华南地区猪场猪流感和甲型H1N1/2009流感病毒的血清学调查

为了解华南地区猪场猪流感病毒(SIV)和甲型H1N1/2009流感病毒(H1N1pdm09)的流行情况,本研究采用血凝抑制试验(HI),对2013年~2014年从5个省份采集的2 208份血清样品进行SIV和H1N1pdm09流感病毒血清学检测,结果显示阳性血清共1 269份(57.42%),其中广东省和广西省的感染率最高(p0.01)。H1N1SIV、H3N2 SIV和H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率分别为22.51%、32.97%和26.49%。H1N1pdm09流感病毒的抗体几何平均滴度(GMT)最高(91.93±1.04,p0.05)。H1N1 SIV和H3N2 SIV在冬季血清阳性率最高,然而在冬末(2月)阳性率却最低(p0.01)。H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率在5月和9月出现高峰(p0.01)。母猪的H1N1SIV和H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率高于仔猪和育肥猪,但仔猪的H3N2 SIV抗体阳性率却比较高。本研究为华南地区猪场SIV和H1N1pdm09流感病毒的预防提供参考依据。     

华南地区猪群猪流感病毒病原学和血清学调查

为了解华南地区猪群中猪流感病毒(SIV)的流行及其遗传变异情况,本研究从2016年~2017年广东、广西等地猪群236份猪肺脏病料组织和143份鼻拭子样品中分离鉴定得到3株SIV,全基因组测序和遗传演化分析结果显示,3个分离株均属于H1N1亚型欧亚类禽分支SIV,并且均与pdm09分支病毒株发生了重组。HA蛋白分子特征分析结果显示,A/Swine/Guangxi/NK/2016 HA蛋白第23位糖基化位点发生了缺失。3265份血清样品抗体监测结果显示,欧亚类禽H1N1、pdm09 H1N1和H3N2 SIV的血清抗体阳性率分别为27.53%、20.98%和34.85%。另外,0.64%的(21份)血清样品为H9N2亚型流感病毒抗体阳性,并且猪群中不同亚型和不同分支SIV之间混合感染的情况非常普遍。猪群中流感病毒血清抗体监测结果显示,EA H1N1、pdm09和H3N2亚型SIV HI抗体滴度最高均可达到1:1280,而H9N2亚型HI抗体滴度最高为1:160,表明H9N2 AIV虽然可以感染猪,但对猪还不适应。各月份的血清抗体阳性率分析显示,SIV的流行具有季节性,冬季(11月、12月和1月份)的流行最为严重。本研究可为华南地区猪群SI防控及疫苗株的筛选提供参考依据。     

我国猪群H1N1亚型流感病毒流行情况与生物学特性

感染猪群的流感病毒（swine influenza virus,SIV）对养猪业和公共卫生均构成一定威胁。对H1N1亚型SIV监测发现,经典猪H1N1(classical swine H1N1,CS H1N1)、欧亚类禽H1N1(Eurasian avian-like H1N1,EA H1N1)、人源H1N1和2009年大流行H1N1(2009 pandemic H1N1,pdm/09 H1N1)亚型流感病毒均在我国猪群内传播,并且这些SIV相互间不断发生基因重组。一些H1N1亚型SIV会偶发性引起人类感染,对公共卫生存在潜在威胁。此外,H1N1亚型SIV还会引发犬和水貂等动物的感染。经动物模型试验发现,不同H1N1亚型SIV在小鼠、鸡、猪和雪貂中的致病性及传播能力不同,其中一些SIV分离株显示出致死性,需要对其进行生物学特征研究,评估其对人类的潜在风险。SIV导致的猪死亡率不高,因而对其关注较少。但是禽源和哺乳动物源流感病毒可以在猪体内重组为可引起人类大流行的流感病毒毒株,因此应该及时了解SIV的流行情况与生物学特性,并做好相应的控制措施,以减少经济损失,避免具有大流行潜力毒株出现。...     

2011年～2012年我国不同地区猪流感血清学监测

为了解猪流感病毒(SIV)在我国的流行情况,本研究对2011年～2012年从不同省市重点地区屠宰场、规模化猪场和个体养殖户采集猪血清样品13044份,以经典H1N1 (CS)、类禽H1N1 (EA)、甲型H1N1(pdm/09)、H3N2、H5N1、H9N2亚型SIV抗原并采用血凝抑制(HI)方法检测.结果显示,2011年～2012年我国猪血清中类禽H1N1亚型SIV抗体平均阳性率比其他亚型高,分别为42.24％和45.89％,2011年甲型H1N1亚型SIV血清抗体平均滴度(GMT)比其他亚型高,GMT为53.32,2012年经典H1N1 GMT比其他亚型高,GMT为73.2.结果表明2011年～2012年我国猪群中H1N1亚型SIV感染较为普遍.     

