激素对卵母细胞体外成熟的影响

激素对卵母细胞体外成熟的影响赵伟黄夺先（江苏省农科院牧医所２１００１４）近年来,随着商业化胚胎移植的发展,卵母细胞体外成熟和体外受精作为胚胎来源的主要途径已受到关注,而直接影响胚胎数量和质量的卵母细胞体外成熟显得尤为重要。影响卵母细胞体外成熟的因素很...     

乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

【目的】研究乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,为研究体内乙草胺对卵母细胞质量的影响提供参考。【方法】将收集的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)置于含有不同浓度(0(对照组)、10、50、100、130、200μmol/L)乙草胺的体外成熟培养液中培养14 h,统计卵母细胞第一极体排出率,进行体外受精后,统计体外受精胚胎的囊胚率,筛选出适宜于卵母细胞体外培养的乙草胺浓度。将COCs在对照组和筛选出的适宜浓度的乙草胺组成熟培养液中培养14 h后,利用DCFH-DA检测卵母细胞活性氧(ROS)水平;利用CellTracker^TM蓝色染料检测卵母细胞谷胱甘肽(GSH)水平;利用JC-1染色法检测卵母细胞线粒体膜电位水平(mitochondrial membrane potential, MMP);利用实时荧光定量PCR检测卵母细胞内凋亡相关基因的表达水平,利用Hoechst 33342染色检测体外受精胚胎的囊胚细胞总数,用Fluorescein-dUTP染色法检测囊胚细胞凋亡率。【结果】与对照组相比,100、130、20...     

生殖激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

母羊体内生殖激素在不同季节的分泌水平是不同的，这就说明在不同季节，需要不同的生殖激素浓度刺激，才能使卵母细胞体外成熟效果达到最佳。由于本试验是在夏季绵羊乏情季节进行，所以通过对比FSH、LH和雌激素不同浓度对绵羊卵母细胞的体外成熟影响，期望优化出适合晋中绵羊夏季乏情季节体外成熟培养所需的生殖激素的添加方案，完善乏情季节晋中绵羊卵母细胞体外成熟的体系。     

生殖激素对哺乳动物卵母细胞体外成熟的影响

生殖激素是卵母细胞成熟培养液中必不可少的成分,它对卵母细胞的完全成熟至关重要。本文综述了其化学特性和对卵母细胞成 熟培养的影响,并对其作用机理进行了简单阐述。     

生殖激素对哺乳动物卵母细胞体外成熟的影响

生殖激素是卵母细胞成熟培养液中必不可少的成分，它对卵母细胞的完全成熟至关重要。本文综述了其化学特性和对卵母细胞成熟培养的影响，并对其作用机理进行了简单阐述。     

不同激素对牛卵母细胞体外成熟的影响

对比了促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)和17β雌二醇(17β-E2)在相同浓度条件下,分别使用时对牛卵母细胞体外成熟的促进能力。结果表明:这3种激素单独使用时,都具有促进牛卵母细胞体外成熟的能力,但在实验设定的同一浓度下,FSH组牛卵母细胞体外成熟率最高,LH次之,17β-E2最差。     

罗格列酮对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究体外培养中添加罗格列酮(Rosiglitazone, RSG)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。收集4～6周龄雌性小鼠卵母细胞,随机分为对照组和20μmol/L RSG组。在饱和湿度,38.5℃、5%CO₂培养12 h,统计卵母细胞第一极体排出率。使用DCFH-DA检测卵母细胞内活性氧(ROS);采用CMF2HC检测卵母细胞内谷胱甘肽(GSH)水平;采用JC-1检测卵母细胞内线粒体膜电位;采用实时荧光定量PCR测定抗氧化相关基因的表达水平。结果显示,RSG组卵母细胞第一极体排出率相较于对照组显著提高(P<0.05);与对照组相比,RSG组ROS水平明显降低,GSH和线粒体膜电位水平显著升高(P<0.05)。本研究还发现,RSG组卵母细胞中抗氧化相关基因GPX-3、CAT和SOD-2的mRNA转录水平均显著提高(P<0.05)。结果表明,在体外成熟过程中添加RSG可以提高小鼠卵母细胞成熟率,降低细胞内ROS堆积,提高细胞内GSH水平、卵母细胞线粒体功能和抗氧化基因表达水平,缓解氧化应激造成的损伤,提高卵母细胞体外成熟质量。     

黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

氧化应激是阻碍胚胎体外发育的重要因素之一,减少氧化应激可能是提高胚胎体外培养效果的途径。本文探讨了不同浓度黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,为体外抗氧化性研究及抗氧化物选择提供参考。试验选择4～6周龄雌性昆明小鼠获取GV期卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的黄芩苷,经37℃、5%CO₂、饱和湿度培养条件体外成熟12 h,统计卵母细胞第一极体排出率,检测卵母细胞胞质内活性氧(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC),并采集8～10周龄雄性昆明小鼠精液,进行体外受精(IVF),分别于受精后6、24、96 h统计受精率、卵裂率和囊胚率。结果表明：体外成熟液中添加40、60μmol/L黄芩苷后,卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),且浓度为40μmol/L极体排出率显著高于60μmol/L,但对成熟后的卵母细胞体外受精率、卵裂率、囊胚率无显著性影响(P>0.05),卵母细胞胞质RO...     

