牛支原体的分离鉴定及其对体外药物的敏感性分析

为探讨兽医临床治疗牛支原体肺炎常用药物的有效性,采用形态观察、分子生物学等方法对病原菌进行鉴定,共获得4株牛支原体,继而对分离菌株进行耐药性检测。结果表明,4株牛支原体均对大环内酯类抗生素耐药,对氟喹诺酮类及四环素类抗生素相对敏感。实验结果为兽医临床对牛支原体肺炎的治疗具有一定的指导意义。     

鸡毒支原体红霉素和替米考星耐药体外诱导及其23S rRNA基因V域突变特征分析

鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）是禽类主要病原菌之一，其感染引起鸡慢性呼吸道病（CRD）和火鸡传染性窦炎。目前预防鸡毒支原体感染仍主要依靠抗菌药物，但长期广泛应用抗菌药物造成鸡毒支原体耐药性不断发展。有调查表明，鸡毒支原体临床株对四环素类、大环内酯类及氟喹诺酮类等抗菌药物已产生了耐药性，造成药物疗效下降甚至失效。由于支原体分离培养困难，国内外对动物源支原体耐药性研究十分有限，至今未见有鸡毒支原体大环内酯类抗生素耐药机制的研究报道。本文以鸡毒支原体S6株为模式菌，研究红霉素和替米考星在体外诱导鸡毒支原体的耐药情况，并分析耐药菌株23S rRNA基因V域的耐药突变特征。     

畜禽粪便中抗菌药物残留检测方法研究进展

由于抗菌药物的广泛使用,使很多养殖场的畜禽粪便中长期存在一种或多种抗菌药物的残留。畜禽粪便中抗菌药物残留不仅对微生态环境造成破坏,而且通过食物链对人体健康造成影响。有关学者就畜禽粪便中一些抗菌药物的残留检测方法进行了相关研究,已报道的有四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类、磺胺类及聚醚类离子载体抗生素等,所建立方法都是高效液相色谱检测法（HPLC）。同时,对有的抗菌药物还进行了降解规律和方法的研究,如金霉素、恩诺沙星及盐霉素等。这些研究将为控制和消除畜禽粪便中抗菌药物残留以及促进其循环再利用提供科学依据。     

一种犬细小病毒基因工程抗体的制备

本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体的可变区序列,将可变区序列与鼠源抗体恒定区序列连接;分别构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H,将载体共转染HEK-293细胞,采用血凝抑制与中和试验的方法检测鼠源CPV基因工程抗体生物活性;采用HEK-293F细胞悬浮表达并用间接ELISA方法检测鼠源CPV基因工程抗体的表达量;用Protein A亲和层析柱纯化鼠源CPV基因工程抗体后进行SDS-PAGE鉴定;间接免疫荧光检测纯化后鼠源CPV基因工程抗体的活性。结果显示,CPV单克隆抗体亚型为IgG_(2b),亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10~(11) L/mol,只与CPV VLPs发生反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示,试验成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H;HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液血抑效价分别为1∶2~4和1∶2~6,中和试验结果显示,HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液中和效价分别为1∶152和1∶1 290;鼠源CPV基因工程抗体在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L,SDS-PAGE分析在55和25 ku处出现条带,表明鼠源CPV基因工程抗体成功在HEK-293F细胞中表达并纯化。间接免疫荧光检测结果表明,纯化后鼠源CPV基因工程抗体具有良好的生物活性。本研究在HEK-293F细胞中成功表达具有中和活性、纯度较高的鼠源CPV基因工程抗体,为今后CPV基因工程抗体药物的研发奠定基础。     

