水通道蛋白8原核表达载体的构建及其表达纯化

为研究水通道蛋白8 (aquaporin 8,AQP8)的结构和功能,构建AQP8原核表达载体,表达纯化GST-AQP8融合蛋白。PCR扩增小鼠AQP8羧基端270bp的特异序列,定向连接到pGEX-4T-1载体,构建原核表达载体pGEX-4T-1/AQP8,转化大肠杆菌表达菌株BL21,IPTG诱导表达GST-AQP8融合蛋白,并对融合蛋白进行亲和层析纯化。酶切鉴定和DNA测序结果表明p GEX-4T-1/AQP8表达载体构建成功; SDS-PAGE结果证实GST-AQP8融合蛋白有效表达且成功纯化。本研究成功制备高纯度的GST-AQP8融合蛋白,为进一步探究AQP8的结构和功能提供基础。     

水通道蛋白在小鼠小肠中的表达和定位

探明水通道蛋白在小鼠小肠中的表达及定位,为研究小肠水转运过程中的细胞和分子机制奠定理论基础。本文运用RT-PCR和免疫印迹技术检测小鼠十二指肠、空肠和回肠中水通道蛋白的表达情况,结果显示,AQP3在小鼠空肠中存在基因和蛋白表达,AQP4在小鼠回肠中存在基因和蛋白表达。为进一步明确这两种水通道蛋白在小肠中的表达位置,通过免疫组织化学的方法进一步证实AQP3主要表达在小鼠空肠黏膜上皮细胞,而AQP4主要表达在小鼠回肠隐窝细胞基底膜。     

水通道蛋白AQP3缺失对小鼠坐骨神经损伤修复的影响

为探明水通道蛋白AQP3缺失对小鼠坐骨神经损伤修复能力的影响,本文通过建立小鼠坐骨神经损伤修复模型,分别比较了野生型(AQP3+/+)和基因敲除(AQP3-/-)小鼠的坐骨神经功能指数(SFI)、神经传导速率及雪旺细胞的迁移能力。结果显示,同野生型小鼠相比,AQP3基因敲除小鼠的SFI在损伤后7 d和14 d时呈现显示性差异,神经传导速率显著降低。细胞穿孔试验表明,AQP3基因敲除小鼠同野生型小鼠相比雪旺细胞迁移能力也显著降低。研究结果表明,AQP3的缺失可导致小鼠雪旺细胞的迁移能力降低,从而影响了小鼠坐骨神经损伤后的修复能力。     

肠道中水通道蛋白的表达和功能研究进展

肠道是机体重要的水盐代谢器官,其对于液体的转运能力仅次于肾脏,在维持机体水盐平衡中发挥着重要作用。水通道蛋白(aquaporin,AQP)是广泛存在于原核和真核细胞膜上快速转运水分子的特异性孔道蛋白,在机体许多器官的体液转运过程中发挥重要作用。因此,水通道蛋白在肠道表达及液体转运中的作用一直是研究热点。文章对肠道水转运机制、水通道蛋白在肠道中的表达及其作用进行综述。     

家蚕微孢子虫水通道蛋白基因NbAQP的克隆及表达特征分析

水通道蛋白(aquaporin,AQP)是在动物、植物、微生物细胞膜上发现的能够高选择性透过水分的一类通道蛋白。通过克隆家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的AQP基因,并分析其表达特征,为研究AQP在Nb孢子侵染宿主细胞时调节孢子内渗透压的作用积累基础信息。依据从Microsporidia DB和MIPModDB数据库比对获得的序列设计引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板克隆了NbAQP基因,该基因大小为750 bp,编码蛋白质分子质量为26.66 k D,具有MIP超家族水通道蛋白的保守跨膜结构域。用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR的方法,在Nb孢子感染宿主家蚕的7 d内,家蚕中肠组织中都能检测到NbAQP基因的表达,自感染后2 d开始,NbAQP基因的表达水平开始明显上升,直至感染后7 d达到最高水平。NbAQP基因的高水平表达时相与家蚕添食Nb孢子后中肠组织中成熟Nb孢子大量出现的时间相一致,初步推测NbAQP可能在家蚕微孢子虫成熟孢子发芽时的孢子内渗透压调节中起到重要作用。     

AQP9在脑疾病中的研究进展

水甘油通道蛋白-9 (AQP9)属于水通道蛋白家族,对水及一些小分子如甘油和尿素具有通透性.论文将集中论述与脑疾病相关的AQP9的最新发现.AQP9表达于星型胶质细胞和儿茶酚胺神经元,脑中AQP9的表达水平受血液中胰岛素浓度的调节,且其在糖尿病病人脑组织中高表达,该研究结果提示AQP9很可能参与脑部能量代谢；中风后AQ...     

