基于微卫星分子标记的凡纳滨对虾商业苗种遗传多样性分析

为研究我国凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)商业苗种的遗传多样性特征,于河北、山东、广东、海南等地采集了6个有代表性的凡纳滨对虾品牌苗种,分别命名为黄骅R、东营M、广州P、广州Z、海南S和海南Z,以8个微卫星标记检测其遗传多样性。结果显示,6个品牌的凡纳滨对虾在8个位点呈现不同程度的多态性,其平均等位基因数(Na)、期望杂合度(He)、观测杂合度(Ho)和多态信息含量(PIC)分别为4.5~9.5、0.516~0.733、0.346~0.550和0.472~0.700,各品牌遗传多样性丰富程度从高到低分别为黄骅R>广州Z>广州P>海南Z>东营M>海南S。哈迪–温伯格平衡(HWE)检验显示,4.17% (2/48)的检测结果表现为显著的偏离(0.01相似文献   

凡纳滨对虾健康苗种生产技术操作规程

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)原产于美洲太平洋沿岸水域,70年代初在厄瓜多尔正式养殖。1992年8月人工繁殖获得了初步的成功,1994年通过人工育苗获得了小批量的虾苗。目前我国凡纳滨对虾人工育苗技术已经基本成熟,但目前的苗种市场不规范,已经进入低价格的恶性竞争状况,大量使用药物提高出苗率,其中幼体出苗率可达80%,单位水体出苗量可达30万尾/ m~3。这一现状在解决我国凡纳滨对虾苗种不足的同时,     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗WSSV选育家系的建立及其抗病特性

2002-2007年在人工感染白斑综合症病毒(white spot syndrome virus, WSSV)的基础上进行一代个体选育（G1）后,对凡纳滨对虾连续进行了4代家系选育,共建立120个抗WSSV家系,感染实验结果表明：G2~G5选育家系对虾平均成活率分别为5.57%±9.83%, 8.66%±11.52%, 9.52%±8.84% 和 13.79%±12.86%;G2~ G5选育家系对虾平均成活率的变异系数分别为1.77、1.40、0.97和0.87。根据每个家系对虾的成活情况可分为敏感、中等抗性和高抗性家系,G2至G5敏感家系在各代选育家系中的比例逐年下降,分别占76.5%、55.2%、51.4%和33.3%,抗病成活率分别为0.44%±1.09%、0.78%±1.70%、2.27%±2.76%和2.44%±3.09%,感染WSSV后2~3 d出现1个急性死亡高峰;中等抗病家系在各代选育家系中的比例逐年上升,分别占0、20.7%、31.1%和38.5%,抗病成活率分别为0、9.08%±1.46%、10.7%±1.41%和11.36%±3.30%,感染WSSV后出现2个死亡高峰,第1死亡高峰值大于第2高峰;高抗家系在各代选育家系中的比例逐年上升（G4除外）,分别占23.5%、24.1%、17.1%和28.2%,抗病成活率分别为22.23%±5.21%、22.7%±12.30%、24.45%±6.56%和28.98%±8.09%,感染WSSV后出现2个死亡高峰,第1死亡高峰至小于第2高峰。经连续的定向选育,选育对虾抗病性状一代比一代强,表现出明显的抗病性能,特别是高抗对虾不仅死亡率低且其死亡高峰推迟2～3d,延缓了对虾WSSV暴发的时间,但是每代每尾对虾平均产卵量逐年下降（P<0.05）。     

凡纳滨对虾健康苗种生产技术操作规程

前言： 凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）原产于美洲太平洋沿岸水域，上世纪70年代初厄瓜多尔正式养殖。1992年8月人工繁殖获得了初步的成功，1994年通过人工育苗获得了小批量的虾苗。目前我国凡纳滨对虾人工育苗技术已经基本成熟，但苗种市场很不规范，已经进入低价位的恶性竞争状态。大量使用药物提高出苗率，其中幼体出苗率可达80％，单位水体出苗率可达30万尾／m^3。这一现状在解决我国凡纳滨对虾苗种不足的同时，也导致苗种质量的严重下降。为了提高我国凡纳滨对虾的种质和苗种质量，我们对提高人工育苗质量的关键技术进行研究，建立了凡纳滨对虾规模化全人工繁育、连续传代和无特定病原（SPF）种苗繁育技术体系。     