黄芪多糖对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

采集未成熟小鼠卵母细胞添加不同浓度的黄芪多糖(APS)进行体外成熟(IVM)培养,统计卵母细胞生发泡破裂(GVBD)发生率以及第一极体(first polarbody,PB1)排出率,并通过卵母细胞JC-1染色方法进行线粒体膜电位检测;进一步在卵母细胞培养液中添加丙酮醛(MG)与黄芪多糖共培养,统计GVBD发生率及PB1排出率,检测活性氧(ROS)产生情况,探讨黄芪多糖在小鼠卵母细胞体外培养及体外成熟中的作用。结果显示,黄芪多糖对小鼠卵母细胞体外成熟,包括GVBD发生率和PB1排出率无显著影响。添加丙酮醛与黄芪多糖共培养结果显示,10mg/mL+APS+MG试验组PB1排出率显著降低,相应的卵母细胞ROS产生量显著升高,但对GVBD发生率则无显著影响。     

激素和血清对牛卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞的体外成熟直接关系到体外受精胚胎的数量和质量,从而影响到胚胎移植的成功率。本文就促性腺激素、类固醇激素和血清对牛卵母细胞体外成熟的影响,进行了较为详尽的阐述。     

激素及生长因子对牛卵母细胞体外成熟的影响

在卵母细胞体外成熟液(含FSH)中分别添加10, 30, 50ng/mL表皮生长因子(EGF),24h检查其成熟率.结果表明:添加 EGF50ng/mL时牛卵母细胞第一极体排出率显著提高,达85.4%(P＜0.01);同时发现在含FSH和EGF的成熟液中添加HMG(尿促性素)并不能提高牛卵母细胞体外成熟效果(P>0.05);同时还发现单独添加HMG成熟效果显著好于FSH(P＜0.05).     

促性腺激素对山羊卵母细胞体外成熟的影响

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,本试验研究了在成熟培养液中添加不同浓度的促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体素(luteinizing hormone,LH),不同来源的FSH+LH对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响。结果表明,采用TCM199添加10%FCS,1～2mg/L17β-E2,10mmol/LHepes,0.055mg/mL丙酮酸钠,2.2mg/mL NaHCO3,500μg/mL链霉素,500μg/mL青霉素,10mg/L FSH及20mg/LLH的培养体系,有利于山羊卵母细胞的体外成熟;进口的和国产FSH和LH对山羊卵母细胞成熟有相同促进效果。     

藏红花素对小鼠卵母细胞体外成熟能力的影响

试验旨在探讨藏红花素（crocin）的抗氧化应激作用对小鼠卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。在体外成熟（IVM）培养液中添加不同浓度藏红花素（0、5、10、15、20、25、30 μmol/L）,小鼠卵母细胞在体外成熟培养12 h后,检测卵母细胞第一极排出情况、卵母细胞胞质内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量,并进行体外受精（IVF）;体外受精后6 h统计受精率,24 h统计卵裂率,96 h统计囊胚率。结果显示,与对照组相比,10、15 μmol/L藏红花素显著提高了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）;当藏红花素浓度继续增加时,卵母细胞的第一极体排出率下降,30 μmol/L藏红花素显著降低了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）;5、10、15 μmol/L藏红花素均显著降低了卵母细胞ROS含量（P<0.05）,10、15 μmol/L藏红花素均显著提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）。与对照组相比,10 μmol/L藏红花素组受精率、卵裂率、囊胚率差异均不显著（P>0.05）,15、20、25、30 μmol/L藏红花素均显著降低受精率和囊胚率（P<0.05）,对卵裂率影响不显著（P>0.05）。结果表明,在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加10 μmol/L藏红花素可以显著增加第一极体排出率,显著降低卵母细胞ROS含量、提高卵母细胞GSH含量,但对受精后的胚胎发育无显著影响。     

几种激素对Beagle犬卵母细胞体外成熟的影响

由于犬独特的生殖生理,其卵母细胞体外成熟率远远低于其它动物。本实验旨在探讨几种激素对犬卵母细胞体外成熟的影响。将采集的犬卵丘-卵母细胞复合体置于添加不同浓度激素成熟培养液中,对照(CK)组不添加激素,A、B、C组分别添加FSH+P4+E2量为:0.5IU/mL+2.5μg/mL+2.5μg/mL、1 IU/mL+5μg/mL+5μg/mL、2 IU/mL+10μg/mL+10μg/mL。通过72 h体外成熟培养后核染色观察成熟率。结果显示,各种组卵母细胞发育至GV、GVBD、MI-MII的比率差异不显著,其中以B组达到MI-MII比率最高(18.63%)。本试验表明,添加此几种浓度激素对犬卵母细胞体成熟培养没有显著促进作用,需继续探讨犬卵母细胞体外成熟培养体系。     

