欧洲黑杨转Bt毒蛋白基因植株大田抗虫性测定

近几年,基因工程发展很快,通过基因工程已获得了各种各样的转基因植物,如抗虫转基因农作物的棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）、水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）、马铃薯（ＳｏｌａｎｕｍｔｕｂｅｒｏｓｕｍＬ．）、玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）、小麦...     

转Bt基因欧洲黑杨抗虫稳定性及其对天敌昆虫的影响

1997-2001年,对新疆玛纳斯平原林场的转Bt基因欧洲黑杨试验林进行了食叶害虫(杨尺蠖)和杨梦尼夜蛾危害调查,转基因试验林叶片平均损失率均低于10%,试验林地虫口密度由1997年的18头·m-2降低到2001年的8头·m-2,而对照林地虫口密度却呈上升趋势. 2005年,位于北京怀柔的转Bt基因欧洲黑杨试验林受杨尺蠖危害,叶片损失率不超过20%,而当地其它杨树林叶片损失率高达90%.在转Bt基因欧洲黑杨林(新疆玛纳斯)中,寄生靶标害虫的天敌种类、数量和寄生率均高于对照林,对从试验林中采集的靶标昆虫的蛹进行接种试验,与对照相比,寄生蜂出蜂率和数量均无明显差异,寄生蜂也无异常,说明转Bt基因欧洲黑杨未对天敌昆虫产生明显不利影响.     

抗蛀干害虫的转Bt基因杨树对舞毒蛾的抗性研究

试验通过用丹红杨(♀)同转Cry1Ac基因杨树(♂)的两个杂交组合无性系PCR检测呈阳性的后代苗期叶片饲养舞毒蛾幼虫后结果发现:喂养的舞毒蛾幼虫死亡率高达98.7%,舞毒蛾幼虫的死亡主要集中在孵化后7d内,其中80%以上集中在前3天死亡;舞毒蛾幼虫取食苗期叶片后,可明显抑制食叶害虫舞毒蛾的个体的生长发育,个体大小明显小于对照。     

转双价抗蛀干害虫基因杨树的获得及其抗虫性鉴定

随着我国大规模人工林的发展,天牛等高危害蛀干森林害虫蔓延肆虐。目前,防治蛀干森林害虫主要采用人工机械防治和化学防治等。由于绝大多数蛀干害虫具有繁殖速度快、生活场所隐蔽、世代较长并不整齐等特点,防治难度较大,所以到目前为止,由蛀干森林害虫所导致的虫害并未得到根本的控制,并且呈逐年加重态势,对林业生产和生态环境建设影响严重。如在我国的华东、华北、东北、西北等地都有大片杨树(Populusspp.)、柳树(Salixspp.)被光肩星天牛(AnoplophoraglabripennisMotsch.)毁灭的报道。三北防护林工程,遭受天牛的危害严重,完全失去利用价…     

741杨双Bt基因的遗传转化及转基因株系的抗虫性

以含有Cry3Aa基因的重组质粒pBCC3为基础,利用PCR和DNA重组技术,从pBCC3中克隆出抗虫基因Cry3Aa,将其正向插入载体pCAMBIA1305的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成pCAMBIA1305-Cry3Aa植物表达载体,并导入根癌农杆菌EHA105。采用农杆菌介导的遗传转化法,将Cry3Aa基因转入已转Cry1Ac+API基因的741毛白杨无性系pB29中,获得转双Bt基因的741杨。在含潮霉素的培养基中进行多次继代筛选,获得抗性稳定的无性系9个,编号为pCCA1—pCCA9。采用特异引物分别对转基因植株进行PCR检测,结果显示Cry1Ac基因稳定存在于pB29中,Cry3Aa基因已整合到各无性系的基因组DNA中。ELISA毒蛋白检测,转基因株系都有Cry1Ac和Cry3Aa杀虫蛋白表达。用转基因植株叶片进行柳蓝叶甲(鞘翅目)和美国白蛾(鳞翅目)室内饲虫试验结果表明,转基因植株具有双抗性。根据对测试昆虫的致死率划分高中低3个抗性水平,其中pCCA2,pCCA5,pCCA6,pCCA9具有双高抗;pCCA3,pCCA4和pCCA7对柳蓝叶甲表现出中、低抗性,对美国白蛾则高抗;而pCCA1表现对美国白蛾的极低抗性,对柳蓝叶甲则高抗。     

杨树Bt抗虫基因工程研究进展

本文介绍了苏云金芽孢杆菌(Bt)毒蛋白的杀虫机理和Bt毒蛋白基因的分类;概述了Bt毒蛋白基因在杨树基因工程中的应用现状,探讨了当前杨树Bt抗虫基因工程中存在的主要问题,并展望了杨树抗虫基因工程在杨树遗传改良中的应用前景。     

