样品保存液在猪口腔液检测中的应用

猪口腔液作为血清、鼻腔拭子和肛拭子的替代品,已被用来检测和监测包括非洲猪瘟病毒在内的多种传染病。由于口腔液样品自身的复杂性,使得口腔液样品中的病原微生物容易降解,导致检测结果的不准确。试验的目的是分析动物DNA病毒(PRV)和RNA病毒(PRRSV)在口腔液样品中的储运条件对病原核酸检测结果的影响。将PRV和PRRSV与猪口腔液样品混合制备参考品,样品保存液A、B、C和生理盐水,在保存温度为4℃,25℃和40℃,保存0 d,3 d,7 d时分别提取各样品核酸,通过实时荧光定量PCR方法检测病毒样品量的变化。当用生理盐水作为样品保存液时,病毒的检出量下降;3种商业化的样品保存液在4℃条件下对病毒核酸都有保护作用,样品检出量优于其他温度条件。口腔液样品储运条件优选使用样品保存液,并在低温条件下储运最佳。     

利用棉绳采集口腔液监测猪伪狂犬病方法的应用分析

为分析使用棉绳采集口腔液监测猪场伪狂犬病(PR)方法的科学性,本研究拟通过实验室水平、动物试验及临床应用3个方面对使用棉绳采集口腔液监测猪场PR这一方法开展应用分析。首先对采样条件进行优化,并通过模拟试验测定棉绳对伪狂犬病病毒(PRV)的释放能力,通过动物试验测定病毒感染后检出时间,最后对临床样品进行检测分析。结果表明:使用直径为1.0 cm的棉绳,在早上喂料前采集口腔液样品,采样时间为20~30 min,可采集到更能满足试验要求的口腔液。病毒释放能力测定显示,棉绳对PRV的释放能力为50%左右,使用棉绳采集口腔液可检测到1个TCID50/0.1 mL的病毒含量。动物试验检测发现,猪群在感染后28 d中除第5天外,口腔液中病原含量均高于鼻拭子中病原含量,口腔液检测效果优于鼻拭子,且口腔液中病毒的检出时间(感染后第1天)早于血液中抗体转阳时间(感染后第7天)。临床样品检测分析结果表明,PRV疫苗免疫后也可通过口腔液检测到疫苗毒,并且存在无法通过口腔液检测感染PRV野毒后稳定猪中带毒的情况,因此口腔液检测方法应结合gE抗体检测,才可综合判断猪群是否为感染群体。综上,本研究优化了口腔液采集方法,并测定了棉绳对口腔液的释放能力和感染后检出时间,表明口腔液可作为较好的监测猪群PR的手段;口腔液监测方法需结合gE抗体检测来综合判断猪群是否为感染群体。     

利用棉绳采集口腔液监测猪伪狂犬病方法的应用分析

为分析使用棉绳采集口腔液监测猪场伪狂犬病（PR）方法的科学性,本研究拟通过实验室水平、动物试验及临床应用3个方面对使用棉绳采集口腔液监测猪场PR这一方法开展应用分析。首先对采样条件进行优化,并通过模拟试验测定棉绳对伪狂犬病病毒（PRV）的释放能力,通过动物试验测定病毒感染后检出时间,最后对临床样品进行检测分析。结果表明：使用直径为1.0 cm的棉绳,在早上喂料前采集口腔液样品,采样时间为20~30 min,可采集到更能满足试验要求的口腔液。病毒释放能力测定显示,棉绳对PRV的释放能力为50%左右,使用棉绳采集口腔液可检测到1个TCID₅₀/0.1 mL的病毒含量。动物试验检测发现,猪群在感染后28 d中除第5天外,口腔液中病原含量均高于鼻拭子中病原含量,口腔液检测效果优于鼻拭子,且口腔液中病毒的检出时间（感染后第1天）早于血液中抗体转阳时间（感染后第7天）。临床样品检测分析结果表明,PRV疫苗免疫后也可通过口腔液检测到疫苗毒,并且存在无法通过口腔液检测感染PRV野毒后稳定猪中带毒的情况,因此口腔液检测方法应结合gE抗体检测,才可综合判断猪群是否为感染群体。综上,本研究优化了口腔液采集方法,并测定了棉绳对口腔液的释放能力和感染后检出时间,表明口腔液可作为较好的监测猪群PR的手段;口腔液监测方法需结合gE抗体检测来综合判断猪群是否为感染群体。     