2016年我国部分地区屠宰场猪流感血清学调查

目前,全球范围内流行的猪流感病毒亚型主要有3种:H1N1、H3N2、H1N2,此外,H1N7、H4N6、H9N2、H5N1、H3N3、H3N1和H2N3等亚型病毒也在猪体内分离到,但没有证据显示这些病毒在猪体内建立稳定的谱系。为了解我国屠宰场猪群中流感病毒的感染与流行情况,选取2009年甲型H1N1(pdm/09)、欧洲类禽H1N1(EA H1)、经典H1N1(经典H1)、新型三源重排H1N1(ReH1)、H3N2(H3)、H9N2(H9)流感病毒制备的血凝抑制(HI)标准抗原作为检测抗原,对全国25个屠宰场的猪血清进行了HI抗体的检测。结果显示,2016年我国屠宰场样品中,pdm/09、EA H1、经典H1、Re H1、H3、H9抗体阳性率分别为23.18%、28.12%、19.34%、24.97%、7%、7.41%;在所监测地区中,华南地区屠宰场猪流感血清平均抗体阳性率最高。结果表明,2016年我国屠宰场猪群中H1N1亚型猪流感病毒感染比较普遍,H3N2和H9N2亚型猪流感病毒抗体阳性率较低。     

一株重配型H1N2猪流感病毒的进化分析及对小鼠的致病性

为了进一步了解我国辽宁省猪流感(SI)的流行情况及病原的进化规律,对2016年年末在辽宁省某生猪屠宰场进行SI病原学监测时分离到的一株H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Liaoning/FX575/2016(简称FX575)进行全基因组序列测定,通过对其8个基因片段的基因来源进行分析,确定基因型;构建系统进化树;分析相关分子特征;进一步以6周龄雌性BALB/c小鼠为感染模型,通过测定感染后小鼠的体重变化和脏器病毒含量评估病毒的致病性。结果显示:FX575为一株三重重配型的H1N2病毒,遗传进化分析结果显示病毒的HA基因来自于欧亚类禽型H1N1(EA H1N1)分支的SIV,NA基因来自于北美三重配型H1N2分支的SIV,6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M和NS)均来自于2009/H1N1分支的病毒。以10~6EID₅₀的剂量经鼻腔途径感染小鼠后,能够引起小鼠出现明显的体重下降,其中有1只小鼠在感染后第7天体重下降的比率超过25%,判为死亡;感染后第3天在小鼠肺及鼻甲骨中均检测到较高滴度的病毒,含量分别为4.82、4.20 log₁₀EID₅₀·mL^-1。结果表明SIV在不断流行的过程中,不同基因型病毒之间发生重组导致出现基因三重配的病毒,病毒对小鼠呈现中等致病力特征,提示应进一步加强对SI的主动监测,从而降低病毒对兽医及公共卫生学风险。     

一株新型三源重配H1N2亚型猪流感病毒的进化分析及对小鼠的感染性研究

为了研究我国广西地区流行的猪流感病毒分子特征和感染性,本研究对分离自广西临床健康猪群中的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Guangxi/238/2018(H1N2)(简称GX238株)进行了分子进化分析和致病性研究。扩增该病毒株8个基因节段后进行分子进化分析,结果显示其8个节段均与2015年～2016年在美国分离的H1N2亚型SIV有高度同源性(98.9%～99.7%),其中HA基因可能来自于2009年之前的人季节性H1N1亚型流感病毒,PB2、PB1、PA、NP、NA和NS可能来自北美三重配H1N2亚型SIV,M基因可能来自H1N1/2009。以10~6EID_(50)SIV GX238株病毒鼻腔感染BALB/c小鼠后记录小鼠的体质量变化及死亡情况,感染后第3 d检测小鼠各脏器病毒复制情况。结果显示,感染组小鼠体质量与PBS对照组小鼠相比有明显下降趋势,感染小鼠40%死亡;在小鼠肺脏和鼻甲中病毒滴度分别达6.3 Log_(10)EID_(50)/mL、4.8 Log_(10)EID_(50)/mL,表明该病毒对小鼠表现出中等的致病力。本研究结果表明输入型SIV持续对我国猪群造成威胁,凸显了在世界范围内开展猪流感监测的必要性。     