Sec62/Sec63复合物对乙型脑炎病毒在HEK-293细胞中复制影响的研究

Sec62/Sec63是位于内质网膜上的跨膜蛋白复合物,辅助新合成的前体蛋白或新生多肽链转运至内质网,进行后期的折叠加工。为研究Sec62/Sec63复合物对乙型脑炎病毒(JEV)复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术分别构建SEC62、SEC63基因敲除的HEK-293细胞系,经测序鉴定以及western blot检测,获得两个基因敲除细胞系,分别命名为SEC62 KO HEK-293细胞和SEC63 KO HEK-293细胞。分别以MOI为1、0.05的JEV感染HEK-293、SEC62 KO HEK-293、SEC63 KO HEK-293细胞后,利用间接免疫荧光试验检测Sec62/Sec63复合物对JEV复制的影响。结果显示,不同剂量JEV感染SEC62 KO HEK-293细胞与SEC63 KO HEK-293细胞中荧光信号阳性细胞均少于HEK-293细胞对照组;以MOI为1的JEV感染HEK-293、SEC62 KO HEK-293、SEC63 KO HEK-293细胞后,经western blot检测,结果显示于感染后12 h、24 h和48 h,SEC62 KO HEK-293、SEC63 KO HEK-293细胞中均未检测出JEV E蛋白条带,而对照HEK-293细胞中JEV E蛋白的表达量逐渐增加。以MOI为1的JEV感染上述3种细胞后检测细胞培养液中病毒滴度,结果显示JEV感染12 h后SEC62 KO HEK-293、SEC63 KO HEK-293细胞与HEK-293细胞病毒滴度无差异(p0.05),而感染后24 h与48 h时,SEC62 KO HEK-293、SEC63 KO HEK-293细胞培养液中病毒滴度均显著低于HEK-293细胞对照组(p0.01)。以MOI为1、0.5、0.05的JEV感染上述3种细胞后检测48 h后细胞培养液中病毒滴度,结果显示SEC62 KO HEK-293、SEC63 KO HEK-293细胞培养液中病毒滴度均显著低于HEK-293细胞对照组(p0.001)。以上结果表明,SEC62、SEC63基因敲除后均抑制了JEV的复制,也表明Sec62、Sec63是影响JEV在细胞内复制的重要宿主因子。本研究为进一步探究Sec62、Sec63等宿主因子对JEV复制的影响机制提供了参考依据。     

一种犬细小病毒基因工程抗体的制备

本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒（canine parovirus，CPV）基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型；采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性；经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体的可变区序列，将可变区序列与鼠源抗体恒定区序列连接；分别构建真核表达载体pcDNA3.1（+）-L和pcDNA3.1（+）-H，将载体共转染HEK-293细胞，采用血凝抑制与中和试验的方法检测鼠源CPV基因工程抗体生物活性；采用HEK-293F细胞悬浮表达并用间接ELISA方法检测鼠源CPV基因工程抗体的表达量；用Protein A亲和层析柱纯化鼠源CPV基因工程抗体后进行SDS-PAGE鉴定；间接免疫荧光检测纯化后鼠源CPV基因工程抗体的活性。结果显示，CPV单克隆抗体亚型为IgG_2b，亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10¹¹ L/mol，只与CPV VLPs发生反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示，试验成功构建真核表达载体pcDNA3.1（+）-L和pcDNA3.1（+）-H；HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液血抑效价分别为1∶2⁴和1∶2⁶，中和试验结果显示，HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液中和效价分别为1∶152和1∶1 290；鼠源CPV基因工程抗体在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L，SDS-PAGE分析在55和25 ku处出现条带，表明鼠源CPV基因工程抗体成功在HEK-293F细胞中表达并纯化。间接免疫荧光检测结果表明，纯化后鼠源CPV基因工程抗体具有良好的生物活性。本研究在HEK-293F细胞中成功表达具有中和活性、纯度较高的鼠源CPV基因工程抗体，为今后CPV基因工程抗体药物的研发奠定基础。     

牛奶中β-内酰胺类和四环素类抗生素检测方法

可同时快速检测牛奶中β-内酰胺类和四环素类试纸条产品,采用特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术,应用β-内酰胺类和四环素类抗生素抗体竞争结合β-内酰胺类和四环素类抗生素偶联物和样品中可能含有β-内酰胺类和/或四环素类抗生素的原理,具有体积小、易储存、携带方便、不需要仪器设备、操作简单、可现场检测且不需加热、可通过肉眼判断等优点.本文介绍了该产品的检测项目及检测限、操作步骤、与同类产品对比优势等.     

