猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法的建立

用纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的gB-ELISA方法。最佳反应条件为：抗原包被浓度为3.15μg/mL,待检血清稀释度为1∶40。该方法对猪圆环病毒病、猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和SPF猪阴性血清检测呈阴性反应。批间、批内试验变异系数均不超过8%。用该方法与HerdChek ELISA试剂盒同时对119份血清进行了平行检测,其相对敏感性、特异性和符合率分别为：75%、80.7%和79%。试验结果表明：猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪伪狂犬病毒血清抗体检测。     

牛传染性鼻气管炎病毒gB ELISA抗体与中和抗体相关性分析

牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）是牛传染性鼻气管炎（IBR）的病原体,常引起流产和呼吸道感染等综合征,给养牛业造成了巨大经济损失。gB作为IBRV中最保守的抗原蛋白,是IBRV诊断的重要靶蛋白。为探究牛gB–ELISA抗体水平与VNT效价的相关性,本研究采用阻断ELISA和VNT两种不同的方法对某一牛场50份血清进行IBRV gB ELISA抗体检测和中和抗体测定。gB ELISA结果显示,阳性血清19份,阴性血清31份;中和抗体结果阳性17份,阴性33份。通过统计学相关系数分析,gB抗体阻断率和中和抗体效价值的相关系数为1.0,从而说明IBRV gB ELISA抗体和中和抗体呈较强的正相关。本研究为使用IBRV gB ELISA抗体水平评估牛群中IBRV抗体保护效果提供理论依据。     

两种检测免疫猪伪狂犬病血清抗体的方法比较

用2批伪狂犬病活疫苗分别免疫40～50 kg的健康敏感猪,每批疫苗免疫4头,每头肌注1头份.分别于免疫10 d、20 d后采血,分离血清.采用中和试验和乳胶凝集试验(LAT)两种方法检测血清抗体.结果显示:免疫10 d和20 d后,伪狂犬病中和抗体效价和LAT效价的几何平均值(GMT)分别为9.8、2.0,11.7、2.0;43.5、4.8,61.8、5.3.免疫20 d后,血清中和抗体效价为免疫10 d后的4倍以上,而血清LAT效价为免疫10 d后的2.5倍左右.     

伪狂犬病毒流行毒株的抗原性和血清中和特性分析

2011年以来,我国多个省份伪狂犬病免疫猪群相继暴发伪狂犬病疫情。为了探明伪狂犬病毒(PRV)流行毒株是否存在抗原变异,本研究从3个规模猪场3种PRV商品疫苗免疫的健康猪群中采集30份血清,经检测PRV gB ELISA抗体均为阳性,gE ELISA抗体均为阴性。采用PRV新流行毒株ZJ-01株和传统的LA毒株分别进行血清中和抗体测定,结果显示,3个毒株活疫苗免疫血清与ZJ-01株中和抗体效价明显低于其与LA株中和抗体效价。同时,ZJ-01株抗血清与ZJ-01株和LA株的中和抗体效价相似,其变异系数R值为0.279⁰.413,证明PRV分离毒株ZJ-01抗原性发生明显变异。本研究为伪狂犬病的防控提供了重要依据。     

科技前沿

猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法的建立用纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的gB-ELISA方法。最佳反应条件为:抗原包被浓度为3.15微克/毫升,侍检血清稀释度为l:40。该方法对猪圆环病毒病、猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征(猪蓝耳病)、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和SPF猪阴性     

闽北地区猪伪狂犬病抗体检测分析

为了解猪伪狂犬病在闽北地区的流行情况,整理并分析2015年度血清抗体检测数据。采用ELISA检测方法对闽北地区45个规模化猪场进行检测分析,通过检测样品血清中伪狂犬病gE抗体和gB抗体的水平进行结果判定。结果显示：送检的45个规模化猪场,伪狂犬病gE抗体阳性场达25个,猪场阳性率达55.6%;共检测1304份血清,其中伪狂犬病gE抗体阳性213份、可疑24份、阴性1067份,抗体阳性率达20.6%。从伪狂犬病gE抗体阴性猪场抽检猪伪狂犬gB抗体380份,gB抗体阳性258份,猪群伪狂犬病抗体保护率仅有67.9%。     