甲型猪流感病毒对母猪繁殖性能影响的新研究

正近期一项新研究表明,母猪繁殖性能差与其感染甲型H1N1流感pdm09病毒有关,通过疫苗接种,可以改善被感染母猪群的繁殖性能。这项研究由德国慕尼黑临床兽医中心的猪病诊所的研究人员进行,调查了先前研究试验中记录的一种现象。猪感染甲型H1N1流感pdm09病毒后,与未感染的猪相比,母猪的繁殖性     

一株H1N1亚型猪流感病毒的分离鉴定及生物学特性分析

为调查南京地区猪流感流行情况,本研究于2011年2月～5月期间从南京某屠宰场采集健康猪的鼻拭子和肺脏组织样品共690份,常规无菌处理后进行RT-PCR检测,将检测为阳性的样品接种9日龄～11日龄SPF鸡胚分离猪流感病毒(STV).对分离株进行血凝试验、EID50测定、HA及NA基因测序分析和感染小鼠及猪体试验.结果有18份样品RT-PCR显示为SIV阳性,但只有一株可在SPF鸡胚中稳定增殖.该病毒分离株具有凝集0.5％鸡红细胞的活性,EID50为10-6.32/0.1 mL,基因测序显示其HA、NA基因片段均与09年H1N1型流感流行株A/California/04/2009 (H1N1)高度同源,将其命名为A/Swine/Nanjing/50/2011 (H1N1).小鼠人工感染试验表明该分离株可引起小鼠死亡(3/10),猪体人工感染实验显示该分离株还能够引发猪体明显的流感症状及肺部病变.该病毒的分离鉴定及HA、NA基因序列分析为进一步调查SIV的流行规律提供了基础数据.     

类禽H1N1亚型与Pdm/09H1N1亚型猪流感重组病毒的分离鉴定及其遗传进化分析

为了解猪流感病毒(SIV)的流行情况,本试验在2014年10月-2015年9月期间在广东省各地区采集猪的鼻拭子和肺脏病料,将样品处理之后进行鸡胚分离和RT-PCR检测,分离到1株SIV,对其进行全基因组测序和遗传进化分析,结果表明为H1N1亚型SIV,病毒HA,NA,M和NS基因片段属于类禽分支(EA),病毒PB2、PB1、PA和NP基因片段属于Pdm/09分支。HA基因序列同源性结果显示,核苷酸相似性为93.2%~99.1%,其中与A/swine/Jiangxi/3858/2011(H1N1)SIV同源性最高。抗原位点分析结果表明,分离毒株的抗原位点基本保守。本研究通对广东省各地区分离的SIV分析,为SIV的重组和变异趋势及公共卫生安全的防控提供依据。     

石河子垦区规模猪场H1N1亚型猪流感血清学调查

为了解石河子垦区规模猪场猪流感病毒H1N1亚型(SIV)感染情况,采集石河子垦区6个规模猪场血清,采用血清学方法进行HIN1亚型猪流感病毒抗体检测,同时调查混合感染情况。结果:186份血清样品H1N1亚型SIV抗体阳性率为27.42%(51/186),6个猪场感染阳性率为50%(3/6);51份阳性血清中,82.35%(42/51)感染了猪肺炎支原体(Mhp),80.39%(41/51)感染了猪圆环病毒2型(PCV2),29.41%(15/51)感染了猪胸膜肺炎放线杆菌(APP),50.98%(26/51)感染了副猪嗜血杆菌(HPS),62.74%(32/51)感染了猪链球菌2型(SS2)。说明垦区部分规模猪场存在H1N1亚型SIV感染情况,且混合感染情况比较严重。     

1株H3N2亚型猪流感病毒的分离鉴定

为了解广东猪流感病毒(SIV)的流行变异情况,2010年11月从广东某规模猪场采集流感症状的猪鼻拭子60份,接种10日龄SPF鸡胚,分离到1株猪流感病毒,通过流感分型RT-PCR和HI试验鉴定为H3N2亚型SIV,命名为A/swine/Guangdong/L22/2010(H3N2),进行全基因序列测定及相似性分析发现,该分离株有低致病性流感分子特征,该毒株的8个基因片段连同最近广东猪群流行的流感毒株与2000年前后H3N2人流感病毒有较高的同源性.系统遗传演化显示,该病毒分离株可能是由1999年人源H3N2流感病毒A/Moscow/10/99(H3N2)进化而来.     