高位池养殖过程凡纳滨对虾携带WSSV情况的动态变化

为了更好地预防对虾白斑综合征(WSS)的暴发,探讨该病毒病的流行规律,笔者针对养殖过程中对虾的携带WSSV情况展开调查。调查于2010年7月-2010年11月广东省汕尾市红海湾养殖场进行,从10口凡纳滨对虾高位养殖池中随机抽取6口进行跟踪采样。收集指标包括对虾生长状况、基本环境指标、浮游微藻种群结构和对虾病毒携带量等。本文重点报道利用实时定量PCR-TaqMan探针法检测6口精养池塘对虾体内WSSV的携带量变化情况,检测结果显示:①1-3号虾池苗种携带WSSV,其波动范围在1.3×103~1.7×104copy/g之间;②对虾在养殖过程中均带毒,鳃组织中的平均病毒携带量(2.3×109copy/g)多于肌肉组织中的平均病毒携带量(3.2×108copy/g),且变化趋势一致,但没有显著性差异(P>0.05);③在整个养殖过程中对虾WSSV携带量总体呈现波动上升的趋势,期间各池出现过数次高值。前期WSSV拷贝数的波动范围在1.3×103~3.0×107copy/g之间,后期上升到1.5×106~1.2×1011copy/g,使得某些池塘养殖对虾WSS暴发。调查结果说明:1)对虾携带WSSV可以进行养殖生长;2)WSSV在对虾体内的含量是变化的,且其变化存在着一定的规律性;3)这种变化规律主要体现在带毒量随着养殖时间的进行及外界水环境中某些主要因子的变化而变化,如:养殖时间越长,带毒量越高;养殖环境中某些关键环境因子的改变,如:温差较大,不良藻相转换,天气骤变等均可引起对虾体内病毒含量较大的波动。鉴此,作者提出,构建并维持良好的浮游微藻的群落结构,注意有害藻相改变时保持养殖水体环境稳定,对环境突变前后都做好应对对虾应激的措施等可以极大程度地减少WSS暴发的可能。本研究通过对WSSV的密切跟踪,旨在更好的反映其在养殖环境下的动态变化规律,以及受各种环境因子影响的情况,从而为预防对虾WSS提供依据和参考。     

凡纳滨对虾苗种培育关键技术

笔者近年来采用微生态制剂进行人工培苗，取得了较好的效果，虾苗质量也得到虾农的认可。现将近年来的育苗经验总结如下，与大家交流。     

放养密度对凡纳滨对虾苗种中间培育效果的影响

通过对养殖场凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)实际苗种中间培育进行实验(21 d),探究了放养密度(1.50～2.25万尾/m~3)对凡纳滨对虾的生长性能、养殖水体水质以及细菌群落的影响。结果显示,当放养密度为1.50～2.25万尾/m~3时,放养密度的增加会提高凡纳滨对虾的产率、特定生长率、存活率及饵料转化率。实验期间,各养殖池内水体的pH逐渐下降,氨氮(NH_4~+-N)和化学需氧量(COD)浓度均呈逐渐上升趋势,弧菌(Vibrio)浓度则在一定范围内[(0.3～7.5)×10~4 CFU/ml]波动。放养密度的增加会导致养殖水体pH下降,NH4+-N和COD浓度升高,但对水体中的弧菌浓度没有明显影响。实验末期,放养密度较高的养殖池具有较高的细菌生物多样性,变形菌门(Proteobacteria)(56.52%～71.22%)和拟杆菌门(Bacteroidetes)(20.65%～38.23%)为各养殖池内主要细菌门类,而且弧菌属(Vibrio)(2.3%～9.4%)在各养殖池内均为优势菌属。在凡纳滨对虾苗种中间培育过程中,逐日增加换水量对水体pH和COD浓度具有一定的调节能力,但难以控制NH4+-N和亚硝酸氮(NO_2~--N)浓度的升高。     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei Boone)健康苗种生产技术操作规程