猪伪狂犬病阳性场gE与gB抗体监测及风险评估

采集衡阳某猪场119份血清样品进行伪狂犬病gE-ELISA（酶联免疫吸附试验）与gBELISA抗体检测。gE抗体检测结果表明,该猪场所检测猪群除公猪外都有伪狂犬病野毒阳性,是伪狂犬病阳性场,总阳性率为47%。公猪伪狂犬病野毒抗体阳性率为0,说明公猪暂时还没有感染伪狂犬病野毒,属于阴性猪;母猪群伪狂犬病野毒（gE）阳性率达50%~60%;30~40日龄及60日龄阶段猪群gE抗体阳性率分别为30%和55%,加上可疑的数量达到40%~65%,这阶段野毒抗体阳性估计主要受母源gE抗体的影响,且与母猪阳性背景基本一致,但也不能排除个别仔猪阳性抗体来自病毒感染;90~120日龄阶段gE阳性率不降反升,达到100%,说明90~120日龄阶段猪群是在保育转至肥育舍后被伪狂犬病野毒再次感染,gE抗体S/N值显著下降,抗体水平较高。gB抗体结果表明,该猪场伪狂犬病gB抗体阳性率为98%,公猪伪狂犬病gB抗体阳性率为100%,且公猪的gE抗体阴性,说明公猪gB抗体来源于疫苗免疫;母猪群伪狂犬病gB抗体水平高且整齐,可能是野毒感染和疫苗免疫综合作用的结果;30~40日龄阶段gB抗体水平整齐,这是由于母猪群gB抗体水平高且均匀整齐,其仔猪母源抗体相应较好;60日龄阶段gB抗体水平不整齐,这与母源抗体消退有关;90~120日龄阶段gB抗体水平显著提升,这可能是后期野毒感染所致,因为其gE抗体不降反升。综合该猪场gE和gB抗体检测结果分析表明,该猪场伪狂犬病在种猪群得到了有效控制,生产比较稳定,但种猪带毒且散毒,肥育猪的感染压力加大,造成病毒不断循环,肥育猪伪狂犬病野毒感染的控制成了稳定伪狂犬病阳性场的关键。目前,猪伪狂犬病阳性场应定时监测gE和gB抗体,根据猪场血清学检测结果,结合临床实际情况实时调整免疫程序,以便稳定生产和预防伪狂犬病的暴发。     

三种检测猪伪狂犬病抗体的方法比较

应用血清中和试验(SNT)、乳胶凝集试验(LAT)和PRVgpI抗体鉴别ELISA三种方法检测了42份猪血清中的伪狂犬病抗体效价并进行了比较。结果表明SNT与LAT二种方法的阳性符合率为87.1%(27/31),阴性符合率为90.1%(10/11),总符合率为88.1%(37/42),且SNT的敏感性高于LAT,但PRVgpI抗体与SN和LA抗体无相关性。     

应用微量中和试验进行猪伪狂犬病血清学调查

应用细胞培养微量中和试验（固定病毒稀释血清法）对来自２４个猪场共４２６份血清进行了猪伪狂犬病血清学调查。共检出阳性血清１７１份,血清阳性率达４０．１％,出现血清阳性的猪场有２０个,占所检测猪场的８３．３％,说明伪狂犬病在我省及我国流行相当严重。对其中５０份血清的中和指数（固定血清稀释病毒法）进行了检测,结果中和效价大于１∶２血清的中和指数都在１０２．５以上。     

应用微量中和试验进行猪伪狂犬病血清学调查

应用细胞培养微量中和试验（固定病毒稀释血清法）对来自２４个猪场共４２６份血清进行了猪伪狂犬病血清学调查,共检出阳性血清１７１份,血清阳性率达４０．１％,出现血清阳性的猪场有２０个,占所检测猪场的８３．３％,说明伪狂犬病在我省及我国流行相当严重,对其中５０份血清中的中和指数（固定血清稀释病毒法）进行了检测,结果中和效价大于１：２血清的中和指数都在１０＾２．５以上。     

一种鸡抗猪丁型冠状病毒阳性血清的制备方法

为研究能否用鸡制备出猪丁型冠状病毒(PDCoV)阳性血清。将PDCoV用BEI灭活制备抗原,抗原与矿物油佐剂乳化制备疫苗,疫苗多次免疫SPF鸡,采集血清,检测血清中和效价、将血清用于IFA检测PDCoV。血清中和效价随免疫次数增加逐渐增高,4免后14日的中和效价平均值为1300;中和效价1000左右的血清混合作为阳性血清,1000倍稀释可用于IFA检测PDCoV。实验说明,用鸡制备PDCoV阳性血清的方法成立,制备的阳性血清可用于中和实验、IFA检测PDCoV。     