LIF对小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的影响

卵母细胞的体外成熟、体外受精(IVM/IVF)技术广泛应用于发育生物学的研究, 如受精后早期胚胎的营养积累、早期基因表达调控、减数分裂能力的获得等, 也可以用于畜牧生产中优良种群的扩群.影响卵母细胞体外成熟与卵裂的因素众多,卵母细胞的体外成熟率通常为40%～80%,优化培养条件是提高体外培养卵母细胞成熟与卵裂的关键,大量的研究是通过在培养液中添加细胞因子来促进卵母细胞成熟与卵裂[1].本文通过不同浓度LIF对小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的观察,对其体外成熟率、体外受精率进行比较, 从而为提高哺乳动物卵母细胞的体外成熟、体外受精效果提供参考依据.     

细胞因子与激素对山羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

本试验研究了在培养液中添加不同浓度的GDNF、LIF、SCF及其不同组合对山羊卵母细胞体外成熟与卵裂的影响。结果表明:GDNF、LIF、SCF对山羊卵母细胞体外成熟有极显著影响(P<0.01),不同浓度间无显著影响(P>0.05),添加LIF卵母细胞体外成熟率极显著高于GDNF、SCF(P<0.01),添加GDNF、LIF对卵裂率有显著影响(P<0.05),添加SCF对卵裂率无影响(P>0.05);GDN+LIF+SCF组和GD-NF+LIF组卵母细胞成熟率极显著高于LIF+SCF和GDNF+SCF组(P<0.01),添加GDNF+SCF和LIF+SCF对卵母细胞体外成熟率无显著差异,可见,LIF和GDNF对山羊卵母细胞体外成熟有协同作用。胚胎的早期发育上GDNF+LIF+SCF组优于GDNF+LIF组优于LIF+SCF也优于GDNF+SCF,均能显著提高卵裂率。     

激素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为研究不同激素及其组合在猪卵母细胞体外成熟及对其后孤雌胚胎发育的影响,我们对比了孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛膜促性腺激素(hCG)组合、卵泡刺激素(FSH)与促黄体素(LH)组合、雌二醇(E2)及这些卵母细胞经孤雌激活后囊胚率的影响;以及不同FSH和LH浓度组合对猪卵母细胞体外成熟率。结果表明,在卵母细胞体外成熟液中添加10 U/mL PMSG和10 U/mL hCG的成熟率和孤雌囊胚率都达到最高(85.9%和55.3%);FSH与LH的组合次之,分别为77.1%和53.5%;E2最差,成熟率仅为54.0%囊胚率为19.5%。而在FSH与LH不同浓度配比中以10 U/mL FSH和20 U/mL LH时,猪卵母细胞成熟率最高达到80.9%。     

EGCG对小鼠卵母细胞成熟的影响

随着医学的发展,卵母细胞的成熟培养成为热点.如何提高卵母细胞的成熟率是一个亟待解决的问题.在体外培养时,不可避免地会接触比体内更多的氧,产生的氧自由基就会对卵母细胞的成熟产生抑制作用.     

EGCG用于小鼠卵母细胞体外成熟的试验

目前体外成熟（IVM）的成熟率、成熟后卵母细胞的受精率各研究报道差异很大，成熟率低的仅30％，高的可达86％；受精率低的有20％，而高的甚至达到80％。目前对卵母细胞成熟的体内环境的成分并不完全清楚，体外培养并不能完全模仿体内环境，所以也没有统一标准的培养系统和培养模式。     

萝卜硫素对体外成熟小鼠卵母细胞谷胱甘肽合成相关基因表达的影响

本研究通过比较体内外成熟卵母细胞中谷胱甘肽(GSH)合成相关基因(Gclc、Gclm、Gss)的表达差异,并尝试利用萝卜硫素(Sulforaphane,SFN)来提高卵母细胞中GSH的合成。利用3周龄小鼠卵母细胞进行体外成熟,结果表明:在自然成熟的卵母细胞中,Gclc、Gclm在MⅡ期附近表达较高,而卵丘细胞在MⅠ期表达较高;Gclc、Gclm在体外成熟MⅠ、MⅡ期卵母细胞中的表达均显著低于体内水平(P0.05),而在体外成熟卵丘细胞中仅MⅠ期表达水平低于体内;Gss表达水平没有显著变化。此后尝试分别添加1、5、10、20μmol/L的SFN来改善体外卵母细胞中GSH含量,结果表明添加10μmol/L SFN可以显著提高GSH合成相关基因的m RNA水平(P0.05),最终提高体外卵母细胞中谷胱甘肽含量,以达到优化体外成熟体系的目的。