邵阳地区宠物犬源致病性大肠杆菌的血清型鉴定及耐药性分析

为了分析邵阳地区宠物犬源致病性大肠杆菌的血清型与耐药性,采用细菌分离鉴定的方法对38家宠物医院中无菌采集的87份腹泻宠物犬肛拭子及粪便样品进行大肠杆菌分离鉴定,采用人工感染动物试验、玻板凝集试验和K-B药敏纸片法分别检测分离菌株的致病性、血清型及耐药性。结果显示:分离得到了49株大肠杆菌,其中34株为致病性;34株致病性大肠杆菌分离株属于9种血清型,以O_2、O_9、O_(13)和O_(20)为主要的优势血清型;34株致病性大肠杆菌分离株对阿莫西林、氨苄西林、美罗培南等4种药物耐药率在82.4%～94.1%之间,对丁胺卡那、头孢他啶、恩诺沙星等6种药物的耐药率在41.2%～79.4%之间,对头孢曲松、头孢噻肟耐药率在14.7%～23.5%之间。研究结果为该地区宠物犬大肠杆菌病防治提供参考。     

动物源肺炎克雷伯菌致病性与耐药性研究进展

肺炎克雷伯菌是一种条件致病菌,广泛存在于水、土壤、植物和哺乳动物黏膜表面。在动物机体衰弱、免疫能力低下或长期使用抗菌药物等情况下,会引起人和动物感染。目前尽管有关于家禽、家畜和野生动物感染肺炎克雷伯菌病例的报道,并具有较高的病死率,但在动物中肺炎克雷伯菌引发的感染还未引起足够重视。肺炎克雷伯菌具有广泛的毒力谱,主要包括荚膜多糖、脂多糖、菌毛、铁载体等,多种因素相互作用从而表现出致病性。兽医临床上,肺炎克雷伯菌常引起动物肺炎、乳腺炎、子宫炎、膀胱炎、脑膜炎和败血症等。为应对肺炎克雷伯菌等革兰氏阴性菌感染造成的经济损失,β-内酰胺类、多黏菌素类、四环素类、氨基糖苷类和喹诺酮类等抗菌药在动物中被广泛使用,导致多重耐药菌株不断出现,肺炎克雷伯菌的耐药性不断增强。此外,多重耐药肺炎克雷伯菌的储存库包括动物及其产品,会在人与动物之间或动物与动物之间传播。现对肺炎克雷伯菌的致病性、毒力因子、耐药性和防治措施进行综述,为进一步控制和延缓耐药菌的出现和耐药传播提供思路,为新兽药或非抗生素替代品的开发提供参考。     

河南驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性

为了分析驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性,从驻马店地区不同养殖场中采集患呼吸道疾病猪肺脏、鼻拭子等病料组织74份中分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌。采用人工感染小鼠致病性试验、PCR方法和K-B药敏纸片分别检测49株肺炎克雷伯氏菌的致病性、血清型及耐药性。结果显示,30株肺炎克雷伯氏菌对小鼠具有很强的致病性;43株分离菌株以K5、K20为主要流行血清型,分别占分离菌株的37.2%、27.9%;43株分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、大观霉素等7种药物耐药性较高,耐药率在51.2%以上,对其他药物的耐药率在18.6%~234.9%之间,且呈现多重耐药性,耐10、9种药物分离菌株最多,分别占分离菌株的25.6%、27.9%。本试验为该地区猪源肺炎克雷伯氏菌病的防治提供理论基础。     

大熊猫源产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性和致病性研究

为了掌握产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)在圈养大熊猫中的流行、耐药和致病情况,本研究采用碳青霉烯酶Carba NP检测法从178株大熊猫源肺炎克雷伯菌中分离鉴定出8株CRKP(4.5％).进一步采用纸片扩散法(K-B法)和PCR技术分别对CRKP分离株进行耐药性和碳青霉烯酶基因型研究,随机选取其中一株CRKP分离株...     

