乌骨鸡黑色素细胞体外原代培养及鉴定

旨在建立乌骨鸡黑色素细胞体外培养和鉴定的方法,为研究黑色素细胞功能提供理想的生物材料。本研究选取乌骨鸡腹膜组织,采用DispaseⅡ和胰酶-EDTA混合消化法,经严格控制不同培养阶段的消化时间,对黑色素细胞进行纯化和传代,获取了乌骨鸡黑色素细胞。通过观察各个培养阶段的细胞形态和细胞生长曲线,表明在专用培养基条件下,细胞增殖良好。根据细胞形态特征、电镜下的亚细胞结构、黑色素合成相关基因的表达分析、DOPA染色和细胞免疫化学染色鉴定,表明所获得的细胞符合黑色素细胞特征。细胞经传代后培养至第10代,仍保持了正常的生物学特性,说明所建立的培养体系可以实现乌骨鸡黑色素细胞体外原代培养。综上表明,本研究成功建立了乌骨鸡黑色素细胞体外分离培养体系。     

猪骨骼肌原代细胞培养方法的优化

猪骨骼肌细胞的原代培养在研究猪骨骼肌的发育和调控机制中发挥重要的作用。试验通过对不同的胰酶消化时间(10min,30min,60min)、离心转速(800r/min,1 000r/min,1 500r/min)以及首次换液时间(24h,36h,48h)分别进行比较和分析,培养适宜时间后观察细胞的形态、个数及贴壁成活率,筛选最佳的培养体系。试验结果显示在37℃下浓度为0.25%的胰酶消化30min,1 000r/min下离心5min,37℃恒温培养箱培养36h后对细胞进行首次换液,细胞贴壁状态和成活率最佳。研究结果为猪原代骨骼肌细胞的培养筛选了最佳的培养体系,并为猪骨骼肌生长发育机制的相关研究提供重要工具。     

不同血清浓度对小鼠骨髓巨噬细胞原代培养的影响

为了探讨在相同试验条件下,培养基中不同血清浓度对小鼠骨髓巨噬细胞原代培养增殖分化的影响,不同培养时间(3 d、6 d、9 d)条件下,对不同血清浓度(5%、10%、20%、40%)培养基培养的细胞进行细胞形态学、增殖生长曲线的对比研究。结果表明:不同血清浓度的培养基对小鼠骨髓巨噬细胞的生长曲线和细胞学形态均有影响。说明10%、20%血清浓度的培养基中细胞形态完整、折光性高,存活率相对较高且稳定,细胞增殖明显,且数量较多,但20%血清浓度组中细胞增殖更明显,是其中最适宜的原代培养骨髓巨噬细胞的血清浓度。     

乌骨鸡皮肤黑色素细胞的原代培养及鉴定

为探讨获得大量高纯度乌骨鸡黑色素细胞不同方法的优劣,以及进一步研究乌骨鸡黑色素细胞生物特性及其黑色素的生物合成,以1周龄乌骨鸡雏鸡腹侧皮肤作为黑色素细胞来源,采用胰蛋白酶、中性蛋白酶和胶原酶Ⅰ消化进行细胞产量和贴壁效率评估,杂细胞用十四烷酰佛波醇乙酸酯(TPA)选择性消除,最后细胞长期培养在添加胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子、TPA和实验室自制活性肽的DMEM基础培养基中。利用多巴染色法、透射电镜对获得细胞的性质进行鉴定。结果显示,胶原酶Ⅰ较中性蛋白酶和胰蛋白酶消化分离获得的黑色素细胞具有更高细胞产量和细胞活力,原代培养5d后,达到融合,未见角质形成细胞和成纤维细胞污染。因此,采用胶原酶Ⅰ消化并使用添加多种刺激因子的培养基,可建立乌骨鸡黑色素细胞的有限细胞系。     

小鼠小肠上皮细胞的分离培养研究

通过组织块培养法进行胎鼠原代细胞培养,采用刮除法和相差消化及相差贴壁法对细胞进行纯化,用0.05%的胰蛋白酶进行消化传代对小鼠小肠上皮细胞进行了原代分离培养、传代、纯化及鉴定。结果表明:组织块培养法得到了小鼠生长状况良好的细胞,经过纯化,得到了较纯的小肠上皮细胞;形态学观察和免疫组化检测显示得到的细胞为小鼠上皮细胞。用组织块培养可以分离纯化出增殖能力较强的上皮细胞,并能进行传代纯化,通过免疫组化鉴定,证明分离出的小鼠IEC为阳性,即为小肠上皮细胞。     