使用口腔液对后备猪群进行蓝耳病病毒驯化

一个健康发展的猪场每年都保持30%~50%的引种率.引种既是维持繁殖猪群数量稳定和胎次结构科学分布、 保证猪场生产成绩必不可少的环节,又是充满风险的环节.一旦引种后处理不当,则可能导致疾病的暴发,而科学的隔离和驯化则是降低疾病暴发风险的关键环节.以蓝耳病病毒驯化为例,驯化的目标是让同一批后备猪同期感染本场流行的蓝耳病病毒,在并群前既要产生针对性的免疫保护、 又要结束蓝耳病病毒的排毒.为了尽可能实现驯化的目标,本文介绍了一种非常实用的后备猪驯化方法,该方法基于用棉绳收集病毒血症期猪群口腔液,随后将棉绳悬挂于后备猪栏,让后备猪感染棉绳中的蓝耳病病毒而实现驯化.本方法适用于大、 中、 小各种类型的猪场,为实现稳定猪场的蓝耳病、 改善生产指标并在断奶时获得蓝耳病病毒阴性仔猪增加了可能.     

猪口腔液样品的采集及应用注意事项

随着猪口腔液的应用和检测范围越来越广泛,口液样品采集和监测技术逐步成为诊断猪群传染病、评价免疫效果、评估健康水平的重要评价工具,其采集方法简便、动物应激小,具有重要推广价值和广阔的应用前景。     

利用猪口腔液对猪场猪繁殖与呼吸综合征抗体进行检测

猪口腔液应用于检测猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)抗体监测在国内尚处于起步阶段。通过研究在猪场利用猪口腔液监测商品猪的PRRS抗体,并同时采集血液,比较口腔液和血液中PRRS抗体水平,进而为猪PRRS抗体监测提供新思路。对母猪和仔猪免疫PRRS弱毒疫苗,免疫后分不同时间段分别进行耳缘静脉采血和使用自制口腔液采样套装采集口腔液。然后利用2种ELISA试剂盒分别检测口腔液和血液PRRS抗体。结果表明,利用商品化ELISA试剂盒进行口腔液和血液中的PRRS抗体水平检测发现其具有相关性,尤其是免疫6周后,使用2种试剂盒检测的口腔液和血清中PRRS抗体结果符合率可达100%,故可选择测定免疫6周后口腔液抗体用于PRRS免疫效果评价。所以,猪口腔液采样是一种实用、有效的猪群PRRS抗体监测方法,可根据监测需求确定监测方案。     

猪卵泡液在猪体外受精中的应用

自 1 96 5年观察了猪卵泡液 (p FF)对小鼠卵母细胞减数分裂的作用 [1 ]以来 ,对p FF在猪卵母细胞体外成熟、体外受精和卵裂及体外胚胎发育中的作用已进行了深入研究。对 p FF组分的研究和应用 ,能促进卵泡液等重要生殖资源的充分利用 ,并有利于为生殖细胞的体外发育寻求新的培养基添加剂。     

猪圆环病毒感染及其对策

猪圆环病毒感染(Porcine circovirus infection,PCVI)是指由圆环病毒科、圆环病毒属的猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)所引起的哺乳仔猪和育肥猪的临床或亚临床型感染征。该病特征性的临床表现为患猪体质下降,皮肤苍白。由于起初各国对本病认识不充分,因此许多国家对该病的命名也不尽相同,英国称之为猪圆环病毒感染,法国称之为猪衰弱综合征,而西班牙则称之为猪断奶后多系统衰     

常见猪病诊断中口腔液样品采集及注意事项

口腔液取样具有无创、可实现早期诊断和群体诊断等优点,在猪病诊断中发挥的作用越来越大。在临床实践中,对口腔液样品的采集和送检如果没有做好,常常会影响诊断结果。总结口腔液采集过程中的一些影响因素和注意事项,以期为科学合理利用猪口腔液诊断猪只的健康状况提供参考。     

猪五种繁殖障碍性疫病病原体多重PCR的建立及初步应用

为了建立能够同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)的多重PCR,并用于猪场感染情况的动态监控以及临床诊断,根据GenBank中已发表的5种病毒的基因序列,针对CSFV的E2、PRRSV的Nsp2、PRV的gB、PCV2的ORF2和PPV的VP2基因,分别设计了特异性引物。在建立的单项PCR基础上,通过优化反应条件,建立了能同时检测5种病毒的多重PCR,并具有较高的灵敏性和良好的特异性。采用建立的多重PCR对127份疑似病猪的扁桃体活体组织进行检测,检出了5种病毒的存在,其中感染2种及以上病毒的样品比例为38.6%(49/127),表明该方法是一种快速、灵敏、高效的病原学检测手段。     

