 kD和18 kD的E蛋白和M蛋白,表明PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白在家蚕培养细胞及幼虫体内获得了表达,为利用家蚕-杆状病毒表达系统研制PRRSV的新型疫苗与诊断试剂奠定了基础。     

人工感染IBDV鸡法氏囊的电镜研究

通过透射电镜系统观察了人工感染传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）后鸡法氏囊各类细胞的病理变化。感染后１２￣２４ｈ,病毒粒子主要见于髓质淋巴细胞中,细胞中可见到大量纤维样病毒发生基质及无囊膜包围的大型病毒晶格,细胞核染色质浓缩,核中出现纤维样结构。感染后３６ｈ,淋巴细胞开始大量裂解死亡。无囊膜包围的病毒晶格也出现于髓质网状细胞中,被感染的网状细胞并不裂解,而表现出细胞凋亡的特征：染色质固缩呈颗粒块状,胞     

家蚕微孢子虫感染BmN细胞的差异表达基因筛选及Akirin的原核表达

为探究家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)感染宿主细胞的分子机制,以感染Nb的家蚕卵巢上皮细胞(BmN)为材料,通过GeneFishing技术进行基因差异表达分析,发现感染Nb的BmN细胞有10个基因被诱导或抑制表达,这些差异表达基因功能涉及蛋白质合成、细胞信号转导、线粒体呼吸链电子传递、细胞能量代谢、细胞免疫及一些未知功能。运用RT-PCR方法克隆在感染Nb的BmN细胞中差异表达的免疫相关基因Akirin,获得一个长588 bp的完整ORF,编码195个氨基酸,预测蛋白质分子质量21.98 kD,等电点为8.97,属于碱性蛋白,该蛋白质经SignalP在线预测未见信号肽。通过原核表达获得家蚕Akirin的外源融合表达蛋白,为进一步研究家蚕Akirin在家蚕先天免疫系统中的功能奠定了基础。     

Oocyte ultrastructural characteristics in camel (Camelus dromedarius) primordial to large antral follicles

This study was conducted to describe in detail the ultrastructural features and morphological characteristics of camel oocytes from preantral follicles in relation to the sequential stages of follicular development and also for oocytes from antral follicles in relation to their diameter. Camel oocytes from primordial, primary, secondary and also early to late antral follicles were processed and examined by light and transmission electron microscopy. Primordial follicular oocytes were characterized by a layer of flattened granulosa cells around and also eccentric nucleus and few cytoplasmic organelles in the peripheral region. Up to the secondary follicle stage, flat cells were replaced by cuboidal granulosa cells and their number increased and also an increase in the number of organelles such as vesicles, mitochondria and endoplasmic reticulum was observed. In the early antral stage, the formation of zona pellucida, appearance of microvilli and pleomorphic mitochondria was seen and the nucleus was dislocated to the peripheral region. During final growth phase, the extent of endoplasmic reticulum, vesicles and mitochondria increased, the number of lipid droplets decreased and cumulus cell process endings (CCPE) were observed. In conclusion, the growth of camel oocyte is associated with progressive increase in the number of mitochondria, endoplasmic reticulum, Golgi complexes and cytoplasmic vesicles as well as decrease in the number of lipid droplets and the nucleus migration from an eccentric in preantral to a peripheral location in antral follicles.