石河子地区某规模化奶牛场肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性分析

为了阐明引起石河子地区某规模化奶牛场犊牛呼吸道症状的主要细菌性病原体及其生物学特性,本研究采集2~6月龄犊牛鼻拭子与肛拭子各39份,通过细菌分离培养、形态学观察、生化分析、PCR扩增16S rRNA基因和溶血酵素（khe）基因、药敏试验和小鼠致病性试验等方法对分离菌株的生物学特性进行分析。结果显示,分离菌株中有3株在MIAC平板上形成紫红色带有沉淀环的菌落（鼻拭子1株,肛拭子2株）,且镜检为革兰氏阴性短杆菌,疑为肺炎克雷伯菌。全自动微生物分析系统显示,分离株与肺炎克雷伯菌相似性均为96%;PCR扩增16S rRNA基因测序结果显示,分离株与GenBank数据库中肺炎克雷伯菌核苷酸相似性在96.5%~99.8%之间,肺炎克雷伯菌特异性基因khe阳性且相似性达99%以上;药敏结果显示,分离菌株对青霉素类、头孢菌素类、一代和二代氨基糖苷类、四环素类、一代大环内酯类、磺胺类、多烯类、林可酰胺类抗菌药呈现出不同程度的耐药;对三代氨基糖苷类、二代大环内酯类、氯霉素类、多肽类、喹诺酮类抗菌药敏感,且呈现不同程度的多重耐药性;致病性试验结果表明,分离菌株均可不同程度导致小鼠死亡且以鼻拭子分离株致病性较强。本研究成功分离鉴定石河子地区规模化奶牛场引起犊牛呼吸道症状的肺炎克雷伯菌3株,并阐明分离菌的部分生物学特性,为新疆地区牛源肺炎克雷伯菌病的检测、诊断及临床治疗提供技术支撑。     

鹅源肺炎克雷伯菌分离鉴定及其致病性分析

为了确证辽宁鹅源肺炎克雷伯菌的致病性,无菌采集鹅肺炎发病病例的肝脾和肺脏,应用细菌分离培养、生化试验以及PCR方法对分离出的细菌进行鉴定,选取所鉴定的代表菌株,应用小鼠和雏鹅进行致病性试验,结果确认分离到2株肺炎克雷伯菌。小鼠致病性试验显示发病率为95%,死亡率为90%,死亡小鼠表现脑实质出血、肝脏坏死有出血点、肺脏充血出血等病理变化。雏鹅致病性试验显示发病率为100%,死亡率为85%,死亡雏鹅表现气管黏膜出血、大叶性肺炎等病理变化。近年来,鹅源肺炎克雷伯菌引起鹅肺炎为主的疾病发病率、致死率越来越高,防治困难。本研究对鹅源肺炎克雷伯菌的致病性进行了分析,为进一步建立鹅源肺炎克雷伯菌病的诊断和防治技术提供了依据。     

貉源志贺菌分离鉴定、致病性及耐药性分析

为鉴定引起河北地区貉腹泻的志贺菌并分析其相关生物学特性,本研究对2017年～2019年采自河北地区养殖场中患腹泻病貉的肛拭子、粪便及病料样品共计193份进行细菌分离,并经生化特性及PCR鉴定。将分离的志贺菌以0.25 m L/只(108cfu/mL)感染小鼠分析分离菌对小鼠的致病性。采用玻板凝集试验、PCR分别检测分离志贺菌的血清型及相关毒力基因。通过K-B药敏纸片法和PCR分别检测分离菌的耐药性及相关耐药基因,采用SPSS18软件中的Fisher确切概率法分析分离菌耐药表型与耐药基因之间的相关性。结果显示,从193份腹泻病貉样品中共分离到83株志贺菌,其中65株对小鼠具有致病性,且以致小鼠死亡4只(30.1%)、5只(22.9%)的菌株为主;65株致病性志贺菌分属于9种血清型,以福氏志贺菌2a (23.1%,15/65)、3a (20.0%,13/65)和1b (18.5%,12/65)型为主要流行的血清型;65株致病性志贺菌毒力基因ipaH、ipa BCD、ial、sen、Sat、Set1A、Set1B、sigA检出率均在50.8%以上,其他毒力基因检出率在38.5%～40%,未检...     

耐药性兔源肺炎克雷伯菌的研究进展

肺炎克雷伯菌属于肠杆菌科克雷伯菌属,为肠道、呼吸道、土壤、水和谷物等的常在菌,是一种条件性致病菌,能引起多种动物和人类感染发病,主要引起肺炎、脑膜炎、肝脓肿、眼内炎、伤口感染、泌尿系统发炎和全身败血症等.近年来,随着养兔业不断发展,规模化生产的普及,抗生素的泛用滥用,使得兔场耐药性肺炎克雷伯氏菌不断出现,给兔场预防和治...     

