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为建立特异性和敏感性高的检验犬细粒棘球绦虫感染的方法。用细粒棘球绦虫(简称,Eg)成虫抗原分别免疫兔和绵羊,收集高免血清,纯化的高免抗体。依据抗体夹心ELISA工作原理,以兔抗体包被,检测感染Eg、不同犬带科绦虫的实验犬和空白犬粪样,绵羊抗体扑捉抗原,HRP标记兔抗绵羊IgG(1∶8 000)催化显色,用酶标仪测定OD 405nm吸光度,用以确定其特异性和敏感性。试验结果表明,敏感性为82.69%(43/52),特异性为85.88%(140/163);粪抗原在感染细粒棘球绦虫16d后可检出,最低抗原浓度为9.7ng/mL即犬感染5条成虫时可检测出阳性。该检测方法具有较好的特异性和灵敏性,为进一步研制检测细粒棘球绦虫虫体抗原ELISA检测试剂盒奠定了基础。 相似文献
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用SP2/0骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原免疫的Ball/c鼠脾细胞融合,经克隆和筛选后获得8株分泌抗SPA的杂交瘤细胞株,即3A4,1IC2,2B3,2C2,2E3,3E6,3F10和2C2。亚类鉴定为IgG1(3A4,3E6,1C2,3F10和3C2),IgG2b(2C2),IgG3(2E3),IgG总(2B3)。免疫双扩散法显示2C2腹水及2B3,2C2,2E3培养上清粗提物与 相似文献
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用感染包虫的绵羊肝包囊中的活原头蚴腹腔接种BALB/C鼠,8个月后取鼠脾细胞与Sp2/o骨髓瘤细胞融合。经IHA筛选,获得14个阳性杂交瘤细胞株,对其中3株进行了克隆和进一步研究。结果表明,5C5与细颈囊尾蚴、脑包虫和肝片吸虫抗原均不发生交叉反应,腹水抗体的IHA效价为1:2048,属IgG2b亚类:3C5和6C4与细颈囊尾蚴和脑包虫有轻度交叉反应,腹水抗体的IHA效价为1:128,均属IgM类。 相似文献
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用醋酸缓冲液和40%饱和硫酸铵边续沉淀法从绵羊棘球囊液(SHCF)中得到部分纯化抗原(SPPCF),并从中分离了抗原A和抗原B,分别用单克隆抗体反向间接血凝试验(M-RPHA)、单克隆抗体双扩散试验(M-DD)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行了鉴别,表明自制的三株单克隆抗体(McAb)均识别SHCF、SHCF、SPPCF及抗原B,而不识别抗原A;用ELISA对阳、阴性血清检测,SPPCF、抗原 相似文献
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羊细粒棘球蚴病抗体间接ELISA检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究旨在通过建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段.作者利用DNAStar软件对GenBank上发表的细粒棘球蚴EG95蛋白的氨基酸序列进行分析,筛选出高度亲水的优势表位区EG95s,对该区域编码基因进行克隆并表达.以纯化的重组融合蛋白为包被抗原,按常规方法建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA,并对各种条件进行优化.SDS-PAGE结果表明成功获得了可溶性好、表达效率高、纯化简便的重组融合蛋白GST-1EG95s和HIS-1EG95s,Western blot检测结果表明表达产物具有较好的反应原性.间接ELISA方法优化结果显示:HIS-1EG95s作为包被抗原效果优于GST-1EG95s.经统计学分析,确定间接ELISA方法的判定标准:OD450nm值≥0.235时判定为阳性,OD450nm值≤0.191时判定为阴性,介于二者之间则为可疑.分别对采自新疆的70份羊包虫阳性血清和70份阴性血清进行检测,结果表明该方法与新西兰Wallaceville动物研究中心提供的间接ELISA方法符合率为100%,阻断试验结果显示与其他蛋白无交叉反应,批内变异系数介于3.8%~5.6%,批间变异系数介于5.7%~8.5%,结果表明该方法特异性强、敏感性高、重复性好.作者所建立的羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA检测方法有望为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段. 相似文献
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本实验应用体外培养方法制备细粒棘球绦虫六钩蚴排泄分泌(ES)抗原,应用酶联兔疫吸附试验(ELISA)首次对六钩蚴ES抗原的反庆原性进行了初步分析。以5μg/ml包被反应板分别与已知阳性,阴性血清;人工感染血清;免疫血清;疫区屠宰绵羊血清;肝片吸虫,细颈囊尾蚴以及边虫感染的绵羊添反应,结果表明六钩蚴ES抗原具有较好的反庆原性。SephadexG-200层析以抗原有一定的纯化作用。纯化六钩蚴ES抗原可 相似文献
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本文利用SDS-PAGE及Western印迹对细粒棘球蚴原头蚴可溶性蛋白进行了分析,结果其SDS-PAGE显示其共有29条蛋白多肽,主要成分为23.35,42,57,69和95KD。与羊阳性血清及犬阳性血清显色的条带分别为19条及12条,作用较强的条带分别为羊:35,40,43,57,69和95KD,犬:32,38,40。,57和88KD。 相似文献
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为建立一种快速、高效的诊断家畜细粒棘球蚴病方法,提取绵羊细粒棘球蚴包囊新鲜囊液,盐析囊液抗原,点样于硝酸纤维膜,以胶体金-驴抗羊IgG和胶体金-兔抗鼠IgG为检测标记物,采用垂直流渗滤装置检测绵羊与人工感染细粒棘球蚴小鼠血清和全血特异性抗体。患病绵羊阳性血清及全血检出率在90.91%~94.4%,细粒棘球蚴感染小鼠血清及全血检出率均为100%;细粒棘球蚴阴性羊血清和全血假阳性率为4.00%~4.59%;与脑多头蚴病血清交叉反应率为28.57%(2/7)。研究结果表明细粒棘球蚴全血金标渗滤法(DIGFA)可应用于绵羊棘球蚴病的诊断与检疫。 相似文献
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藏羊原发性细粒棘球蚴的超微结构 总被引:1,自引:0,他引:1
应用透射电镜观察到棘球蚴角质层呈明暗相间的层状结构;生发层皮层区见较多微毛和小泡;皮层细胞胞浆中含大量线粒体、内质网、核糖体、肌丝及核等细胞器,并见到皮层细胞内侧缘的椭圆形电子致密小体。运用扫描电镜对角质层横断面、生发层内表面及原头蚴进行了观察,对其形态学特点及意义进行了描述及讨论。 相似文献
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细粒棘球蚴细胞系(13G—5)细胞代谢抗原的免疫性和反应原性 总被引:1,自引:0,他引:1
应用培育成功的人源细粒棘球蚴细胞系(13G-5)细胞的天然代谢抗原,接种昆明小鼠,于接种后第14天给免疫小鼠接种人源细粒棘球蚴原头节约1000个,于200天剖检观察有无包囊形成,病理切片鉴定;并用该抗原作为诊断怕,使用间接血凝(IHA)、琼脂扩散(AGD)试验,检测临床确诊的细粒棘球蚴病人血清,以多房棘球细病人血清、细颈囊尾蚴羊血清及正常人血清作为对照。结果表明,该抗原能使60%的小鼠获工抗细粒棘 相似文献