猪水通道蛋白7基因第4内含子多态性分析

本研究旨在探讨国内外猪种水通道蛋白7(aquaporin 7,AQP7)基因多态性,以期为进一步研究猪AQP7基因与脂肪沉积性状的相关性提供理论依据。采用PCR-RFLP方法检测了猪AQP7基因第4内含子G/A在6个猪群中的多态性分布。检测结果表明,经PstⅠ酶切后发现了GG、AG和AA 3种基因型。在莱芜猪、里岔猪、鲁莱猪、杜洛克猪和大约克猪5个猪种中G均为优势等位基因,而在沂蒙猪中A为优势等位基因。χ²检验结果发现,基因型分布在莱芜猪、鲁莱猪和沂蒙猪群体达到了哈代－温伯格平衡(P>0.05),而里岔猪、杜洛克猪和大约克猪群体中均未达到平衡状态(P<0.05);不同基因型在群体间的分布差异极显著(P<0.01)。群体遗传特性分析表明,有效等位基因数在0.3084~0.4953之间,多态信息含量在0.2609~0.3726之间,属于中度多态。本研究结果提示,地方猪种、引进猪种和培育猪种AQP7基因内含子4的基因型分布存在明显差异,A等位基因作为脂肪沉积的有利等位基因尚需进一步验证。     

边缘革蜱aqp基因的生物信息学分析及克隆与表达

蜱类水通道蛋白(AQP)是负责胞内外水分子运输的蛋白质，属于内在蛋白超家族成员。该蛋白是一种潜在的抗蜱疫苗候选抗原。为探究边缘革蜱(Dm) AQP (Dm AQP)的生物学特性及其是否具有抗原性，本研究利用PCR扩增Dm两条不同的Dmaqp基因，分别得到582 bp的Dmaqp1基因和1 094 bp的Dmaqp2基因，并将其翻译成相应的蛋白，经各种生物信息学软件分析后显示，Dm AQP1和Dm AQP2蛋白理论等电点分别为4.76和8.65,Dm AQP1有4个跨膜区及1个天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸(NPA)结构，Dm AQP2有4个跨膜区以及2个NPA结构；Dm AQP1和Dm AQP2蛋白分别有5个和9个B细胞抗原表位，11个和25个磷酸化位点，两种蛋白均为疏水性蛋白；Dm AQP1和Dm AQP2蛋白二级结构均主要由α-螺旋以及无规则卷曲组成，分别占34.02%、39.69%和32.93%、39.52%。基于Dmaqp1和Dmaqp2基因，从其编码区选择抗原决定簇密集且跨膜区域少的片段进行截短基因的PCR扩增，构建原核表达质粒p ET-32a-jd Dmaqp1和p ET-28a...     

氯气中毒对小鼠主要脏器水通道蛋白4表达的影响

以昆明小鼠为研究对象,探讨氯气中毒对小鼠主要脏器(心、肝、脾、肺、肾和脑)水通道蛋白4表达的影响.将40只30日龄昆明小鼠随机分为试验组和对照组,用氯气诱发中毒性肺水肿模型,剖检观察各脏器病理变化.并运用免疫组化法(SABC)检测各脏器中水通道蛋白4的表达.结果显示试验组出现肺水肿的临床症状,除肝脏外其他脏器水通道蛋白4的表达明显高于对照组(P<0.01),HE染色见水肿典型病变.结论得出氯气中毒致使小鼠主要脏器的水通道蛋白4的表达上升,这可能与水通道蛋白4的转运水的功能直接有关.     

鸡水通道蛋白研究进展

<正>水通道蛋白(Aquaporin,AQP)是细胞膜上能高效选择性地转运水分子的特异性孔道~([1])。迄今为止已经发现了13个不同类型的水通道蛋白(AQP0-AQP12),在结构上,AQPs是整合膜水转运蛋白小分子混合物(～30 kDa)。组织定位和调节研究表明,AQPs在生理上涉及液体分泌和吸收的细胞中表达,例如在眼睛,中枢神经系统,外分泌腺,肾脏和脂肪组织中~([2])。AQPs根据功能可分为三类~([3]):(a)只转     