辽西地区猪源与人源链球菌耐药性及相关耐药基因同源性分析

采用微量稀释法进行11种兽用药及11种人用抗菌药的药物敏感性检测试验。结果表明:猪源和人源链球菌同时对8种兽用抗菌药和10种人用抗菌药物产生表观耐药性。针对分离菌株进行耐药基因检测,选取共同耐药率较高的3类抗菌药物的9种主要相关基因进行检测,发现猪源与人源链球菌携带共同耐药基因有6种,其中四环素类tet L基因的检出率高达92.39%,多黏菌素类mcr-1基因及大环内酯类erm B基因的检出率分别为79.35%和76.09%。对共同携带的耐药基因进行同源性分析表明,耐药基因tet L和erm B的同源性较高,均达到97%以上,其中tet L基因达到100%。研究结果提示猪场猪源和人源链球菌对多种常用兽用抗菌药及人用抗菌药物产生共同表观耐药性,而其部分相关耐药基因具有高度的同源性,这表明细菌耐药性及其耐药基因可在猪源与人源链球菌中传播。     

抗菌药物的应用及注意事项

<正>蛋鸡的养殖,无论是什么系统的疾病,包括呼吸道、消化道、生殖道等等都离不开药物的使用。目前国家对药物的使用控制越来越严,像沙星类的药物就有许多不允许使用。那么今后药物如何使用就成为我们养殖关注的焦点,养殖场药物的滥用如何规避也是重中之重。一、认识病原微生物从微观上看,细菌、支原体和病毒属于原核生物,寄生虫、真菌则属于真核生物。我们的药物也是针对细菌的组成而设计的。比如说青霉素和头孢菌素类药物主要是破坏细胞壁合成;沙星类药物主要是针对细菌的遗传物质;大环内酯类和四环     

几种抗生素治疗副猪嗜血杆菌病的效果观察

选取三株副猪嗜血杆菌,编号为HPS-1,HPS-2和HPS-3,分别对18种抗感染药物(阿莫西林等)进行药物敏感性测试,通过测定抑菌圈的直径判断药物对副猪嗜血杆菌是否敏感。结果显示,副猪嗜血杆菌对头孢菌素类抗生素最为敏感,大环内酯类、喹诺酮类、氨基糖苷类和四环素类,耐药现象比头孢菌素类严重。将HPS-3菌株静脉注射到仔猪体内,制造副猪嗜血杆菌感染模型,然后给药头孢噻呋钠、恩诺沙星、氧氟沙星和林可霉素。结果显示,头孢噻呋钠效果最好,林可霉素效果最差,四种药物的治疗效果与我们进行的药物敏感性测试结果一致,说明对致病菌进行药物敏感性分析有利于临床治疗药物的选择。     

畜禽粪便中抗生素残留检测样品的前处理技术及其分析方法研究进展

近年来,我国畜禽养殖业向规模化、集约化快速发展,大量的兽用抗生素被用于畜禽疾病的预防和控制,导致在畜禽粪便中残留抗生素的浓度很高,威胁着人类健康和生态环境。本文介绍了畜禽粪便中常见的残留抗生素,包括四环素类、磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类、多肽类、氨基糖苷类的结构以及作用机理,并对畜禽粪便样品的前处理技术及常用的分析检测方法进行了综述,为畜禽养殖粪便中抗生素残留的控制提供参考。     

畜禽支原体耐药性及耐药机制研究进展

支原体感染给畜禽养殖造成的危害已受到国内外科研人员的广泛重视。目前控制畜禽支原体感染、降低畜禽养殖经济损失的切实有效方法是大量使用抗生素,其中四环素、大环内酯类及喹诺酮类药物是现阶段临床兽医首选的3类抗菌药。但短短几十年的临床实践表明,滥用抗生素已经严重威胁畜禽健康,许多畜禽支原体临床分离株不仅仅对单一抗生素产生耐药性,而且同时对多种抗生素耐药。作者从药物靶位点改变、外排泵系统形成、抗菌药物灭活酶产生等方面对上述抗畜禽支原体药物的耐药机制进行阐述,以期为建立支原体耐药性检测体系、指导临床合理用药、开发新的药物等提供理论依据和策略。     

