不同基因型苦瓜种子发育过程中核糖体失活蛋白的累积变化

【目的】研究不同基因型苦瓜核糖体失活蛋白（RIPs）在种子发育过程中的累积规律,为苦瓜RIPs的进一步利用提供理论依据。【方法】选取3个不同组群苦瓜品种为材料,对不同发育时期种子的盐溶性蛋白提取物进行SDS-PAGE分析。【结果】3个苦瓜品种种子的盐溶性蛋白组分存在明显差异,其中以分子量为20.0～29.0 kDa的蛋白质差异最为明显;29.0 kDa分子量的蛋白质在长大果型材料MC1及密瘤小果型材料MC11中的表达量比野生型材料MC18略高。3个苦瓜材料的29.0 kDa蛋白质在种子不同发育时期的表达量无明显差异,然而,在不同栽培季节其表达量差异显著。【结论】不同类型苦瓜材料种子中的RIPs含量变化在种子发育不同时期没有明显差异,而成熟种子具有产量高、易采收和贮藏等优点,是作为RIPs生产原材料采收的适宜时期;由于不同类型苦瓜的种子产量潜力有较大差异,因此,选择RIPs含量高且种子产量高的材料作为RIPs生产的品种较为适宜。     

苦瓜核糖体失活蛋白MAP30的原核表达与抗体制备

苦瓜核糖体失活蛋白MAP30(Momordica charantia antiviral protein 30)是苦瓜中一种具有抗病毒、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性的蛋白质.将舍有重组表达质粒pET-28(a)-MAP30的大肠杆菌BL21进行诱导表达获得了重组蛋白MAP30,对IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导浓度、诱导时间表达条件的分析表明,工程菌经0.2mmol·L~(-1) IPTG诱导6 h实现高效可溶性表达.利用镍离子鏊合亲和层析对重组蛋白纯化,当洗脱液中咪唑的浓度为100 mmol·L~(-1)时,目的蛋白被洗脱的效果最好.将纯化后的重组蛋白免疫家兔,获得了特异性的多克隆抗血清.     

苦瓜种子发育过程中水溶性蛋白组分的研究

选取在果型和果色上具典型性的4个苦瓜品种为材料,对不同发育时期种子的可溶性蛋白提取物进行了SDS-PAGE和IEF分析.结果表明,所有品种苦瓜种子均含有丰富的可溶性蛋白(14.4～116.0 kD),其中以分子量为27.6,47.4和43.4 kD的蛋白含量较高,有3种蛋白的分子量在30 kD左右,不同品种之间在小分子量蛋白的表达上有一定差异;所有品种种子均含有4种以上的碱性蛋白,但不同品种之间碱性蛋白的含量和积累规律存在一定的差异.     

核糖体失活蛋白及其抗病毒转基因研究

综述了几种常见核糖体失活蛋白在植物抗病毒基因工程中的研究,并对核糖体失活蛋白的发展前景进行了展望。     

栝楼籽核糖体失活蛋白的纯化及性质研究

用改进的方法从栝楼籽制得一种单链核糖体失活蛋白,研究其性质,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ显示为单一条带,分子量为２９ｋＤ,ｐＩ≥９．３,含糖量约为１．７５％。在兔网织红细胞裂解液系统中对蛋白质合成有较强的抑制活性ＩＣ５０为６．７＊１０＾－１０ｍｏｌ／Ｌ。     

望江南中核糖体失活蛋白新基因CassinⅠ的克隆及特征分析

【目的】克隆在植物抗病虫过程中具有重要作用的核糖体失活蛋白新基因,为该类蛋白基因功能研究和有效利用创造条件。【方法】通过分析多种不同来源的植物核糖体失活蛋白的氨基酸序列,据其保守区域设计1对植物通用简并引物P1和P2,对药用植物望江南基因组进行PCR扩增,获得一种新的RIP基因片段。通过RACE法,获得了其全长cDNA序列-CassinⅠ。【结果】CassinⅠ基因全长为882 bp,其推导的氨基酸序列与葫芦科两个代表核糖体失活蛋白β-luffin和Trichosanthin（TCS）的相似性分别为58.2%和34.7%,与GenBank中其它核糖体失活蛋白的序列无显著相似性。多重序列比对发现：CassinⅠ有9个氨基酸残基与TCS的N-糖苷酶活性位点的残基完全相同,另外两个残基发生了变化。所有的活性位点都在P1/P2扩增区段内。【结论】首次在望江南中克隆和报道一种新的核糖体失活蛋白基因,为进一步研究该基因的功能、并应用于作物转基因抗病虫害育种研究奠定了基础。     