北京地区宠物犬源blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征研究

为研究宠物犬源bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况,同时了解宠物犬携带bla_CTX-M基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征,本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌,通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株,运用PCR检测bla_CTX-M基因,药物敏感性试验测定bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型,PFGE分型和全基因组测序技术分析bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示,共分离到7株bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌,3株来自宠物肛拭子,4株来自宠物鼻拭子;药敏试验结果显示,7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药,但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示,其中3株细菌相似度为100%,而另外4株细菌相似度差异较大（<30%）。全基因组结果显示,7株菌共有5个ST分型,bla_CTX-M基因分离的亚型为CTX-M-14型（n=5）和CTX-M-3型（n=2）,同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出,目前宠物犬源bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低,但其多重耐药性较严重,本研究分离的耐药基因bla_CTX-M、bla_SHV亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足,需进一步关注宠物细菌耐药性,为后续防控提供依据。     

四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了分析四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌耐药性并确定其耐药基因的携带情况,本试验采集了四川地区不同养殖场患呼吸道疾病牦牛肺脏、咽拭子、鼻拭子共127份病料组织,分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌,并采用微量肉汤稀释法结合PCR扩增法检测43株肺炎克雷伯氏菌的耐药性和耐药基因携带情况。结果表明：43株肺炎克雷伯氏菌对氨苄西林、阿莫西林、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药率较高,为65.12%~90.70%;对阿米卡星、氟苯尼考、多黏菌素B、大观霉素4种药物的耐药率在20.93%~48.84%之间;对头孢噻呋、恩诺沙星、环丙沙星3药物的耐药率在18.60%~25.58%之间;多数筛选分离得到的菌株均呈现出多重耐药性,耐9、10种药物的菌株最多,分别占分离菌株的23.3%和20.9%。通过使用PCR扩增法检测分离菌携带的耐药基因情况,结果表明：bla_TEM、bla_SHV、sul2、sul3、floR 5种耐药基因检出率较高,检出率在62.8%~69.8%之间;ant （3″）-Ⅰa、aph （3'）-Ⅱa、aac （6'）-Ⅰb、aacC2 4种耐药基因检出率较低,检出率在7.0%~20.9%;bla_CTX-M、Mcr-1、qnrA、qnrS、rmtB 5种耐药基因未检出。综上所述,本试验中分离得到肺炎克雷伯氏菌具有较强的耐药性并携带有较多的耐药基因,为了更好的促进四川省牦牛养殖产业的发展,应注意避免滥用抗生素并通过药敏试验对症下药。     

福建省莆田地区猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药情况检测

为了了解福建省莆田地区猪源肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的耐药情况,试验采集猪粪便拭子样品共340份,采用细菌分离培养与PCR方法进行细菌分离鉴定,通过微量肉汤稀释法检测分离菌株对9种抗菌药物的耐药性,并检测耐药基因和整合子的携带情况。结果表明：从粪便拭子中共分离鉴定出58株肺炎克雷伯菌,分离率为17.1%(58/340)。分离菌株对四环素的耐药率最高,为96.6%(56/58);对呋喃妥因、氯霉素和多黏菌素的耐药率分别为84.5%(49/58)、81.0%(47/58)和50.0%(29/58);对亚胺培南的耐药率最低,为5.2%(3/58)。分离菌株中耐药基因aadA1、tetA、phoQ、phoP和oqxA的检出率较高,均大于70.0%;从13株分离菌株中检测到Ⅰ类整合子,携带率为22.4%(13/58),主要携带的是氨基糖苷核苷酸转移酶(ANT)aadA22耐药基因盒,未测到Ⅱ类整合子。说明福建省莆田地区猪源肺炎克雷伯菌的耐药情况比较严重。     

