6种植物中内生镰刀菌的分离和鉴定

对6种植物的内生镰刀菌进行分离和培养,通过显微形态观察对获得的菌株进行分类鉴定,并测定菌落生长速度和ITS序列,初步分析植物中内生镰刀菌的种类和分布情况.结果表明,共分离出62株内生镰刀菌,分属于6种镰刀菌,62株内生镰刀菌中以尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌最为常见.     

3种沙生药用植物内生真菌的分离鉴定及其拮抗菌株筛选

采用3种消毒时间对沙冬青、老瓜头、甘草3种沙生药用植物内生真菌进行分离.结果表明:消毒3min来消除非内生菌的影响,效果较好;同一植株分离出内生真菌的数量,以根部最多,其次是茎部,叶部最少.合并形态相同的分离物,分离出的124株内生真菌除24株无孢菌属外,经初步鉴定分属于13个属,卵形孢霉属(Oospora)和串珠霉属(Monilia)各占18.63%;交链孢霉(Alternaria)占12.96%;间毛孢霉属(Septosporium)占10.53%;镰孢霉属(Fusarium)占9.72%;而头孢霉属(Cephalosporium)、束丝菌属(Ozonium)、青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、地霉属(Geotrichum)、亚大茎点菌属(Macrophoming)、丝核菌属(Rhizoctonia)分离数均小于5%.以4种植物病原菌为靶标菌,筛选出5株高活性拮抗菌株,抑菌带宽度达14.99mm.     

具有拮抗作用的石榴内生菌的分离与鉴定

[目的]筛选对石榴枯萎病菌具有拮抗作用的内生生防菌.[方法]从采自云南蒙自的石榴叶片中分离并获得5株内生拮抗菌,通过测定其对甘薯长喙壳(Ceratocystis fimbriata)的抑菌能力筛选出1株具有高效拮抗作用的生防菌株Y2,对其进行抑菌谱测定及鉴定.[结果]经生理生化和16S rDNA序列测定表明Y2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).[结论]试验结果为石榴枯萎病的防治提供了理论依据.     

半夏软腐病内生拮抗真菌的筛选及鉴定

从浙江、山东、四川、江西采集的135株半夏样品中分离出76株内生拮抗菌,经过平板对峙培养法进行初筛和半夏离体块茎复筛,筛选出2株拮抗真菌SC6和SC7,这2个菌株能完全抑制软腐病的发生。通过形态学和ITS rDNA序列分析,鉴定菌株SC6和SC7均为曲霉属土曲霉（Aspergillus terreus）。     

四种植物内生真菌对三种烟草病原真菌的拮抗作用

采用研磨法,从烟田杂草中分离得到4种对烟草病原真菌拮抗作用较强的内生真菌。对峙试验发现,内生真菌覆盖或包围病菌,病菌菌落与对照比较均减小。镜检结果表明：赤星病菌不产孢,根黑腐病菌产孢,孢子大小比正常的孢子小4．872μm×31．84μm;镰刀菌只产生厚垣孢子,病原菌菌丝生长畸形,严重影响了病原真菌的生长。这一研究成果为寻求烟草病害的生物防治扩大了拮抗菌的筛选范围。     

通过ITS序列分析鉴定云南重楼内生真菌

采用组织分离法从云南重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)根、根状茎和叶3个部位的组织块中分离出内生真菌,并对这些内生真菌进行了传统形态学和分子生物学(ITS序列)鉴定。共分离到内生真菌26株,鉴定为8属9种,其中从叶中分离出24株,从根中分离出2株,鉴定为1属1种,即球毛壳菌(Chaeto miumglobosum)。在分离出的9种内生真菌中,优势菌种为1号菌和3号菌,分别被鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和博宁炭疽菌(Colleto trichumboninense),分离率分别为23.07%和19.23%。     