6个植物核糖体失活蛋白新基因片段的克隆及特征分析

通过分析多种不同来源的植物RIPs的氨基酸序列,据其保守区域设计1对植物通用简并引物P1、P2,对基因组进行PCR扩增,分别从海芋Araceae macrorrhiza,烟草Nicotiana tobaccum、剑麻Agavaccae aga-ve、望江南(Cassia occidentalis、那坡指天蕉Musa spp.(BB)、邻水野蕉Musa spp.(AA)中获得1个基因片段.BLAST分析表明:它们推导的氨基酸序列只与多种不同来源的RIPs有相似性.其中,与葫芦科2个代表RIP相应区段的相似性最高,与β-luffin基因的相似性分别为97.2%、98.5%、97.9%、89.4%、97.9%、97.2%,与天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的相似性分别为63.6%、64.5%、64.1%、60.8%、64.8%、和63.6%.多重序列比对发现:6个序列中分别有10、9、11、11、9、10个残基氨基酸与TCS的N-糖苷酶活性位点的残基完全相同,只是残基位置不一致,仅有个别残基发生了变化.所有的N-糖苷酶活性位点都在P1/P2扩增区段内.     

C-末端缺失和完整的绞股蓝核糖体失活蛋白在大肠杆菌中的表达

将绞股蓝(Cynostrmma pentaphyllum)核糖体失活蛋白(Ribosome-Inactivating Protein,RIP)DNA部分片段和cDNA序列(GenBank登录号分别为AY075115和AY279219)插入到表达载体pGEX-2T的BamH 1/EcoR1位点处,构建了与谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合表达的载体。诱导表达和序列测定验证读码框的结果表明,C-末端缺失和完整的绞股蓝RIP在大肠杆菌DH5α菌株中实现了融合表达。     

核糖体失活蛋白及其在植物抗立枯丝核菌基因工程中的应用

核糖体失活蛋白(RIPs)是一类主要出现在植物中并具有r RNA N-糖苷酶活性的蛋白质,大体上分为Ⅰ型和Ⅱ型2类。介绍了RIPs在抗真菌活性、毒性和免疫原性方面的研究进展,并对其在抗立枯丝核菌植物基因工程方面的应用进行了综述。     

不同加速老化条件对苦瓜种子发芽的影响

以苦瓜种子为对象,研究不同的老化温度和时间条件对种子发芽的影响,旨在筛选出适宜苦瓜种子的加速老化处理条件,探讨建立用加速老化法测定苦瓜种子活力及耐贮性的操作标准。结果表明,随着老化温度的提高和老化时间的延长,苦瓜种子的发芽率呈下降趋势,与CK（100％）相比,45℃处理效果最为显著,处理144h后发芽率下降到53％,41℃处理效果最差,处理144h后发芽率仍达到85％;发芽速度和整齐度随着老化温度和时间的增加而降低。本试验结果表明,45℃处理144h为苦瓜种子加速老化的适宜处理条件。     

苦瓜性别分化程序表达的研究（英文）

苦瓜的性别分化过程要先经过一个两性期,再分别向雄性或雌性的方向发育. 对两性期和雄,雌花早期发育的3个典型时期的花蕾进行毛细管电泳分析,结果表明,一种分子量为11 kD的蛋白质在雌花发育的3个时期都存在,并且含量变化很小,很可能是雌花程序表达中的一种"关键蛋白";类似地,一种分子量为30 kD的蛋白质很可能是雄花程序表达中的一种"关键蛋白".此外,蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮抑制离体两性花的体外性别分化,而核酸合成抑制剂3-脱氧腺苷则不影响两性花的体外性别分化.     

低温胁迫下苦瓜幼苗差异蛋白的表达与分析

[目的]寻找与苦瓜苗期耐低温表达调控相关的蛋白,深入了解苦瓜抗低温机理,为下一步开展苦瓜耐低温分子基础研究及苦瓜耐低温育种打下基础.[方法]以耐冷型MC108和冷敏型MC6苦瓜品种为材料,运用双向电泳技术分析低温胁迫(8℃低温胁迫72 h)下苦瓜苗期叶片蛋白质差异变化.[结果]对2-DE图谱分析发现,冷敏型MC6和耐冷型MC108苦瓜品种间共存在82个差异蛋白点,其中,39个蛋白点上调,36个蛋白点下调,2个新增蛋白点,5个消失蛋白点;对其中24个表达量变化明显的蛋白质点进行MALDI-TOF-TOF/MS分析,经数据库搜索匹配,鉴定出5个未知蛋白和14个功能蛋白,这些蛋白涉及细胞防御、自由基清除、光合作用、基础代谢、蛋白降解等多个功能类别.[结论]在逆境胁迫下苦瓜可通过调节多种蛋白表达来适应外界温度的变化.     