大豆抗原蛋白对仔猪肠道转运通道的影响

试验研究了大豆抗原蛋白对仔猪生长性能及肠道功能的影响。试验选用21日龄(杜×长×大)仔猪12头,随机分成2个处理组:对照组(饲喂含4%酪蛋白的基础日粮)和大豆分离蛋白组(饲喂含4%伴大豆分离蛋白的基础日粮)。试验为期7 d,采血后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠等组织样品,测定仔猪生长性能、血液生化指标、肠道损伤和肠道功能相关基因等数据。结果表明:1日粮中添加大豆分离蛋白降低了仔猪的日增重,提高了仔猪料重比和腹泻率。2大豆分离蛋白提高了仔猪十二指肠、空肠和结肠的隐窝深度,降低了十二指肠的绒毛宽度、回肠的绒毛高度和绒毛面积。3在日粮中添加大豆分离蛋白降低了十二指肠和回肠AQP 3、Villin、MMP3及空肠AQP10的基因表达水平;提高了空肠Bcl-2、CFTR、Pep T1、SGLT-1、NHE3、AQP 3、AQP 4、AQP 8和Occludin的相对表达量。因此,大豆抗原蛋白调控肠道黏膜损伤与修复和转运通道基因的表达,改变了肠道的正常组织形态,进而降低了仔猪的生长性能。     

AMPK/α-酮戊二酸轴调节仔猪肠道中水和离子平衡

通过敏感水通道蛋白(AQPs)和离子通道吸收水和离子对肠道的健康至关重要。然而,α-酮戊二酸(AKG)是否能改善脂多糖攻毒仔猪的肠道水分和离子稳态,以及这一过程是否涉及AMP活化蛋白激酶(AMPK)途径仍然是未知的。本研究旨在通过调节仔猪腹泻模型中的AMPK途径来探讨日粮中添加AKG对小肠水和离子稳态的影响。试验共选用32只断奶仔猪采用2×2阶乘设计方法;主要因素是日粮(基础日粮或1%AKG日粮)和攻毒(大肠杆菌LPS或盐水)。结果表明,在饲喂基础日粮和AKG组的仔猪中,LPS攻毒组增加了腹泻指数,影响了血清Na~+,K~+,Cl~-,葡萄糖的浓度、AKG及其代谢产物。然而,AKG的添加减轻了了腹泻率并改善了血清参数浓度。大多数AQP(例如,AQP1,AQP3,AQP4,AQP5,AQP8,AQP10和AQP11)和离子转运蛋白(NHE3,ENaC和DRA/PAT1)广泛分布于仔猪的十二指肠和空肠中。同时我们也发现AKG可以上调肠上皮AQPs的表达,但是抑制离子转运蛋白的表达。LPS攻毒降低了空肠和回肠中AMPK通路的基因和蛋白表达(AMPKα1,AMPKα2,SIRT1,PGC-1α,ACC和TORC2)(P 0.05)。值得注意的是,日粮中添加AKG提高了LPS攻毒的仔猪体内蛋白的表达丰度。总的来说,AKG通过AMPK途径在增加水和离子稳态中发挥重要作用。我们的新发现对预防和治疗新生儿肠道功能障碍具有重要意义。     

肉桂醛对炎性IPEC-J2细胞AQP4和NHE3基因表达的影响

本试验旨在探讨肉桂醛（CA）对炎性猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）水通道蛋白4(Aquaporin 4,AQP4)和钠-氢交换蛋白3(Na+-H+Exchanger3,NHE3)表达的影响,以揭示肉桂醛抗炎止泻的分子作用机制。将IPEC-J2细胞随机分为对照组、脂多糖组（5.00μg/mL LPS）和LPS+CA组（5.00μg/mL LPS+0.05μL/mLCA）组,各组按剂量孵育12h后,每组3个重复。采用CCK-8法检测细胞活力,RT-qPCR检测IL-1α、TNF-α、AQP4及NHE3 mRNA的相对表达水平,ELISA检测细胞中IL-6、TNF-α、IL-1α含量,Western blotting检测AQP4及NHE3蛋白表达。结果显示：与对照组相比,5μg/mL LPS能显著提高IPEC-J2细胞中IL-1α和TNF-α mRNA丰度及IL-6、TNF-α、IL-1α含量,说明5μg/mL LPS能诱导IPEC-J2细胞的炎症反应;与LPS组相比,0.05μL/mL CA与LPS共处理后,IPEC-J2细胞中IL-1α和TNF-α mRNA的表达水平显著下降,IL-6、...     