通过ITS序列分析鉴定云南重楼内生真菌

采用组织分离法从云南重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)根、根状茎和叶3个部位的组织块中分离出内生真菌,并对这些内生真菌进行了传统形态学和分子生物学(ITS序列)鉴定。共分离到内生真菌26株,鉴定为8属9种,其中从叶中分离出24株,从根中分离出2株,鉴定为1属1种,即球毛壳菌(Chaeto miumglobosum)。在分离出的9种内生真菌中,优势菌种为1号菌和3号菌,分别被鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和博宁炭疽菌(Colleto trichumboninense),分离率分别为23.07%和19.23%。     

油茶内生拮抗菌的筛选与鉴定

[目的]通过对湖南长沙地区油茶内生拮抗菌的筛选,为油茶根腐病、叶枯病、炭疽病及软腐病的生物防治提供理论依据。[方法]采用研磨法从健康油茶根、茎、叶组织中分离出内生菌,通过平板对峙试验筛选出对油茶根腐病、叶枯病、炭疽病及软腐病都具有拮抗活性的内生菌,并进行形态观察和16S r DNA序列分析。[结果]不同组织内生细菌数量不同,根中内生细菌的数量最多,其次为茎,叶中最少。菌株J-3-1对油茶根腐病菌、叶枯病菌、炭疽病菌及软腐病菌均有拮抗活性,其抑菌圈半径分别为12.5、16.8、13.5、13.4 mm。16S r DNA相似性为99%。[结论]通过对该菌株进行形态观察及16S r DNA序列分析,鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

草果果腐病拮抗内生菌的筛选与初步鉴定

采用组织破碎、稀释涂布法、对峙培养法,分别从草果(Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire)根、茎、叶中分离果腐病镰刀菌拮抗内生菌。结果表明,分别从草果的根、茎、叶分离出内生细菌13、6、3株,从根、茎、叶分离内生真菌5、1、0株。从草果根、茎、叶分离到的内生细菌、内生真菌数量以及草果果腐病镰刀菌的拮抗内生细菌、拮抗内生真菌数量均呈现依次递减趋势。草果根部存在葡萄球菌属、微球菌属、芽孢杆菌属3类拮抗内生细菌及3株不同属的内生真菌,茎部仅有微球菌属1类拮抗内生细菌。     

瓜类植物内生真菌对3种土传病菌的拮抗作用研究

[目的]了解瓜类植物内生真菌对瓜类植物常见土传病原真菌的拮抗作用.[方法]对分自不同瓜类植物及不同部位的461株内生真菌分别与黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）、立枯病菌（Rhizoctonia solani）和菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）3种土传病菌进行对峙培养试验,观察菌落形态和生长情况,记载抑菌带的有无和宽度,计算供试病原真菌菌落生长抑制率,分析内生真菌对3种土传病菌的拮抗作用.[结果]内生真菌对供试病原真菌的拮抗作用表现为3种类型：抗生作用、基质竞争作用和寄生作用.在461株内生真菌中,共有13株对黄瓜枯萎病菌产生拮抗作用,25株对立枯病菌产生拮抗作用,64株对菌核病菌产生拮抗作用,分别占供试内生真菌菌株的2.8％、5.4％和13.9％.其中,菌株F30对黄瓜枯萎病菌的抑菌带最宽,达19.0 mm.菌株JCL24对立枯病菌的抑菌带最宽,达11.3 mm.菌株F94对菌核病菌的抑菌带最宽,达14.3 mm.对黄瓜枯萎病菌菌落生长抑制率大于70％的共3株,分别属于Nigrospora、Penicillium和Rhizoctonia属.对立枯病菌菌落生长抑制率大于70％的共11株,分别属于Alternaria、Apiospora、Bipolaris、Colletotrichum、Exserohilum和Fusarium 6个属.对菌核病菌菌落生长抑制率大于70％的共17株,均为Fusarium属.[结论]部分瓜类植物内生真菌对土传病菌具有拮抗作用,主要通过抗生作用,少部分通过基质竞争和寄生作用抑制病菌生长.一些菌株对供试病菌抑制作用很强,可能具有用于瓜类植物病害生物防治的潜力.     

