牦牛源BVDV非结构蛋白NS5A的原核表达及抗原表位分析

【目的】利用原核表达系统体外表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)NS5A基因,获得非结构蛋白NS5A,对其进行核苷酸、氨基酸序列分析,以解析BVDV非结构蛋白NS5A的功能。【方法】参考BVDV-1型毒株V006的NS5A基因序列(GenBank登录号:KX170647)设计并合成1对特异性引物,以分离到的牦牛BVDV GSTZ毒株cDNA为模板,PCR扩增NS5A基因片段,并克隆至表达载体pET-28a (+)中,构建重组原核表达载体pET28a-NS5A。经酶切初步鉴定及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,然后利用IPTG诱导表达。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting分析鉴定重组蛋白的表达,并根据NS5A基因的序列构建遗传发育进化树,利用DNAStar软件预测NS5A蛋白的亲水性、表面可塑性和抗原性等特性,并结合二级结构的预测对NS5A蛋白的B细胞抗原表位进行预测。【结果】PCR扩增NS5A目的基因片段为1 488 bp,双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET28a-NS5A构建成功。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定重组蛋白,表达出了大小为55 ku的目的蛋白,大小与预期结果相符。通过对不同BVDV毒株NS5A基因序列构建遗传发育进化树,显示GSTZ毒株NS5A在遗传进化特征上属于BVDV-1型。NS5A蛋白的亲水性主要位于12—21、32—69、75—113、120—135、143—147、152—163、165—180、215—230、265—274、296—340、348—378、389—447、455—463、469—495位氨基酸处,表面可塑性主要位于14—18、37—42、76—81、86—109、154—160、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373、414—442、430—437、454—460位氨基酸处,柔性区域较多,主要位于14—21、37—43、67—82、86—93、97—110、152—158、169—179、218—231、240—255、296—310、313—328、344—359、364—373、413—422和472—483位氨基酸处。NS5A蛋白的B细胞抗原表位主要位于15—18、76—81、154—158、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373和414—422位氨基酸处。【结论】成功表达并鉴定了牦牛源BVDV的非结构蛋白NS5A,系统发育进化树表明BVDV GSTZ株基因型属于BVDV-1型,NS5A蛋白具有良好的抗原性,为深入解析BVDV非结构蛋白NS5A的自身结构功能、免疫学特性以及进一步研究非结构蛋白对病毒复制的影响提供参考。     

白细胞介素和干扰素γ对绵羊体外受精胚胎体外发育影响的研究

利用SOFM 0．8％BSA 1mM谷氨酰胺作为绵羊胚胎的培养液，分别添加LIF、IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ，以研究LIF、IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ对绵羊早期胚胎发育的影响。结果说明，LIF促进2—8细胞胚胎发育至桑椹胚，同时也能够促进桑椹胚向扩大囊胚和孵化囊胚发育。但IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ对绵羊早期胚胎的发育无显著影响。     

孕貂的饲养标准

孕貂的日粮配制要掌握品质新鲜,营养全面,适口性强,品种稳定,喂量渐增。日粮配方:鱼、肉200—230g、谷物20—25g、蔬菜20—23g、牛奶20—30g、麦芽10—15g、酵母1—3g、鱼肝油1g、维生素 C10—25mg、维生素 B_2 5mg、维生素 A500—1000IU、维生素 E2.5—5mg。日粮中蛋白质含量25—40g、脂肪不超过8g。每日上午8点前和下午4—5点各喂一次。     

利用气相色谱与质谱测定蜂胶所含酚酸和糖类

利用气相色谱与质谱对波兰南部收集的蜂胶进行测定。它的主要组分是酚酸衍生物和糖类。鉴定了7种糖:D—古罗糖、D—鼠李糖、D—glucitol、D—塔罗糖、D—果糖、D—葡萄糖、D—蔗糖。证实蜂胶含有香草醛和3个以前报道过的酚(型)酸(异阿魏酸、咖啡酸、肉桂酸);还鉴定了3,4—二甲氧肉桂酸和2—氨基—3—甲氧苯甲酸。对两种分离水溶性化合物的方法进行了比较。     

若干国家搅拌机的结构分析

<正> 苏联的配合饲料企业广泛使用的搅拌机有下列型号: 间歇卧式搅拌机:А9—ДСГ、СГК—1、СГК—1M、СГК—2.5、СГК—2.5M。间歇和半连续立式搅拌机:ВШС—2、ОКЦ—15。用于配制微量成分预混物的搅拌机:А1—ДСИ、А1—ДСЖ。在研制高效率的搅拌机机构中,采用了多     