CPPU对苦瓜(Momordica charantia L.)单性结实的诱导作用及其机理的研究

以中熟南山大白苦瓜为材料,研究了外源细胞分裂素活性物质CPPU对苦瓜单性结实的诱导作用和CPPU对苦瓜果实内源激素水平的调控,50mg.L-1CPPU于花前3 d处理,可引起苦瓜子房不正常开花(如花瓣绿色或边缘为绿色,花瓣小、厚、硬、粗糙;柱头干燥、光滑、绿色等)或盲花,使苦瓜子房不能正常受粉或受粉失败,从而形成无籽的苦瓜果实;CPPU处理提高了子房内源GA、IAA水平,是CPPU处理引起受粉失败或不能正常受粉的子房仍然能正常座果并生长发育形成无籽果实的重要原因,同时CPPU处理对内源CTK水平具有抑制作用,对其机制的探讨具有十分重要的意义.     

苦瓜多糖脱蛋白方法的比较研究

[目的]寻找合适的苦瓜多糖脱蛋白方法。[方法]比较了Seveage法、酶法、酶-Seveage结合法、三氯乙酸法以及盐酸法对苦瓜粗多糖的脱蛋白效果。[结果]酶-Seveage结合法的脱蛋白效果最佳,木瓜蛋白酶用量为1.25%（V/V）,pH 6.5,温度60℃,时间为2 h,再用Se-veage试剂脱蛋白1次,蛋白质去除率达77.2%,多糖损失率仅为19.3%。[结论]酶与Seveage结合法是一种有效的脱蛋白方法,此法可以较好地脱除游离蛋白,并使多糖损失较少。     

苦瓜的保健功能及其应用研究进展

苦瓜富含多种生物活性成分，具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤、抗生育、抗氧化、抑茵等功能特性。综述了苦瓜的保健功能以及其在食品、医学领域的应用研究进展，并展望了其研究和应用前景。     

苦瓜不同器官的蛋白质组分分析

苦瓜不同器官的蛋白提取物经SDS-PAGE和IEF分析,结果表明:在14.4～116 kD的分子量范围内,同一器官中可溶性蛋白的种类较醇溶蛋白更为丰富;不同器官中的醇溶蛋白表达存在一定差异,但至少有5种醇溶蛋白为各器官所共有;苦瓜各器官中的蛋白质等电点多数小于7,且主要集中在pH3.75～6.55之间,但种子、果实和根中有少量碱性蛋白存在.     

苦瓜种子发育过程中果实形态学性状变化与种子质量演进的关系

以12个不同类型苦瓜资源为研究对象,对其种子发育进程中的果实及种子的形态学性状变化及种子生活力、干重及含水量的变化进行调查,研究发现苦瓜种子发育过程可分为3个时期:快速膨大阶段、干物质积累阶段及成熟脱水阶段。苦瓜种子在12DAA(Date after anthesis)后开始具备生活力,充实成熟期在花后22DAA左右,此时具有最高的发芽率,而在此后的时期却略有下降。果皮颜色在22DAA左右从浅绿色转为黄色,假种皮颜色也在22DAA转红色,种壳完全转为褐色,种子达到充实成熟期和果实外部形态性状的明显变化基本同步。因此,可通过果实的外部形态特征、假种皮的颜色变化来确定种子的最佳采收时间,从而获得高质量的种子。     

苦瓜果肉蛋白的纯化及抑制作用研究

以新鲜苦瓜果肉为材料,用沉淀和层析技术方法制备得到纯化苦瓜蛋白,SDS-PAGE电泳显示为单一条带。用不同浓度的纯化苦瓜蛋白对豆类种子(绿豆、红豆、黄豆)、谷类种子(小麦、玉米、水稻)进行抑制试验,结果表明:纯化苦瓜蛋白对种子萌发有抑制作用,随其浓度的升高,种子淀粉酶活性和可溶性糖含量降低,蛋白质含量升高。纯化苦瓜蛋白浓度为2.5 mg/mL时对各种子生化指标的影响最大。提示纯化苦瓜蛋白是有效的抑制剂药用成分。