上海地区猪群中H1N1甲型流感抗体检测

对2009年H1N1甲型流感流行前后的上海地区养殖场户410份猪血清样品,分别采用血凝抑制试验（hemagglutination inhibition,HI）和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）进行检测H1N1甲型流感病毒和猪流感病毒（Swine in？uenza virus,SIV）。检测结果表明,除2007年外,2008~2010年猪血清中均存在不同水平的HI抗体,阳性率呈显著上升趋势,且抗体水平与猪群饲养周期及饲养密度正相关,而与猪流感病毒的流行无相关性。     

影响H1N1亚型猪流感病毒致病性与传播性的分子机制研究进展

猪流感(swine influenza,SI)是规模化猪场普遍存在的疾病之一,全球广泛传播的猪流感病毒(swine influenza viruses,SIVs)亚型包括H1N1、H1N2和H3N2,我国以H1N1亚型的流行最为常见。进化上,H1N1亚型SIVs通常分为经典H1N1和欧亚类禽H1N1两大HA分支,分别于1930,1979年被首次分离,且都有直接感染人的病例报道;此后,两者参与重配生成的2009年大流行流感病毒(pdmH1N1/2009)又入侵猪群和人群,严重危害养猪业发展和公共卫生安全。现对致使H1N1 SIVs致病性发生改变或获得跨宿主传播能力的关键氨基酸位点变异及相关机制进行了总结,以期为SI的传播研究和防控提供一定参考。     

一株H1N1亚型猪流感病毒的遗传演化分析及在雪貂体内复制和飞沫传播能力评估

本实验室于2016年在天津分离到一株猪流感病毒(SIV),命名为A/swine/Tianjin/312/2016(H1N1)(简称为TJ312株)。为了解该株病毒的生物学特性及遗传演化特征,本研究对经PCR分段扩增该病毒全基因组并测序,采用SeqMan软件拼接成全基因组序列经BLAST比对,得到与该SIV各基因节段序列同源性最高的病毒株,采用mafft分析其各基因节段编码氨基酸序列的分子特征,利用MEGA5.1软件分别构建该病毒8个基因节段的进化树。结果显示,SIV TJ312株各基因节段与2016年分离自天津的H1N1 SIV相应各基因节段的同源性在99%～100%。进化树结果显示该病毒株HA、NA和M基因均来自欧亚类禽H1N1 (EA H1N1) SIV谱系;PB2、PB1、PA和NP基因来自2009/H1N1流感病毒谱系;NS基因来自北美三重配H1N2 SIV谱系。蛋白分子特征分析结果显示,HA蛋白碱性氨基酸裂解位点序列为PSIQSR↓G,符合低致病性流感病毒分子特征;受体结合位点符合人源唾液酸受体(α-2,6唾液酸受体)的分子特性;NA蛋白aa275为H、aa295为N,且该蛋...     

我国部分省份猪群中流感病毒血清学抗体的调查

为了解近年来我国猪群中流感病毒的感染与流行情况,本研究分别对2013年11~12月期间采集于福建等9个重点养猪省份的2 198份以及2014年3~4月期间采自于广东和湖南两省的3 654份猪血清样品进行了血凝抑制(HI)抗体的检测。选取欧亚类禽型猪H1N1(EA H1N1)、2009甲型H1N1(2009/H1N1)、H3N2亚型猪流感病毒(SIV)、H5N1禽流感病毒(AIV)、H9N2 AIV及H7N9流感病毒制备的HI标准抗原作为检测抗原。结果显示,2013年我国猪群中EA H1N1、2009/H1N1、H3N2 SIV、H5N1 AIV、H9N2 AIV及H7N9流感病毒平均抗体阳性率分别为49.73%、11.87%、1.71%、0、0、1.36%;2014年分别为48.52%、12.10%、1.04%、0、0、2.05%。检测结果表明2013年~2014年间我国猪群中H1N1亚型SIV感染比较普遍,H3N2、H9N2流感病毒抗体阳性率较低,未检测到H5N1、H7N9流感病毒抗体。     