游离 L—色氨酸在饲料中的添加效果

猪所需的必需氨基酸,已知有以下10种:L—精氨酸、L—组氨酸、L—异亮氨酸、L—亮氨酸、L—赖氨酸、L—蛋氨酸、L—苯丙氨酸、L—苏氨酸、L—色氨酸和 L—缬氨酸(L—胱氨酸、L—酪氨酸)。这些必需氨基酸都应在饲料中有一定含量。它们在不同的猪饲料中的使用剂量,美国国家科学研究委员会及日本的饲养标准均作了规定。通常,氨基酸都以蛋白质的形式存在于饲料中。配料时,一般将玉米和高粱作为碳水化合物的来源,鱼粉作为蛋白质的来源。虽然色氨酸的用量在猪的繁育期和生长期有很大的不同,但市场出售的高效饲料中一般     

美味咸兔肉的腌制和食用

1制作流程宰杀、剥皮—修整—腌制—煮制—食用。     

草地植物研究中的术语及其定义

<正> 1、anthesis——(单花)开花:在实际中开花盛期(date of peak anthesis)是指一个花序、植株或枝条上最大数量的小花散放花粉的日期。2、binder ripeness——割捆机成熟度:见 seed ripeness。3、biomass——生物量:活的植物和/或动物物质的重量。4、burn——灼伤:见 leaf burn,winter burn。     

生长肉猪饲粮能量、蛋白质转化的研究

以能量浓度3.1兆卡、蛋白质16—14％的饲粮对哈白、杜洛克、长白猪和杜哈、杜长哈以及杜枫哈等6组商品猪进行了饲养、消化代谢和屠宰试验。结果表明:DE/GE—89.34％,ME/GE—86.67％,RE/GE—38.16％,ME/GE—97.01％,RE/ME—42.79％;RE/ME—44.03％,DN/GN—83.78％,MN/GN—60.98％,RN/GN—29.86％,MN/DN—72.79％,RN/DN—35.86％,RN/MN—48.80％。可以依据化学分析数值推算实际沉积能量,相关很高(r=0.94):(?)(实际沉积能,兆卡/日)=0.0972+0.967X(推算沉积能)。据实测资料计算维持需要(千卡/体重~(0.76)):哈白—165、杜洛克—209、杜哈—179。     

饲料综合利用五种模式

一、草—牛—鱼—肥料:利用野草、稻草或牧草养牛,牛粪发酵喂鱼,鱼塘泥做肥料;二、饲料—鸡—猪—鱼—肥料:饲料喂鸡,鸡粪发酵喂猪,猪粪发酵喂鱼。鱼塘泥做肥料;三、草—牛—蘑菇—蚯蚓—鸡—猪—鱼—肥料:利用野草、稻草或牧草喂牛,牛粪作蘑菇培养料,蘑菇下脚料培育蚯蚓,蚯蚓     

一种兽用抗病毒药物

本发明公开了一种适用于禽畜类的抗病毒药物。它由以下重量配比的原料制成：白头翁1—6份，地榆炭1—6份，栀子2—8份，连翘2—8份，雄黄2—8份，狼毒2—8份，泽泻1—6份，木通1—6份，郁李仁1—6份，红藤2—8份，败酱草2-8份，牙皂1—6份。它可用于鸡、鸭、鹅流感、鸡瘟疫、猪瘟等禽畜类病毒感染性疾病。发明具有起效快、疗效好、成本低、毒副作用小的优点。     

青海研制出系列新饲料

青海省粮油综合厂饲料分厂研制出一批适合牛羊等草食家畜食用的精料补充颗粒料系列产品。 由青海省畜牧厅、省畜牧兽医学院有关专家指导下研制出的精料补充颗粒料系列产品主要有:401——羊抗灾保畜颗粒料、402——幼羊、病弱羊及怀孕母羊补充颗粒料、403——育肥羊精料补充颗粒料、501——     

萝卜丰产栽培技术

一、品种白粉团、春不老、酒罐、青长白、胭脂红、四季红等。二、栽培季节及播种期一般夏秋萝卜在７月下旬—８月上旬播种，９月中旬—１０月收获。冬季萝卜在８月下旬—９月上旬播种，１１—１月收获。春萝卜在１０月下旬—１１月播种，２—３月收获，四季萝卜常在春、夏季播种，夏、秋季收获。三、播种量每亩用种０．５—１公斤，小型萝卜用种多些。四、播种土地深翻欠细整平，以１．５—２米（４—６尺）开厢（厢沟２０厘米），亩施有机肥３０００公斤，过磷酸钙２５—３０公斤、草木灰５０公斤。一般用浅窝沟直播，每穴播５—６粒，大中…     