AQP7基因第4内含子多态性与猪脂肪沉积性状相关性研究

水通道蛋白7(Aquaporin 7,AQP7)是新发现的甘油水孔蛋白,其主要功能是运转甘油.本研究首次获得了大白、长白和梅山猪 AQP7 基因第4内含子序列,序列比对发现该序列存在 G/A 突变.采用 PCR-PstI-RFLP 方法在3个不同猪种之间进行了遗传变异分析,结果表明:大白和长白猪种以 G 等位基因为主,而梅山猪群以A等位基因为主,对234头大白×梅山F2代资源家系进行性状关联分析,结果表明该位点与猪板油重、内脂率、背膘厚、肥肉率和瘦肥比率等脂肪沉积性状显著相关(P<0.05),且 GG 基因型个体脂肪沉积性状值显著低于 AA 基因型个体,提高 G 等位基因频率可显著减少脂肪沉积.     

水通道蛋白在动物疾病发生过程中的作用研究进展

水通道蛋白(AQP)是细胞上存在的一种膜孔道蛋白。动物、植物、微生物细胞上均有水通道蛋白的表达,其主要功能是参与机体的水与电解质代谢。近年来,针对水通道蛋白在机体所发挥的功能方面研究较多,发现水通道蛋白不仅参与机体生理方面的调控,而且在一些疾病的发生发展过程中也发挥重要的作用。综述概括了水通道蛋白在脑、肺、肾脏、肠道等组织器官的定位;重点阐述了水通道蛋白在动物脑部疾病、肺部疾病、肾脏疾病、肠道疾病发展过程中所发生的变化。旨在为患病动物出现水与电解质代谢紊乱症状时,对水通道蛋白发生的变化研究提供参考。     

东方山羊豆水通道蛋白基因的克隆及初步分析

根据已知EST片段结合RT-PCR和RACE技术,从东方山羊豆(Galega Orientalis)中克隆到一个水通道蛋白(AQP)基因,命名为GoAQP(GenBank登录号:HM 803185)。测序和生物信息学分析表明,此序列全长1258bp,开放读码框(ORF)870 bp,编码289个氨基酸。GoAQP包含MIP家族信号序列HINPAVT/SFG,高等植物PIP高度保守序列GGANXXXXGY和TGI/TNPARSL/FGAAI/VI/VF/YN。与拟南芥AQP基因家族的系统进化分析表明,GoAQP属于PIP1亚型AQP蛋白。Real-Time PCR检测结果表明,GoAQP基因在根中表达量最高,茎中表达量最少;且受NaCl和PEG胁迫表达上调,NaCl表达呈双峰分布。因此GoAQP基因可能参与了东方山羊豆耐盐性调控。同时成功构建超表达载体pCAMBIA-1302-GoAQP,为转基因验证基因功能创造了基础。     

北京黑猪AQP9和RPS10基因多态性及其与背膘厚的关联分析

旨在研究水通道蛋白9(aquaporins9,AQP9)及核糖体蛋白10(ribosomal protein S10,RPS10)基因多态性及其与北京黑猪背膘厚的相关性,以期能够获得北京黑猪背膘厚的有效标记。本研究以413头北京黑猪为研究对象,测定不同部位(肩部、6-7肋间、胸腰结合、腰荐结合)的背膘厚度。PCR扩增AQP9和RPS10基因的启动子区和外显子区序列筛选SNP位点,并将SNPs与各部位背膘厚进行关联分析。运用荧光定量PCR检测基因的差异表达。结果发现,AQP9基因启动子区有4个突变位点,其中1个SNP:rs332699245 A>C与胸腰结合处背膘厚关联显著(P<0.05),且该位点突变预测到了结合转录因子的改变;RPS10基因在3′UTR、CDS区共有8个突变位点,其中5个与背膘厚显著关联：rs80795904 C>G、rs80932213 T>C与6～7肋间背膘厚关联显著(P<0.05),rs3469834461 C>T与肩部背膘厚、四点平均背膘厚关联显著(P<0.05),rs80862457 C>T与胸腰结合处背膘厚、...     