凡纳滨对虾又称南美白对虾，为提高凡纳滨对虾人工育苗质量关键技术，建立了凡纳滨对虾规模化令人工繁育、连续传代和无特定病原繁育技术体系。     

复方中草药对凡纳滨对虾生长、消化酶和免疫因子活性及抗WSSV的影响

研究复方中草药(葛根、黄连、金银花、板蓝根、黄芪、甘草、柴胡、当归、山楂、陈皮和茯苓)对凡纳滨对虾生长、消化酶和免疫因子活性及抗WSSV的影响,为对虾健康养殖提供科学依据。分别在饲料中添加0%(对照组)、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%和2.0%该复方中草药,连续投喂凡纳滨对虾[体质量(0.026±0.007)g]28 d(每组3个重复,每个重复160尾),每隔1周随机采样10尾/桶测量体长、体质量,并取肝胰腺用于生长指标(WGR、SGR、FR和SR)、相关酶(淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、SOD、GPT和GOT)及MDA含量的测定。研究结果表明,复方中草药对凡纳滨对虾的生长均有提高,其中0.8%和1.2%添加组效果最佳,差异显著;且饵料系数显著下降。对虾肝胰腺消化酶(淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶)和免疫相关因子(SOD、GPT和GOT)随养殖时间的延长,高酶活性逐渐由高添加量组向低添加量组移动,其中以0.8%和1.2%添加组效果最佳,差异显著;与对照组相比,0.4%,0.8%和1.2%添加组MDA含量差异显著下降。对照组和0.4%添加组对虾经投喂感染WSSV后全部死亡,但0.4%添加组对虾第1尾死亡时间、50%死亡时间以及100%死亡时间分别比对照组延后8 h、16 h和8 h;0.8%添加组成活率最高(33.3%),与其他组差异显著。复方中草药能促进对虾生长、消化,提高免疫和抗WSSV能力,其中以添加0.8%和1.2%效果最佳。     

凡纳滨对虾RAS与WSSV-VP26的相互作用

白斑综合征病毒(WSSV)是对虾养殖中主要的病原之一,病原与宿主作用是介导病毒感染的重要过程。RAS蛋白是Ras基因分泌的保守蛋白,为小G蛋白家族的一员,普遍存在于从酵母菌到哺乳动物的真核细胞中,具有偶联受体和效应系统传递跨膜信号的功能,在细胞增殖和分化中起双重调节的作用,但关于RAS与WSSV的作用尚不明确。本研究将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) Ras基因克隆至pBAD/gⅢA表达载体上,以E. coli Top10为宿主菌,在L-阿拉伯糖的诱导下获得RAS重组蛋白。以Co~(2+)亲和层析方法,获得纯化的RAS蛋白,质谱分析显示,该蛋白为凡纳滨对虾RAS。采用Far-western和ELISA检测方法分析RAS与WSSV结构蛋白VP26、VP28N和VP37的相互作用。Far-western结果显示,RAS与VP26有明显的结合作用,ELISA实验结果显示,RAS与VP26蛋白的相互作用随RAS量的增加而增强。本研究表明,RAS参与WSSV侵染过程,为进一步研究WSSV侵染机制提供了理论基础。     

不同抑制剂对凡纳滨对虾多酚氧化酶活性的影响

分析了凡纳滨对虾不同部位多酚氧化酶(PPO)活力的差异,并研究了抗坏血酸、曲酸、4-己基间苯二酚、葡萄糖酸-δ-内酯、植酸等抑制剂对对虾多酚氧化酶活力的抑制作用。试验结果表明,对虾头胸部的PPO活力最高。其中,0.12 g/L曲酸、2 g/L 4-己基间苯二酚5、g/L植酸对对虾PPO活力均有较好的抑制作用,对对虾处理30 min,抑制率分别为38%、36%、51%。     