鸭源沙门菌的分离鉴定、耐药性及致病性分析

【目的】为防控鸭源沙门菌感染,本试验针对四川德阳地区鸭源沙门菌的感染情况开展研究。【方法】从该地区3个种鸭场和1个鸭孵化场共采集不同类型样本222份,按国标GB 4789.4－2016方法对沙门菌进行分离鉴定,进一步通过K-B法检测分离菌对14种抗菌药物的敏感性,并对鉴定出的稀有血清型沙门菌进行致病性研究。【结果】疑似沙门菌分离株在BS琼脂上呈黑色、灰色或棕褐色、有金属光泽菌落,在XLD琼脂上呈无色透明、或中心黑色或几乎全黑的菌落。将疑似沙门菌株接种三糖铁琼脂斜面进行生化鉴定,疑似沙门菌分离株均能使三糖铁斜面变为红色,底部变为黄色带黑色,符合沙门菌生化特性。通过PCR对沙门菌特异性基因invA进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳后可在500 bp左右观察到目的条带,确认共分离到17株沙门菌,总分离率为7.7%（17/222）,包括鼠伤寒沙门菌、哈托沙门菌和波恩沙门菌3种血清型,其比例分别为47.1%（8/17）、29.4%（5/17）和23.5%（4/17）,优势血清型为鼠伤寒沙门菌。分离菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗菌药耐药率最高,对氨苄西林和链霉素的耐药率分别为82.4%（14/17）和88.2%（15/17）,对喹诺酮类抗菌药最敏感,其中对萘啶酸100%（17/17）敏感。分离菌存在严重的多重耐药现象,其中耐10种以上（包括10种）抗菌药的6株,占比35.2%,且10种抗菌药分别来自至少6类不同种类抗菌药;耐8种抗菌药物的2株,占比11.8%;耐5~7种抗菌药的6株,占比35.3%;耐2~3种抗菌药物的共3株,占比17.6%。通过寇氏改良法测得稀有血清型菌株H4、B2的LD₅₀分别为3.98×10⁶和1.58×10⁶ CFU,致病性试验结果表明,哈托和波恩沙门菌均能引起小鼠急性死亡,脏器充血、出血,细胞变性等。【结论】本研究成功分离到17株鸭源沙门菌,从鸭中分离到哈托沙门菌在国内外属首次。分离菌具有严重的耐药性和多重耐药现象,2株稀有血清型沙门菌对小鼠的致病力均较强,且致病作用相似。本研究结果可为鸭场沙门菌病的防治提供参考。     

水貂源肺炎雷伯菌的分离鉴定及致病性测定

[目的]为鉴定引发某养殖场水貂死亡的主要致病菌。[方法]从送检病貂获取的两株优势菌进行形态学和培养特征观察、生化试验、细菌16S-23S rRNA ISR基因的PCR鉴定、药物敏感试验、致病性试验。[结果]16S-23S rRNA ISR基因的PCR序列分析显示两分离株与已知的Kpn相应序列的同源性为99.9%。药物敏感试验表明分离菌株对阿米卡星、头孢曲松、头孢他啶高度敏感。致病性试验表明两菌株对小鼠均有较强的致病性,半数致死量分别为4.9×106cfu/mL、3.1×106cfu/mL。[结论]确诊分离到的两株优势菌是肺炎克雷伯菌,且该菌是导致水貂死亡的主要致病菌。     

一株兔源耐药性肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

本试验旨在对从患呼吸道感染和腹泻的仔兔血液中分离的1株疑似病原菌进行鉴定。采用分离培养、镜检、生化检测、荚膜染色、16S rDNA序列测序、药敏试验和动物体内感染等方法,对该疑似菌进行了分析。结果显示,该疑似菌呈杆状、含有丰富的荚膜多糖,其16S rDNA序列与肺炎克雷伯氏菌标准菌株序列相似性达到99%,且对链霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、硫酸庆大霉素、硫酸卡那霉素和氯霉素均表现出不同程度的显著抗性。腹腔注射该菌(10⁹ CFU/mL),仔兔全部死亡;而口腔灌喂,仔兔有较强的耐受性(无死亡)。结果表明,从患病仔兔血液中分离到1株肺炎克雷伯氏菌且具有致病性。     

藏香猪源大肠埃希菌致病性和血清型检测及药敏试验

为了解四川省藏香猪源大肠埃希菌致病性、血清型及耐药性情况,从四川省藏香猪养殖场中无菌采集腹泻仔猪肝脏、肛拭子及粪便等组织病料253份中,分离得到155株大肠埃希菌。采用人工感染小鼠致病性试验、玻板凝集试验和KB药敏纸片法分别测定155株大肠埃希菌分离菌株的致病性、血清型及耐药性。结果显示,小鼠致病性试验表明155株分离菌中120株有致病性;玻板凝集试验表明120株致病性大肠埃希菌分离株属于14个血清型,以O111、O147、O109和O119为主要流行的优势血清型;耐药性试验表明120株致病性大肠埃希菌分离株对阿莫西林、氨苄西林、新霉素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药较严重,耐药率在94.2%~98.3%之间,对庆大霉素、氟苯尼考、多西环素等6种药物耐药率在44.2%~85.0%之间,对其他药物耐药率在15.0%~37.5%之间。说明该地区藏香猪源致病性大肠埃希菌血清型呈多样性分布,耐药性严重。     