小鼠脾细胞的原代培养方法改良

为了确定较好的小鼠脾细胞分离培养方法,在不同培养时间(培养当天、第3天、第6天、第9天)条件下,分别采用改良胰酶消化法、组织块直接培养法和机械分离培养法培养小鼠脾细胞,试验进行细胞形态学、增殖生长曲线和细胞活力曲线对比研究。结果表明:不同培养方法对小鼠脾细胞的细胞学形态和细胞活力均有影响。改良胰酶消化法培养的细胞其细胞活力比组织块直接培养法和机械分离培养法培养的细胞活力好,而在细胞形态学的比较中,改良胰酶消化法培养的原代小鼠脾细胞与其他两组相比,培养情况最好,数量较多,形态完整,贴壁较好。证明改良胰酶消化培养法能够较好地培养小鼠脾细胞,进一步完善了小鼠脾细胞原代培养的方法。     

鸡胚成纤维细胞原代培养与纯化的初探

本文利用鸡胚成纤维细胞(CEF)进行原代培养与纯化,了解鸡胚成纤维细胞在一定生理状态下所需的各种条件,从而控制培养基的成分,选择最适合于鸡胚成纤维细胞生长的各种因素。在此实验中消化液的浓度及消化的时间是关键,此外实验过程的无菌也是保证实验成功的重要因素。     

小鼠小肠上皮细胞的分离培养研究

通过组织块培养法进行胎鼠原代细胞培养,采用刮除法和相差消化及相差贴壁法对细胞进行纯化,用0.05%的胰蛋白酶进行消化传代对小鼠小肠上皮细胞进行了原代分离培养、传代、纯化及鉴定.结果表明:组织块培养法得到了小鼠生长状况良好的细胞,经过纯化,得到了较纯的小肠上皮细胞;形态学观察和免疫组化检测显示得到的细胞为小鼠上皮细胞.用组织块培养可以分离纯化出增殖能力较强的上皮细胞,并能进行传代纯化,通过免疫组化鉴定,证明分离出的小鼠EEC为阳性,即为小肠上皮细胞.     

鹿茸干细胞体外培养技术的研究

利用消化酶消化法,用DMEM培养基对鹿茸干细胞进行了体外培养,分别从原代培养、传代、冻存、以及复苏等几个环节进行了试验。摸索鹿茸干细胞合适的体外培养条件,为鹿茸的各项相关研究打基础。结果表明,用透明质酸酶和胶原酶对组织样进行消化,然后用10%DMEM培养基进行培养细胞生长效果较好。适宜培养条件是37℃、5%CO2最大饱和湿度。     

绵羊上皮细胞三种纯化与培养方法的比较研究

为了探索一种简便、高纯度分离子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的方法,以及建立高纯度体外子宫内膜细胞培养模型,该试验将原代细胞的3种培养方法,即组织块贴壁法、胰蛋白酶消化法和胶原蛋白酶消化法进行比较,结果表明胶原蛋白酶消化法对细胞的损伤小,细胞生长良好,相比较而言使用胶原蛋白酶消化法最理想。     

柞蚕蛹卵巢原代细胞培养方法及培养基的选择试验

采用机械分散法和胰酶消化法,分别选取MGM-448、Grace、TC-100等3种培养基进行柞蚕蛹卵巢组织细胞的体外培养。在2个月的原代细胞培养期间,机械分散法获得的培养物在MGM-448培养基中贴壁效果好,细胞健康且生长旺盛;而在Grace和TC-100培养基中,细胞虽能贴壁,但生长较缓慢。胰酶消化法分散细胞的效果好,但在3种培养基中的细胞会出现轻微损伤而影响活力。综上认为,柞蚕蛹卵巢原代细胞的最佳培养方法为机械分散法,最佳培养基为MGM-448。     

凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞培养体系的优化

试验目的是为研究优化凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞的培养体系。试验基于MTT法,分析不同培养条件(包括培养基类型、p H值、渗透压、FBS添加量等因素)对凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞培养体系的影响。结果表明:在p H值为7.6,Na Cl添加量为1.2%,FBS添加量为5%的2×L-15培养基中,凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞生长状况最好。因此,通过改变培养条件,可以适当优化凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞的培养体系,但未能获得良好的传代细胞。     

青海湖裸鲤体外心肌细胞原代与传代培养的研究

为了弥补青海湖裸鲤心肌组织细胞离体培养研究的空白,采用组织块移植培养技术, 分别用DMEM培养基和RPMI 1640培养基对青海湖裸鲤心肌组织进行原代培养.培养48 h可见组织块周围有细胞迁出,并形成生长晕;培养1周可见有单层细胞长成.原代培养的单层细胞用胰蛋白酶-EDTA消化后传代培养至第4代.初步确立青海湖裸鲤心肌细胞培养条件为:培养基RPMI 1640,培养温度27 ℃, pH值7.0～7.5,原代培养血清浓度为20%,传代培养血清浓度为10%,无需通入CO2.     