盘龙参内生真菌多样性及其拮抗作用研究

为研究盘龙参内生真菌的多样性,并筛选具有抑菌活性的内生真菌。通过组织分离法分离重庆合川野生盘龙参内生真菌,利用ITS序列分析进行其多样性研究,并选用3种重要农作物病原菌进行平板对峙试验,最后对拮抗效果较好的菌株进行鉴定。结果表明:从盘龙参的根、茎、叶和花序中共分离出内生真菌48株,从中挑选出17株代表菌株,经ITS序列分析其分属于10个属,其中假埃希氏菌属真菌Pseudallescheria minutispora对番茄灰霉病菌有较好的拮抗作用,抑菌带达7.1 mm。本研究为盘龙参内生真菌的开发利用提供了基础资料,首次在国内详细描述了P. minutispora的形态学特征,为P. minutispora的分类鉴定提供依据。     

植物内生真菌镰刀菌对马铃薯晚疫病菌的抑制研究*

 鉴定了分离自7种植物上的11株内生真菌镰刀菌并研究了它们对马铃薯晚疫病菌的抑菌活性。对峙培养试验表明：11株内生真菌镰刀菌对该病菌均有抑制作用,其中菌株e060-1, e060-3,e060-4的抑制率达50%以上。这些内生真菌镰刀菌的毒素粗提液对该病菌菌丝生长有更明显的抑制作用,其中e012-3,e060-4和e032毒素粗提液的抑菌率达100%。毒素粗提液能明显抑制晚疫病菌孢子对离体叶片的侵染,其中菌株e032毒素粗提液的抑制率达971%。     

黄精根腐病分离菌及其拮抗内生细菌的鉴定

黄精是重要的药食同源植物。采集湖南洪江市发生的黄精根腐病株,从其分离菌株HF2的培养性状和形态学特征、真菌rDNA内转录区(ITS)、EF-1a区序列分析和系统发育关系比较等方面对该菌株进行了鉴定;通过平板对峙试验筛选对黄精根腐病菌具有抑制作用的内生细菌,并进行形态观察、生理生化指标测定和16S rRNA序列分析。结果表明:从根腐病株中分离得到的菌株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);从黄精中分离获得40株内生细菌,对尖孢镰刀菌有抑制作用的菌株10株,其中A8的抑菌效果最好,对病原菌的抑菌圈半径可达13 mm,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

苦瓜内生真菌对大肠杆菌拮抗菌株的筛选

以大肠杆菌(Escherichia coli)为测试菌,对77株分离自健康苦瓜(Momordica charantia L.)根、茎、叶、花、果的内生真菌菌株进行抗菌活性筛选。结果表明,77株内生真菌中,有31株具较强的拮抗作用,其中苦瓜内生镰刀菌菌株中62.96%具较强的拮抗作用;另外还有4个不产孢菌株也具有较强的拮抗作用。     

刺五加内生放线菌对5种苹果病原真菌的拮抗作用初探

以苹果病原真菌尖孢镰刀菌、层出镰刀菌、串珠镰刀菌、腐皮镰刀菌、立枯丝核菌为靶标菌,采用皿内对峙培养法,对265株刺五加内生放线菌进行抗菌活性筛选。结果表明:供试的265株内生放线菌抗菌谱广,抗菌活性强,至少具有1种抗菌活性的菌株占菌株总数的51.0%。对层出镰刀菌和串珠镰刀菌具有抑制活性的菌株较多,分别占检测总菌株的38.9%和48.7%。对尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、立枯丝核菌有抑制作用的菌株数量接近,分别占检测菌株总数的23.4%、31.7%、28.7%。对强活性菌株的PKSⅠ、PKSⅡ、NRPS、Helo、CYP功能基因筛选结果提示,菌株大多具有至少1种功能基因。10株强活性菌株系统发育分析表明,这些菌株都属于链霉菌属菌株。     