夏季皖东牛与荷斯坦牛皮肤汗腺及其散热调节特征

为了探究夏季高温时皖东牛与荷斯坦牛皮肤组织形态和皮肤散热调节特征的差异,在30℃以上的夏日,选择皖东牛和荷斯坦牛母牛各4头,屠宰后采集颈部、肩部、背部、腹部、臀部和腿部6个部位的皮肤样本,通过HE染色切片分析皮肤的汗腺(SWG)与皮脂腺(SEG)的分布与形态,测定皮肤组织乙酰胆碱(ACh)浓度及乙酰胆碱转移酶(AChT)和酯酶(AChE)活力,采用RT-qPCR和Western blot检测皮肤组织乙酰胆碱M3受体(ACh M3R)、一氧化氮合酶(eNOs)及水通道蛋白5(AQP5)mRNA和蛋白的表达。结果:部位间比较,皖东牛与荷斯坦牛表皮厚度均为背部最厚,颈部最薄(P<0.05)。品种间比较,皖东牛平均皮肤厚度较高,平均表皮厚度较薄(P<0.05);汗腺密度与皮脂腺密度品种间无显著差异(P>0.05);皖东牛汗腺和皮脂腺的平均长度、直径、深度、体积均显著增加(P<0.05)。肩部、背部和臀部皮肤对比:夏季皖东牛和荷斯坦牛皮肤组织ACh浓度品种间无显著差异(P>0.05),部位间以臀部最高,肩部次之,背部最低(P<0.05)。ACh M3R和AQP...     

MC4R在小鼠下丘脑的定位及其基因在发情周期下丘脑、卵巢中的表达变化

黑素皮质素受体-4(Melanocortin-4 Receptor,MC4R)在参与调节摄食行为和机体能量平衡中发挥重要作用,但其在生殖活动中的作用尚不明确。为此本实验以不同发情周期中的C57小鼠为对象,利用免疫荧光对MC4R神经元在下丘脑的表达进行定位。通过Western Blot确定MC4R在小鼠发情前期、发情期、发情后期和间情期的下丘脑和卵巢中蛋白表达变化。结果表明:MC4R神经元广泛分布于下丘脑第三脑室,发情期下丘脑中MC4R蛋白表达量显著低于其他3个时期(P0.05);同时期卵巢中MC4R蛋白表达量显著低于发情前期和发情后期(P0.05),发情后期MC4R蛋白表达量极显著高于其他3个时期(P0.01)。这一结果阐明了小鼠在发情周期不同阶段下丘脑和卵巢组织中MC4R的表达变化规律,为进一步研究MC4R在小鼠生殖活动中的作用提供理论基础。     

牦牛IGFBP4对肝细胞增殖的调控及功能分析

旨在探究牦牛胰岛素样生长因子结合蛋白4(Bos grunniens insulin-like growth factor binding protein 4, BgIGFBP4)在牦牛肝细胞增殖及小鼠生长中的作用。本研究构建了pET-28a-BgIGFBP4原核表达载体，对其进行表达、鉴定，用终浓度为0.002、0.02、0.2、2、20 μg·mL^-1的BgIGFBP4蛋白处理肝细胞，采用CCK8法、细胞集落形成试验检测BgIGFBP4蛋白对肝细胞增殖能力的影响。再根据试验结果选取浓度蛋白处理肝细胞，检测24、48、72 h时肝细胞活性、肝细胞上清生长类激素和肝细胞PI3K-Akt信号通路的变化。选取30日龄((18±1)g)健康雄性KM小鼠，试验组每2 d灌喂100 μL 50 μg·mL^-1 BgIGFBP4蛋白，对照组用等量0.9%的生理盐水进行灌喂，每组40只，共80只。试验前进行饥饿处理12 h，试验周期为28 d，在试验28 d时检测各项生长性能指标、血清生长类激素水平和肝PI3K-Akt信号通路的变化。结果显示，获得大小约28.86 ku的BgIGFBP4蛋白，并纯化鉴定得到该目的蛋白。2 μg·mL^-1 BgIGFBP4蛋白可促进牦牛肝细胞增殖及集落形成。与对照组相比，试验组(2 μg·mL^-1BgIGFBP4蛋白处理)肝细胞上清GH、VEGF含量显著升高(P<0.05)，肝细胞中PI3K-Akt信号通路细胞增殖相关基因ERBB2、IRS1、PIK3R1、AKT1、RAF1、MAPK3转录水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比，试验组(100 μL 50 μg·mL^-1 BgIGFBP4蛋白处理)小鼠平均日增重显著增加、料重比显著降低，肝、脾、肺、肾、小肠器官指数显著增加(P<0.05)。试验组小鼠血清GH、ISN、VEGF含量显著升高(P<0.05)，小鼠肝中PI3K-Akt信号通路相关基因ERBB2、IRS1、PIK3R1、AKT1、RAF1、MAPK3的转录水平显著升高(P<0.05)。综上表明，BgIGFBP4可通过调控PI3K-Akt信号通路促进牦牛肝细胞增殖、并能促进小鼠生长。这为深入研究IGFBP4在牦牛肝生长发育过程中的作用提供了参考。