禽用喹乙醇的药物学特征

喹乙醇(Olaquindox)又称喹酰胺醇,商品名为倍育诺(Bayonox)、快育灵,化学名为2—[N—(2—羟基—乙基)—氨基甲酰]—3—甲基—喹恶啉—1,4—二氧化物,具有促进动物生长、提高饲料转化率及广谱抗菌的作用。国外合成后的最初主要用作猪、犊牛的生长促进剂。国内于1981年由北京营养源研究所研制成功,近年来推广用作家禽生长促进剂。《中华     

猪传染性胃肠炎病毒特异性受体APN 功能区的初步鉴定

试验为了构建猪氨肽酶N（pAPN）不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化,经Western—blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区。试验构建重组了质粒pET30a—pAPN1（106～669nt）、pET30a—pAPN2（670-1044 nt）、pET30a—pAPN3（1045-1773nt）、pET30a—pAPN4（1774～2328 nt）、pET30a—pAPN5（2329—2889 nt）、pET30a—pAPN6（106—1044nt）、pET30a—pAPN7（1774—2889 nt）;转化宿主菌BL21（DE3）细胞,IPTG诱导表达蛋白,包涵体经SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳回收纯化;用Western—blot、ELISA方法经抗pAPN多克隆抗体初步筛选出pAPN受体功能区。结果表明：pET30a—pAPN2、pET30a—pAPN3、pET30a—pAPN6、pET30a—pAPN7蛋白均以包涵体形式表达并纯化。pET30a—pAPN3、pET30a-6、pET30a-7能与抗pAPN多抗产生特异性反应。经抗pAPN多抗筛选初步鉴定出其主要抗原功能区在36—153aa、349—591aa、592～963aa内。     

种草养鱼应注意哪些问题

(一)选择适合的草种,配置相应的种植面积 可用于养鱼的主要高产牧草品种有黑麦草、苏丹草、杂交狼尾草、矮象草等。采取黑麦草—苏丹草—黑麦草、黑麦草—矮象草—黑麦草、黑麦草—狼尾草—黑麦草等布局较合理。在种草过     

三江白猪与5个品种猪RAPD分析引物的筛选

试验用100条引物对6个品种猪进行随机扩增，筛选出了25个多态性较好的引物，可产生遗传多样性，其中Q—13，Q—03，Q—01，K—07，K—19，G—13，A—09，C—19，C—5，C—11，K—09，E—03，E—15，S—17，S—13共15条引物的扩增结果稳定性好、多态性强。这些引物的RAPD扩增结果都可作为三江白猪品种的遗传多样性分析、基因定位及分子标记等。     

牛腮腺炎的中西医疗法

笔者1966年以来,采取中西医结合法治疗牛腮腺炎12例,均获痊愈,现介绍如下: 一、症状急性患者在耳下部出现肿胀、增温,触诊敏感。双侧患腮腺炎时头颈直伸,单侧发病时头弯向健侧。肿胀蔓延至喉头时,出现呼吸困难、咀嚼吞咽缓慢、口流涎水;化脓时,体温升高,疼痛加剧,肿胀破溃、流脓,口中发出恶臭气味。慢性腮腺炎肿胀坚实、无疼痛。其他症状不明显。二、治疗 1.内服“普济消毒饮”方剂:黄芩25—30克、黄连8—12克、陈皮15—20克、元参15—18克、连翘20—30克、板兰根30—45克、马勃10—15克、牛蒡子15—20克、薄荷10—15克、僵蚕5—10克、升麻10—15克、柴胡15—20克、桔梗10—15克、甘草10克。加水煎服,每日一剂,连服2—3剂。随症加减:体虚加党参;便秘加大黄、朴硝;体温升高时加公英、银     

鸡粪再生饲料利用

近年来 ,随着市场竞争的激烈 ,我国养殖业也经历了暴利、厚利、薄利乃至保本经营的过程。发展高效、循环、综合养殖就显得尤其重要。综合养殖是运用生态学原理及畜禽生理特性 ,多层次开发利用生物能 ,以降低饲养成本 ,提高效益的一门高效环保技术。综合养殖国内外都有成熟经验和成功模式 ,主要方式有 4种 :一是鸡—猪—鱼式 ;二是鸡—鱼或鸭—鱼式 ;三是鸡—猪—蛆—鸡式 ;四是鸡—猪—沼气—蚯蚓—鸡式。4种方式中以鸡—猪—鱼式较简单易行 ,推广的面积也较大 ,一些饲养场户搞综合饲养也大都采取此种方式 ,其比例大体可搞 2 0～ 2 5只鸡 1…