猪肺炎支原体体外抗菌药物敏感性试验研究

为了解猪肺炎支原体对抗菌药物的敏感性,采用宏量肉汤稀释法对4株猪肺炎支原体的最小抑菌浓度（MIC）值进行了测定。结果表明,猪肺炎支原体对泰妙菌素和环丙沙星最为敏感,MIC≤0．03μg／mL,其次分别为四环素类药物（包括四环素和多西环素）、林可霉素和泰乐菌素,而对氟苯尼考的敏感性则较差。本研究可为猪支原体肺炎的防控以及抗菌药物的合理使用提供参考。     

超高液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查与确证猪粪中二十三种喹诺酮类和四环素类药物

为了快速筛查与确证喹诺酮类及四环素类药物,及时掌握畜禽养殖过程中抗菌药物的使用情况,本研究建立了利用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查与确证猪粪中23种常见喹诺酮类及四环素类抗菌药物的方法.建立了目标药物的质谱数据库,优化了猪粪中23种常见抗菌药物喹诺酮类和四环素类药物的前处理过程.23种目标药物在...     

英国畜禽微生物抗药性检测的最新结果

Animal Pharm 报道英国二月中旬公布了畜禽微生物抗药性调查结果。从屠宰场的牛、羊和猪分离出的大肠杆菌O157、沙门氏菌、弯曲杆菌和耶尔森氏菌的研究情况：从猪分离出的大肠杆菌中发现对四环素类有高耐药性，分离出的肠球菌和弯曲杆菌中对四环素类和大环内酯类有高耐药性，大     

鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌的耐药表型及耐药基因检测

为了检测鲫鱼费氏柠檬酸杆菌的耐药表型及耐药基因,试验采用标准Kirby-Bauer纸片扩散法检测鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌对13种抗生素的耐药表型,并用PCR法检测弗氏柠檬酸杆菌对四环素类和磺胺类抗生素的6种耐药基因(tetA、tetC、tetM、Sul1、Sul2和Sul3)。结果表明:鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌对四环素、氨苄西林、强力霉素、红霉素、头孢拉定和阿莫西林耐药;仅检测出四环素类的tetA和tetM基因,而其他未检测出。     

鸡滑液囊支原体对常用抗菌药的耐药性研究

为研究常用抗菌药对滑液囊支原体的敏感性及耐药基因的流行分布,试验使用微量肉汤微稀释法确定了截短侧耳素类、大环内酯类、氟喹诺酮类药物对21株鸡滑液囊支原体临床分离株的最小抑菌浓度,并且对相关耐药基因进行探讨.结果显示:1株分离株对截短侧耳素类抗生素耐药(4.76％),7株对泰乐菌素耐药(33.3％),5株对替米考星耐药(...     

ROSA法快速检测UHT奶中的四环素类和β-内酰胺类药物残留

主要探讨应用ROSA法同时快速检测UHT奶中的四环素类和β-内酰胺类药物残留。评价了ROSA法的灵敏度和特异性,验证了ROSA法的检测稳定性,10 min可出检测结果。     

猪气喘病的中西医疗法

猪气喘病,又称猪地方流行性肺炎或猪支原体肺炎。是猪的一种高度接触性慢性呼吸道传染病,广泛分布于世界各地。其主要症状是咳嗽和气喘,生长发育缓慢,病变特征是融合性支气管肺炎,肺尖叶、心叶、中间叶和膈叶前缘呈"肉样"或"虾肉样"实变。如有继发性病原体感染,可造成大批死亡,猪肺炎支原体,对外界抵抗力不强,常用化学消毒剂即可杀灭。猪肺炎支原体对青霉素及磺胺类药物不敏感,对四环素类、泰妙菌素、泰莫灵敏感。     

猪气喘病的中西医疗法

猪气喘病,又称猪地方流行性肺炎或猪支原体肺炎。是猪的一种高度接触性慢性呼吸道传染病,广泛分布于世界各地。其主要症状是咳嗽和气喘,生长发育缓慢,病变特征是融合性支气管肺炎,肺尖叶、心叶、中间叶和膈叶前缘呈“肉样”或“虾肉样”实变。如有继发性病原体感染,可造成大批死亡,猪肺炎支原体,对外界抵抗力不强,常用化学消毒剂即可杀灭。猪肺炎支原体对青霉素及磺胺类药物不敏感,对四环素类、泰妙菌素、泰莫灵敏感。