Performance of Larval and Postlarval Pacific White Shrimp,Litopenaeus vannamei (Boone), Fed Two Commercial Liquid Diet Supplements

Abstract

Two commercial liquid diet supplements were evaluated as a partial replacement for live foods fed to larval and postlarval Pacific white shrimp, Litopenaeus vannamei. Larvae were stocked in 20-L buckets at a density of 113 shrimp/L and fed one of four diets (5 replicate buckets per diet): (1) a control diet consisting of the diatom, Chaetoceros neogracile, and live Artemia; (2) the control diet plus Treflan (a fungicide); (3) LiquaLife liquid larval diet supplements with reduced concentrations of C. neogracile and Artemia; and (4) Epifeed liquid larval diet supplements with reduced concentrations of Artemia. Diets were evaluated by comparing shrimp rostro-caudal length and survival to PL-8, survival to osmotic and pH stress, as well as shrimp gut fullness, gut lipid content, and fouling. Rostro-caudal length and survival to PL-8 were not significantly different among the four treatments. However, mean survival to PL-8 was 12-34% greater in the Epifeed treatment than in the other three treatments. Shrimp fed Epifeed exhibited greater survival (P < 0.05) when exposed to 7 ppt water for two hours than shrimp in the control treatments. In contrast, there was no significant difference in survival (P > 0.05) among the four treatments when shrimp were exposed to apH of 3.35 for two hours. Although shrimp fed liquid diet supplements had more fouling (P < 0.05) than shrimp in either of the control treatments, commercial liquid diet supplements can be used in penaeid shrimp hatcheries to partially replace Artemia without compromising shrimp growth or survival.     

南美白对虾幼体和仔虾淀粉酶和脂肪酶活力的研究

以酶学分析方法测定了南美白对虾状幼体,糠虾和仔虾三个发育期淀粉酶和脂肪酶的活力。试验结果表明,糠虾期淀粉酶比活力显著高于状幼体和仔虾两期(P<0.05);脂肪酶比活力状幼体显著高于糠虾幼体(P<0.05)。在食性转化过程中,南美白对虾幼体消化酶活力与其食性相适应,不同发育阶段消化酶调节机制不同。     

南美白对虾高位池养殖模式最适放养密度的调查

2003年1～6月,对海南琼山、文昌、万宁和三亚地区的51口高位虾池进行了跟踪调查。结果表明:放养密度与养殖周期、产量和饵料系数成正相关,其相关系数分别为:0.897、0.91和0.864。放养密度和饵料系数是影响养殖成本的两个主要因素,其关系可用线性回归方程:S=7.04 0.421X 1.209C来表示。高位池最适放养密度为210～255万尾/hm2。     

Use of Porcine Meal in Plant‐based Practical Diets for Pacific White Shrimp,Litopenaeus vannamei

Two growth trials were conducted to evaluate and confirm the efficacy of a porcine meal (PM) with high protein content (>90%) as an alternative feed ingredient in commercial‐type feed formulation for Pacific white shrimp, Litopenaeus vannamei. Six experimental diets were formulated for the two growth trials. The first five diets contained increasing levels (0, 1, 2, 4, and 6%) of PM as a replacement for soybean meal in a plant‐based diet with low inclusion level (6%) of fish meal (FM). The last experimental diet was produced utilizing 4.2% PM to completely replace FM. In Trial 1, shrimp (1.5 g initial mean weight, 20 shrimp/tank, n = 4) were offered test diets for 6 wk in a semirecirculation system. At the end of Trial 1, shrimp fed with the diet containing 6% PM exhibited significantly enhanced weight gain (WG), feed conversion ratio (FCR), and survival compared to those fed with the diet devoid of FM. As survival was poor across all treatments and different densities could mask growth results the trial was repeated. In Trial 2, shrimp (0.85 g, 15 shrimp/tank, n = 4) were offered diets for 6 wk. Dietary supplementation of PM at 6% significantly improved WG, FCR, and apparent net protein retention in contrast with the treatment devoid of FM, confirming the same trends in Trial 1. No significant difference was detected in protein, lipid, moisture, and mineral profiles of whole‐body shrimp as well as survival across all the treatments. Results of this study indicate that PM is a good high protein source in shrimp feeds, which can be included up to 6% in the low FM‐based diet without compromising the growth of shrimp.     