聚合酶链反应在猪伪狂犬病临床诊断中的应用

ＰＣＲ技术对２４个猪送检的３１４头新生仔猪和断奶仔猪病料进行伪狂犬病病毒ＤＮＡ片段检测,同阳性猪场２１个,占受检猪场的８８．０％;检出阳性病料１５２头份,阳性率为４８．４％,另对怀疑为伪狂犬病的１５９头猪鼻拭子样品进行检测,检出阳性猪１２０头,阳性率达７５．０％．     

规模化种猪场猪流行性腹泻监测及防控

猪流行性腹泻(PED)是一种以呕吐、脱水以及初生仔猪高死亡率为特征的急性肠道传染病,严重损害猪场的经济效益。广西某规模化种猪场在2021年底暴发猪流行性腹泻后,通过完善生物安全体系、使用自家组织灭活苗和对后备母猪反饲驯化,疫情得到了初步控制。为掌握PED的流行规律以及疫病防控方法,对该猪场2021—2022年产房仔猪死亡率进行了统计,并对PED病原和抗体进行了持续监测。产房仔猪死亡率结果显示,暴发PED期间全场产房仔猪死亡率达20.79%,部分栋舍仔猪死亡率高达71.63%。病原抗体监测结果显示,2021年第四季度场内PEDV阳性样品的Ct值均值最低,且此季度猪群的抗体水平最低。本研究为猪场防控PED提供依据,具有一定的参考意义。     

聚合酶链反应检测4种猪源细胞系中的内源性反转录病毒

为了建立检测猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retrovirus,PERV)的特异性方法，根据巳发表的PERV的序列，设计并合成了针对PERV核心蛋白（gag）、多聚酶（pol)、囊膜蛋白（env）基因的3对引物，预期扩增片段分别为361、150、265bp。应用PCR技术检测了PERV在4株猪源细胞中的整合情况。结果表明，在所有被检细胞的基因组中均存在有PERV的前病毒序列，应用RT-PCR检测上述4株猪源细胞中PERV特异性MRNA的表达，结果均为阳性。试验还对建立的上述2种方法的特异性进行了探讨，结果表明试验建立的PERV检测法具有较高的特异性。该方法的建立为进一步研究PERV奠定了基础，还可对异种移植动物模型及异种移植受体进行病原安全性监测。     

副猪嗜血杆菌PCR诊断试剂盒的研制及初步应用

在特异性和敏感性试验的基础上,组装副猪嗜血杆菌PCR诊断试剂盒,进行批间和批内试剂盒的检测、试剂盒在不同温度条件下的保存期试验等.结果表明,试剂盒特异性好、敏感性高,批内和批间的试剂盒无差异,试剂盒在-20℃可保存30个月,4℃可保存12个月.适用于不同地区、不同条件的实验室快速检测副猪嗜血杆菌.     

聚合酶链反应在动物病毒检测中的应用

八十年代中期问世的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)技术,被认为是分子生物学发展的一个新的里程碑。PCR的主要特点是能在体外大量迅速地扩增所选定的核酸(指DNA)片段。PCR技术用于检测传染病时,只要样品中含有极少量的病毒(或细菌)     

应用聚合酶链反应鉴别诊断马立克氏病病毒及免疫效果监测

应用３对引物建立了３套聚合酶链反应检测体系。用该技术分别检测马立克氏病毒１型,３型毒株,并能鉴别１型致癌性强毒株和非致癌性弱毒株;可从强毒感染 病鸡病变脏器和弱毒免疫的ＳＰＦ雏鸡不同时期采集的弱髓中检测到ＭＤＶ１型病毒的ＤＮＡ;可鉴别强毒发病鸡羽髓和弱毒免疫鸡羽髓。以羽髓为检测材料,应用上述ＰＣＲ技术可以ＭＤＶ１型弱毒疫苗免疫鸡群进行免疫效果监测。     

四川猪圆环病毒Ⅱ型的检测

据文献资料设计一对引物,初步建立了检测猪圆环病毒II型(PCV-2)核酸片段的PCR方法。从可疑病料中扩增出了预期长度为473bp的DNA片段,用另一套引物证实了PCR产物的特异性。首次证实了四川地区猪群中存在PCV-2感染,为进一步研究打下了基础。