伪结核棒状杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

为建立伪结核棒状杆菌(Cp)血清抗体间接ELISA检测方法,以热灭活处理的不同的浓度Cp菌株作为固相抗原包被酶标板,用不同封闭液封闭,设置不同的封闭时间,再用不同稀释度的待检血清和不同稀释度的酶标二抗与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行试验,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。结果显示,最佳抗原包被量为OD600 nm=0.084的菌悬液100μL,10 g/L BSA封闭时间2 h,一抗血清稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶5 000,血清阴阳性的OD450 nm值临界值为0.352。该方法仅对Cp阳性血清呈特异性反应,与6种常见病原阳性血清均无交叉反应,特异性较强。批内试验和批间试验的变异系数均小于9.5%,重复性较好。敏感性试验结果表明,当伪结核标准阳性血清进行1∶1 280稀释时检测仍为阳性,敏感性较强。用该方法对10份经细菌分离鉴定为阳性的血清进行Cp抗体检测,结果均为阳性。用建立的方法对临床随机采集的423份血清进行检测,结果显示阳性率为35%。研究建立的抗体间接ELISA方法为Cp抗体检测及血清学调查奠定了基础。     

SPA-ELISA检测猪伪狂犬病病毒血清抗体

本研究比较了SPA-ELISA和乳胶凝集试验（LAT）对广西部分猪场为狂犬病病毒血清抗体的检测。用SPA-ELISA检测了9个猪场248份血清，181份为阳性，阳性率73%。用LAT检查其中的SPA-ELISA阳性血清168份，98份为阳性，仅占58.3%。多数血清样本的SPA-ELISA检测结果比LAT高2个稀释度以上，说明SPA-ELISA的敏感性比LAT高。上述结果显示，广西的多数猪场已受到伪狂犬病病毒的感染。     

乳胶凝集试验与血清中和试验检测猪伪狂犬病血清抗体的 …

应用血清中和试验（ＳＮＴ）和伪狂犬病乳胶凝集试验（ＬＡＴ）诊断试剂盒对两种伪狂犬病是性血清、伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）高兔血甭及６０份被检猪血清进行了ＰＲＶ抗体效价测定和相关性分析,两种方法测得的抗体效价之间呈强相关性（ｒ＝０．９６）,且ＬＡＴ效价比ＳＮＴ一般高出一个滴度;能干为自３５个猪场的４１４份猪血清进行了ＰＲＶ抗体检测,并与ＳＮＴ检测结果进行了对比,结果在ＳＮＴ检测为阳笥的１７１份血清中,ＬＡ     

商品蛋鸡新城疫和禽流感疫苗免疫后卵黄抗体代替血清抗体检测的相关性分析

为了评价商品蛋鸡免疫新城疫和禽流感疫苗后卵黄抗体替代血清抗体检测时卵黄的最适处理条件,试验采用经新城疫和禽流感疫苗免疫后40天产蛋率在90%以上的健康商品蛋鸡(海兰褐)56只,采血取血清,每只鸡取1枚鸡蛋分离卵黄,采用完全随机分组试验设计,随机分4组,分别为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,每组56个重复,每个重复1份血清和1份相应卵黄。对照组为血清抗体检测,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别用生理盐水1∶1倍稀释卵黄、生理盐水1∶3倍稀释卵黄和三氯甲烷1∶3倍稀释卵黄,利用血凝抑制(HI)试验进行血清和处理后卵黄抗体检测。结果表明:检测卵黄中新城疫病毒和禽流感病毒H9抗体时使用生理盐水1∶3稀释卵黄,检测卵黄中禽流感病毒H7、禽流感病毒H5-11和禽流感病毒H5-12抗体时使用生理盐水1∶1稀释卵黄,处理后卵黄抗体效价与血清抗体效价均差异不显著(P>0.05),与血清抗体效价相关系数分别为0.837,0.853,0.888,0.888,0.839。说明在对卵黄进行适宜条件处理后,可以用卵黄抗体代替血清抗体评价商品蛋鸡抗体水平。     