小熊猫肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

为探究1例10余岁小熊猫死亡的病因,无菌采集死亡小熊猫的肝、脾组织进行细菌分离培养。实验结果显示,在培养基上均有细菌生长,且菌落生长形态相似;分离菌革兰染色镜检、生化鉴定结果表明,各分离菌株特征一致,为肺炎克雷伯菌。小白鼠致病性试验结果显示,分离菌株具有较高致病性。     

1株猪源ST-35型肺炎克雷伯菌的致病性和药物敏感性分析

旨在了解从猪肺组织中分离得到的肺炎克雷伯菌的致病性和药物敏感性,本研究通过形态学鉴定、PCR鉴定、16S rRNA基因测序和MLST多位点序列分析等方法对分离菌株进行鉴定,毒力基因检测和小鼠攻毒试验确定分离株的致病性,并采用抗生素和中药分析药物敏感性。结果表明,分离菌株为革兰阴性杆菌,生化结果与肺炎克雷伯菌生化特性相符;16S rRNA基因序列比对分析和系统发育树构建确定分离菌株为肺炎克雷伯菌,命名为肺炎克雷伯菌KP-0728;MLST分析显示,KP-0728属于ST-35型,与ST-875汇聚在一支;KP-0728含有uge、wabG、fimH、kfu 4种毒力基因,感染小鼠可导致小鼠多个器官不同程度的病变,高剂量感染可导致小鼠死亡;KP-0728携带bla-SHV、sul2、tetA、aadA1 4种耐药基因;KP-0728对氨苄西林、亚胺培南、庆大霉素、四环素、复方新诺明耐药;对头孢曲松、头孢氨苄、头孢美唑、阿奇霉素、氧氟沙星、多黏菌素B、替考拉宁敏感;9味中药体外抑菌试验结果显示,茯苓对肺炎克雷伯菌分离株KP-0728的抑菌效果最为显著。动物治疗试验相关数据显示茯苓对KP-0728具有体内抑制作用。综上,本研究分离到1株猪源ST-35型肺炎克雷伯菌,携带多种毒力基因和耐药基因,人工感染小鼠可致小鼠发病,半数致死量(LD₅₀)为4.56×10⁶ CFU,对中药茯苓和多种抗生素敏感,研究结果为肺炎克雷伯菌的防治和疫苗研究提供了参考依据。     

鸡源肺炎克雷伯菌的分离鉴定和耐药性分析

为探究鸡源肺炎克雷伯菌的流行性和耐药情况,本试验采集蛋鸡新鲜粪便60份(雏鸡36只/产蛋鸡24只),通过分离培养、VITEK2 Compact生化鉴定、特异性基因PCR扩增和微量肉汤稀释法对分离菌株进行了菌种鉴定、耐药表型、耐药基因以及毒力基因检测。结果显示,从粪便样本中共分离出48株肺炎克雷伯菌;分离菌株对氨苄西林、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑和复方新诺明表现出高度耐药,耐药率范围为50.00%～100.00%,对奥格门丁、庆大霉素、头孢类和喹诺酮类药物耐药程度较低,耐药率范围为14.58%～27.08%,对黏菌素和美罗培南敏感;75.02%的菌株表现为多重耐药,最高表现为8重耐药,占10.42%。耐药基因和毒力基因检测结果显示,48株肺炎克雷伯菌共检出aadA1、tetA、oqxA、oqxB、bla_TEM和qnrB等6种耐药基因,以及entB、wabG、uge和kfuBC等4种毒力基因,本试验结果可为临床用药、动物源细菌耐药性监测和健康养殖提供数据支持。     

貉源致病性肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物的耐药性及耐药基因的检测与分析

为了分析貉源致病性肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性与耐药基因型之间的相关性,采用KB药敏纸片法和PCR法分别检测57株貉源致病性肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性与耐药基因.结果表明,57株克雷伯菌对庆大霉素、链霉素、卡那霉素、阿米卡星、新霉素的耐药率分别为54.4％、49.1％、22.8％、8.8％和1...     

貂源肺炎克雷伯菌耐药性、毒力及免疫原性分析

为分析山东地区貂源肺炎克雷伯菌(KPN)分离株的血清型、耐药性、毒力和免疫原性,本研究从临床患有肺炎症状的水貂肺脏组织中采用常规分离培养鉴定方法、16S rRNA PCR方法和分型PCR方法,分离鉴定出10株K2型KPN(QD/Kp1～QD/Kp10),采用109 cfu/mL的QD/Kp8腹腔注射健康易感水貂,进行动...