白术真菌病害的分离鉴定

2011年6— 8月份在浙江磐安地区采集到白术病害根、茎和叶片样本,经过室内分离试验得到4个根茎真菌分离物（分别记为R1~R4）与8个叶片真菌分离物（分别记为L1～L8）。依据科赫法则进行致病性测定,R1,R2为白术茎腐病病原菌,L3为白术叶斑病病原菌。通过形态学观察及分子鉴定方法确定R1为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum,R2为半裸镰刀菌Fusarium incarnatum,L3为长柄链格孢菌Alternaria longipes。     

一株来自红树内生拮抗真菌的鉴定

红树内生真菌在病害的生物防治方面有重要作用。本研究从秋茄的叶片和茎部共分离获得15株内生真菌,经对峙培养试验,有61.54%的菌株对目标病原菌蓖麻枯萎病菌有拮抗作用,其中从叶片组织中分离的内生真菌菌株MKA-5作用最明显。经形态学研究显示,该菌株菌落浅灰色至深灰黑色。分生孢子暗褐色,倒棒形或椭圆形,多数无喙,有纵横隔膜,分隔处溢缩,壁光滑,大小为7.0-18.5×3.0-8.8 μm,形态特征与链格孢 (Alternaria alternata)一致。进一步对该菌株的分子生物学研究,结果表明该菌株的ITS系列与链格孢模式菌株的同源性为100%。综合分析,拮抗菌株MKA-5鉴定为链格孢(A. alternata)。该菌株的鉴定对蓖麻枯萎病的生物防治有重要作用。     

地肤内生细菌对番茄灰霉病菌的拮抗作用

从植物内生细菌中筛选拮抗活性菌株和寻找新的农用活性代谢产物,可为植物病害防治提供新的资源。本研究从地肤中分离筛选得到5株对番茄灰霉病菌具有抑制作用的内生细菌,其中D-29菌株对在离体番茄上对灰霉病菌具有强烈的抑制作用。D-29发酵液、细菌悬浮液、无菌滤液在离体红番茄上对灰霉病抑制率分别为64.61%、61.50%、44.10%。发酵液在离体青番茄上对灰霉病菌的抑制率4d时为100%、6d时为67.11%。D-29菌株可使灰霉病菌部分菌丝顶端生长畸形,胞内物质外泄,产孢梗畸形。用不同浓度的D-29无菌滤液处理病菌孢子,100%D-29无菌滤液抑制效果最明显,抑制率高达80%。     

药用植物内生真菌对3种农作物病原真菌的拮抗作用

从药用植物海金沙中筛选抗小麦赤霉菌、番茄早疫霉菌、番茄灰霉菌等植物病原真菌的内生真菌,并进行活性物质检测。结果表明,抗作物病原真菌的药用植物内生真菌种类及其次生代谢产物都具有广泛的生物多样性。80%以上的内生真菌对3种农作物病原真菌具有较强的抗菌活性,其中116①、327和115①号菌株对以上3种霉菌菌丝生长的抑制率分别为99.7%、90.3%和99.1%,对孢子萌发的抑制率分别达到65.8%、55.9%和63.1%。     

大兴安岭野生药用植物内生真菌的分离及拮抗菌株初筛

为挖掘野生植物内生真菌资源,本研究采集了大兴安岭东麓野生药用植物,通过传统组织分离法,从21种供试材料不同组织部位分离纯化内生真菌,以常见作物病原菌为靶标菌,采用平皿对峙法筛选拮抗菌株.根据拮抗菌株菌落形态及分子生物学特征进行菌株鉴定.结果表明:共分离纯化478株内生真菌,筛选出61株具有拮抗作用的菌株,其中11株抑菌...