猪流行性腹泻病毒间接ELISA抗体检测方法建立与应用

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是目前引起我国猪急性肠炎并水样腹泻的重要病原之一,但尚无商品化病毒血清抗体检测试剂盒。本研究以纯化的PEDV为包被抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了间接ELISA抗体检测方法,其反应条件为:抗原最佳包被浓度为3μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶100,包被时间为37℃作用2 h,1.5%BSA 37℃封闭3 h,二抗1∶10 000稀释,37℃作用30 min,抗体临界值为OD450nm≥0.306判为阳性,OD450nm≤0.268判为阴性,介于二者之间为可疑。该方法检测6份已知PEDV阳性血清效价为1∶3 200,检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病毒和口蹄疫病毒血清抗体均为阴性,批间和批内重复试验变异系数2.5%～8.3%,对江苏、上海、浙江、安徽地区587份猪血清样品进行检测,抗体阳性率达56.76%,证明该方法具有较好敏感性、特异性和重复性,可用于PEDV抗体检测和流行病学调查。     

乳胶凝集试验检测猪场猪PPV、JBEV和PrV血清抗体

用乳胶凝集试验（LAT）对两个规模化猪场的后备母猪进行猪细小病毒病（PPV）、猪乙型脑炎（JBEV）和猪伪狂犬病（PrV）血清进行流行病学调查，共检查血清样本67头份，结果检出PPV抗体阳性血清28份，阳性率为41.79％；JBEV抗体阳性血清18份，阳性率为26.87％；PrV抗体阳性血清19份，阳性率为28.63％；但两个规模化猪场的PPV、JBEV和PrV阳性率不一致，甲猪场的PPV、JBEV和PrV的阳性率分别为51.2％、30.2％和39.5％，乙猪场为25.0％、20.83％和8.32％。对3种病毒阳性血清进行抗体滴度测定，其抗体滴度在甲猪场均不高于1：16，乙猪场不高于1：8。     

小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内代谢消长规律的研究

为研究小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内的代谢消长规律,试验通过建立小反刍兽疫N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法、H蛋白阻断ELISA抗体检测方法与血清中和抗体试验方法,分别检测了羊免疫疫苗后体内N蛋白抗体与H蛋白抗体在每个免疫阶段的代谢消长变化。结果表明:羊免疫小反刍兽疫疫苗后,血清内的N蛋白抗体与H蛋白抗体在6~8周时血清抗体效价较高,对应的羊体内中和抗体效价为1∶512,且效价至少可以持续到10周以上,2种抗体具有一定消长代谢规律的相关性。该研究结果也为以N抗原与H抗原为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法、竞争ELISA检测方法、间接ELISA检测方法以及双抗原夹心ELISA检测方法奠定了一定的理论依据。     

江苏省猪伪狂犬病流行病学调查及两种疫苗免疫效果评估

为了掌控江苏地区规模化猪场伪狂犬病野毒的感染情况及其流行性趋势,比较变异株猪伪狂犬病疫苗(C株)和Bartha-K61疫苗的免疫防控效果。于2017年5月份至2019年1月份对江苏地区59个规模场进行采样,通过间接ELISA方法检测猪群中的gE抗体来鉴定猪群是否被伪狂犬病野毒感染。另外,在一猪伪狂犬病阳性的规模猪场进行变异株猪伪狂犬病疫苗(C株)和Bartha-K61疫苗的防控效果的实验,通过检测猪伪狂犬病gE,gB抗体及中和抗体来判定猪群的猪伪狂犬病抗体保护水平。显示4 608份检测血样中,gE阳性1 681份,阳性率36%,母猪群gE阳性率46%,育肥猪群gE阳性率28%,59个猪场中育肥阶段gE阳性的猪场22个,占比37%。在其中一个商品猪群gE抗体100%阳性猪场进行2组猪伪狂犬病疫苗的实验,通过实验2组商品猪gE抗体18周龄至出栏前均为阴性,同时检测发现变异株疫苗(C株)对经典株和变异株的中和抗体效价均高于Bartha-K61疫苗。结果表明,江苏地区猪伪狂犬病感染压力较大,另外C株疫苗相对于进口的Bartha-K61株疫苗在本场的免疫效果更佳。     

自制猪PPV和PRV二联灭活苗对后备母猪免疫效果观察

用自制猪细小病毒和猪伪狂犬病毒二联灭活苗对后备母猪免疫 ,效果观察表明 :猪细小病毒 HI抗体滴度最高达 1∶ 640 ,猪伪狂犬病毒血清抗体中和指数为 1 4 0 0以上 ,实验组母猪均未发生繁殖障碍 ,且平均产健康活仔率比对照组高出 1 .9%。