不同血清浓度对乳鼠心肌细胞原代培养的影响

为了研究不同血清浓度对乳鼠心肌细胞原代培养的影响,在不同培养时间(3 d、5 d、7 d、9 d),对不同血清浓度(5%、10%、20%、40%)的培养基培养的试验细胞进行细胞形态学、增殖生长曲线的对比研究。结果表明:不同血清浓度的培养基对小鼠骨髓巨噬细胞的生长曲线和细胞学形态均有影响,其中10%血清浓度组、20%血清浓度组的乳鼠心肌细胞与其他2组细胞相比培养情况最好,形态完整,折光性好,存活率相对较高且稳定,细胞增殖明显,差异不显著(P0.05),表明最佳血清浓度为10%、20%。     

不同血清浓度对小鼠肺细胞原代培养的影响

为了比较不同血清浓度的培养基对小鼠肺细胞原代培养的影响,在常规RPMI 1640培养基的基础上添加不同浓度的新生牛血清(5%、10%、20%、40%),每隔1 d在倒置显微镜下观察培养细胞的形态并用台盼蓝染色法统计细胞数目,绘制生长曲线。结果表明:4个血清浓度组中均有原代肺细胞生长增殖,血清浓度为10%的培养液培养的细胞生长状况最好,细胞形态完整清晰,数量较多,更适合小鼠的肺细胞生长。说明10%血清浓度的培养液最适合小鼠肺细胞的原代培养。     

新生长白仔猪尾尖成纤维细胞的分离培养及其对猪瘟病毒的易感性分析

以出生2日龄的正常长白仔猪尾尖组织为材料,通过组织消化法培养获得原代尾尖成纤维细胞.并通过间接免疫荧光法,梯度10倍倍比稀释猪瘟病毒石门株(105.2 TCID50/mL)感染在猪尾尖成纤维细胞,确定尾尖成纤维细胞最佳病毒感染滴度.结果显示,运用组织块消化法能够获得生长状态的原代猪尾尖成纤维细胞,并且细胞对10-3稀释倍数的猪瘟病毒石门株具有适中的感染力.     

棘球蚴细胞系(株)的培育及其在免疫预防中的应用研究 Ⅰ.人源细粒棘球蚴细胞的培养

用外科方法从临床确诊的细粒棘球蚴病人肝脏取出包囊，以生发层为培养材料，采用ＲＰＭＩ１６４０、１９９、改良伊格水解乳蛋白培养基，用胶原蛋白包被和不包被两种培养瓶，对细粒棘球蚴生发层细胞进行初培养，并进行了对比观察。结果显示，以胶原蛋白作为支撑条件，应用改良伊格水解乳蛋白培养基培养生发层细胞的效果优于其他，并已传７代，原代培养时间需要２８～４５ｄ才能传代，３代以内细胞为多形态性。     

棘球蚴细胞系（株）的培育及其在免疫预防中的应用研究

用外科方法从临床确诊的细粒棘球棘球病人肝脏取出包囊、以生发层为培养材料，采用ＲＭＰＭＩ１６４０、１９９、改良伊格水解乳蛋白培养基，用胶原蛋白包被和不包被两种培养瓶，对细粒棘球蚴生发层细胞进行和初培养，并进行了对比观察，结果显示，以胶原蛋白作支撑条件，应用改良伊格水解乳蛋白培养基培养生发层细胞的效果优于其他，并已传７代，原代培养时间需要２８－４５ｄ才能传代，３代以内细胞为多形态性。     

小鼠 鸡卵巢颗粒细胞分离 培养方法的比较与优化

本试验通过分离与培养小鼠、鸡不同等级卵泡颗粒细胞,比较其培养和形态差异,并对提取方法进行优化。试验选取3周龄雌性昆明系小鼠,200日龄的海蓝褐蛋鸡,分别采用优化的方法分离培养卵巢颗粒细胞,通过观察细胞形态、H.E.染色和间接免疫荧光,对比不同种属颗粒细胞提取方法、培养条件及生长状态。结果表明,与采用机械法分离的小鼠卵巢颗粒细胞相比,采用酶消化法分离的鸡不同等级卵泡颗粒细胞贴壁较快、生长速度快、伪足较多。分析得出小鼠与鸡不同等级卵泡颗粒细胞的分离,培养条件均有差异,且对已有提取方法进行优化,所培养的颗粒细胞状态良好。     

培养基和换液时间对E.tenella子孢子在宿主细胞体外培养中发育的影响

探索培养基和换液时间对E.tenella子孢子在宿主细胞体外培养的影响,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型。本实验研究了不同换液时间和不同培养基对E.tenella子孢子在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养中发育情况的影响。结果表明:(1)在相同培养基下(MEM199培养基或RPMR1640),与3h换液相比,4h换液更适于E.tenella子孢子的入侵;4h换液后培养至24h(或48h),E.tenella子孢子发育更好。(2)相同培养时间下,与RPMR1640培养基相比MEM199培养基更适于E.tenella子孢子的发育。