凡纳滨对虾白便综合征的组织病理学观察

本文比较观察了不同规格的健康和患白便综合征凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肝胰腺、中肠、后肠、后盲囊等的组织结构。组织病理显示:白便综合征凡纳滨对虾肠道严重病变,肠腔空,环肌两侧增生大量成纤维细胞,这些增生细胞取代了肠上皮,而不见正常柱状上皮细胞;肝胰腺有不同程度和性质的病变,如腺管萎缩、崩解、坏死等。凡纳滨对虾患白便综合征的组织病变演变过程为:最初肠上皮基膜下出现一圈增生细胞,肠上皮柱状细胞脱离基膜;增生细胞持续增生增多,肠上皮崩解脱落至肠腔,增生细胞完全取代肠上皮;增生细胞不断增生,增生细胞层逐渐变厚,随着时间的推移,增生细胞层近腔端的一圈增生细胞坏死,出现一圈棕黄色物质,最终坏死细胞连同棕黄色物质脱落至肠腔。脱落至肠腔的腺管细胞、上皮细胞、增生细胞排出体外即为肉眼可见的白便。     

Effect of Diet Size on Feeding Behavior and Growth of Pacific White Shrimp,Litopenaeus vannamei

Abstract

Six diet sizes, manufactured from crumbling large pellets, were investigated for their effect on the feeding behavior and growth of Pacific white shrimp, Litopenaeus vannamei. These diets containing 44.7% protein and 8.2% lipid were fed to 0.9 g shrimp for a period of eight weeks under indoor controlled laboratory conditions. Shrimp were stocked at a density of 12 animals per 52 L aquarium (50/m²) and were evaluated for feeding behavior, final weight, growth rate, feed conversion ratio (FCR), and survival. Feeding behavior was observed weekly starting at the beginning of the 4th week until the end of the trial. Results indicated that the variation in diet sizes did not produce significant differences in shrimp growth, FCR or survival. However, shrimp feeding behavior (in terms of total attacking incidents during feeding) was significantly different among diet sizes. This shrimp behavior was observed more frequently in aquaria fed larger diet size (3.0 mm pellet) as compared with those fed smaller diet sizes (0.7 mm and 1.2 mm crumbles). When shrimp were fed larger pellets, some of the individuals obstruct other individuals and monopolize the diet. Such “selfish” behavior of shrimp could result in considerable size variation and severe mortality of smaller individuals, which could be the case when shrimp are reared to market size. The effect of diet size on shrimp feeding behavior deserves further investigation and the use of a continuous monitoring device such as a video camera is strongly recommended. Future study should also consider various shrimp and pellet sizes more meaningful to aquaculture producers.     

蜡样芽孢杆菌对凡纳滨对虾幼体变态的影响

研究了1株蜡样芽孢杆菌zou8对数期细胞对凡纳滨对虾无节幼体Ⅲ期到溞状幼体Ⅱ期幼体变态的影响;并通过zou8与弧菌的平板拮抗、共培养试验探讨其促进幼体变态的机制是否与拮抗病原弧菌有关。结果表明:高数量zou8细胞对凡纳滨对虾无节幼体Ⅲ期到溞状幼体Ⅱ期幼体的变态具有极显著(P<0.01)促进作用,尤其是多次加菌;zou8促进幼体变态作用的发挥并非通过产生拮抗物质直接抑制病原弧菌,而是通过其他可能机制。