一株猪流感病毒A/swine/Shanghai/01/2019(H1N1)的分离鉴定及遗传进化分析

为鉴定上海地区猪流感病毒的流行株及其分子生物学特征,本研究从上海地区养殖场采集疑似流感症状的猪咽拭子样品40份,采用套式PCR结合鸡胚分离鉴定方法,从中分离到1株H1N1亚型猪流感病毒(SIV),命名为A/swine/Shanghai/01/2019(H1N1)。经全基因组测定和遗传进化分析结果显示该分离株的8个基因节段与欧亚类禽H1N1 SIV同源性最高,其PB2、PB1、PA基因节段可能来源于A/swine/Jiangsu/49/2012(H1N1)病毒,NA、NP和M基因节段可能来源于A/swine/Shanghai/3/2014(H1N1)病毒。该分离病毒的HA蛋白裂解位点为PSIQSR↓GLFGAI,为低致病性流感病毒的分子特征。该分离株NA蛋白未出现与神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变,M2蛋白S~(31)N突变表明该病毒可能对金刚烷胺类药物具有一定的耐药性。PA蛋白~(224)S和PB2蛋白~(701)N突变提示该分离株对哺乳动物的适应性增强,可能导致其致病性增强,需要加强对此类SIV的监测。结合近年来的监测表明,上海地区猪群中H1N1亚型SIV持续存在,需要持续跟踪监测SIV变异趋势。本研究为防控猪流感提供实验依据。     

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1 SIV和HA基因核苷酸全长为1 778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HAI蛋白在10、11、23、87、287位都存在高度保守的糖基化位点,此外,在276位多了一个"-NTT-"糖基化位点,与参考毒株SW/IW/93/01一致,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征.本研究进一步发现,15株H1N1亚型SIV的HA基因切割位点氨基酸组成为IPSIQSR↓G,具有非高致病力毒株分子特征;而其受体结合位点在HA蛋白上第226位是Q,第228位是G,可能具有感染禽的潜力.经同源性比较,15株H1N1亚型SIV的HA基因与古典型H1N1猪谱系中的WIS/4754/94的同源性相对最高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别达到95.7%～96.1%和96.5%～97.2%.由同源性比较结果和进化树分析可见,15株H1N1亚型SIV的HA基因皆属于古典型H1N1猪谱系.     

西班牙养猪密集地区同时流行A型流感病毒H1N2、H1N1和H3N2亚型的证据

本文报道了对西班牙养猪密集地区进行的猪流感病毒(SIV)血清学和病毒学调查结果,其目的是检测H1N2亚型猪流感病毒是否和在欧洲其它地区一样也流行于这些地区。在西班牙北部和东部地区100个未接种猪流感疫苗的繁育群采集了600份母猪血清,以进行抗H1N1、H3N2和H1N2亚型病毒的血凝抑制试验(HI);再借助鸡胚病毒分离法和商品薄膜免疫分析法,对采自有呼吸道疾患的225份病猪肺样本进行检测以确定是否存在猪流感病毒。通过HI和逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,再辅以cDNA部分序列的测定,对分离毒株进行鉴定。对血清所作的HI试验表明,在83%受测猪群和76·3%受测猪中至少存在抗一种猪流感病毒亚型的抗体。在受检的600份母猪血清中,仅含抗H1N2、H3N2或H1N1亚型病毒抗体的样本数分别为109份(占总样本比例的18·2%)、60份(10%)和41(6·8%)。从有呼吸道疾患的猪肺样本中分离到12株H3N2亚型病毒、9株H1N1亚型病毒和1株H1N2病毒。对H1N2亚型分离株的神经氨酸酶基因436个核苷酸序列进行的分析,进一步证实了其身份。显然,猪流感依然流行于所研究猪群中,同时一种新的亚型病毒(即H1N2亚型病毒)可能正在开始流行,并且也在西班牙引起了临床发病。     

H1亚型猪流感病毒一步法实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、简便、准确的方法以诊断和检测H1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV),试验根据H1亚型SIV血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,分别设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,建立检测H1亚型SIV的一步法实时荧光定量RT-PCR技术。结果显示,该方法的敏感性可达10²拷贝/μL,除H1亚型SIV外,对H3N2亚型SIV、H9N1亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒的检测均为阴性,且应用该方法对疑似猪流感样品进行检测,其结果与SPF鸡胚分离病毒方法结果的符合率为94%。本试验结果表明该方法特异性强、重复性好,有望成为一种特异、敏感、快速、定量检测H1亚型SIV的方法。