转Bt基因南林895杨抗虫性及对土壤微生物影响分析

以转Bt基因南林895杨株系B1、B4、B17、B21扦插苗为试验材料,分析其在室内和野外自然条件下对靶标害虫杨小舟蛾幼虫的抗虫性。结果表明:转Bt基因杨树4个株系均有一定的杀虫活性,其中株系B21对杨小舟蛾1龄幼虫12 d校正死亡率高达95.3%;虫试表明转Bt基因杨树各株系扦植苗在野外自然条件下的12 d幼虫校正死亡率8月份为35.0%88.8%,9月份为40.5%95.3%。用转Bt基因杨树叶片饲养杨小舟蛾,对照植株杨小舟蛾幼虫化蛹率为83.3%96.0%,而转Bt基因株系幼虫化蛹率为8.0%76.7%,二者有显著差异。转Bt基因杨树对杨小舟蛾幼虫的生长发育有抑制作用,饲喂8 d后害虫取食量、体质量增长速率显著低于对照。此外,为了解转Bt基因杨树对土壤微生物的影响,对转Bt基因杨树株系及对照进行了根际土壤微生物可培养类群的分析,初步结果显示:转Bt基因杨树根际土壤微生物中细菌、真菌、放线菌的数量与对照比较无显著差异。     

抗虫转基因杨树的培育及其抗虫性初步研究

以杨树优良新品种欧美杨107(Populus×euramericanacl."74/76")为试材,通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法,将Bt毒蛋白基因导入107杨的叶片及茎段外植体,经潮霉素抗性筛选,获得了转基因再生植株。提取转基因植株的总DNA,经PCR扩增,部分植株呈阳性反应,证明目的基因已经整合到杨树基因组中。以转基因杨树叶片饲喂天幕毛虫幼虫的杀虫试验结果表明,转基因杨树表现出一定的杀虫活性。     

TA29-Barnase基因导致抗虫转基因欧洲黑杨雄性不育的研究

取在１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．０２ｍｇ／Ｌ培养基中发育４￣６周的欧洲黑杨转Ｂｔ基因植株１５－ｎ－１９２试管苗试叶,在ＭＳ＋ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０２ｍｇ／Ｌ培养基中培养１６ｈ,分别用基因枪法和叶盘法转化ＴＡ２９－Ｂａｒｎａｓｅ嵌合基因,其Ｂａｒｎａｓｅ基因的转化率依次为１６．１％和２３％,再生株数分别为１７５／１２和７１／１０。试验表明,选择发育适宜的叶片,利于目的基因转化后的植株再生。进一步     

抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析

抗虫转基因欧洲黑杨的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析陈颖，李强，李玲，韩一凡，田颖川（中国林业科学研究院林业研究所北京１０００９１）（中国科学院微生物研究所北京１０００８０）关键词Ｂｔ．基因，转基因欧洲黑杨，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法ＷＥＳＴＥＲＮＢＬＯＴＡＮＡＬ...     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因转化美洲黑杨的研究

本研究首先建立了美洲黑杨叶片外植体的再生系统，并利用Ｈｏｒｓｃｈ等人１９８５年发明的叶盘法，将分别带有嵌合基因ＮＰＴＩＩ和１．８ｋｂ或２．１ｋｂ Ｂｔ．基因的土壤杆菌ＬＢＡ４４０４与美洲黑杨叶片共培养。采用３０ｍｇ／ｌ和５０ｍｇ／ｌ两种浓度的卡那霉素筛选转子，约２８天左右的时间，有不定芽从外植体切口处形成。两种卡那霉素浓度下共形成２７５个伸长芽，存活了１８７株。这１８７株分别进入卡那霉素３０ｍｇ／     

杨树皮储藏蛋白基因启动子的克隆和功能研究

杨树树皮储藏蛋白BSP是类似种子储藏蛋白的氮素储藏物 ,冬季在韧皮部薄壁细胞中大量积累 ,是落叶树氮代谢中的重要成分。为了研究BSP基因启动子在转基因植物中的表达特性 ,探索其在植物基因工程研究中潜在的应用价值 ,我们用PCR方法从美洲黑杨基因组中DNA扩增得到了BSA启动子片段。与GUS基因融合构建中间载体后 ,转化烟草 ,获得了一批PCR检测为阳性的转化再生植株。经GUS组织化学检测 ,发现若干转基因烟草的茎和叶柄韧皮部以及叶脉都呈GUS染色阳性 ,初步证明杨树BSP基因启动子确有韧皮部表达特性 ,可介导GUS基因在转基因烟草韧皮部特异表达。     

三北地区河滩地杨树人工林生长特性研究

通过对三北地区河滩地喀左小钻杨树人工林的生长特性的研究 ,结果表明 :喀左小钻的轮伐期为 13～ 15a。经分析 ,喀左小钻生长过程分为 3个时期 :1～ 5a为幼林期 ,6～ 11a为速生期 ,12～ 15a为近、成熟期。根据其生长发育特性 ,在现有林分密度下 ,8年时应进行适当的抚育间伐 ,以提高林地生产力 ,培育高产、优质的大、中径材     

基因分化值和基因调控信息量研究

本文通过对基因调控、表达的分析,探讨了个体分化定量问题,提出用基因分化值D_(?)指标,度量分化细胞之间的内部差异;对调控、表达问题,用信息论的方法加以处理,得到了基因调控熵H_r,再从H_r指标估算出调控信息量。D_(?)具有强度性质;H_r具有容量性质。试验选用同功酶测定这两项分化指标。再用这两项指标进一步讨论分化、进化、生物信息、群体复杂性等问题。     

转基因741杨对舞毒蛾不同龄期幼虫的抗性研究

用7种不同系号的转抗741叶片为材料，对舞毒蛾幼虫进行逐龄分别饲养，系统测定各系号抗虫杨叶片对舞毒蛾不同龄期幼虫的死亡率，体重增长速率，发育速率的影响。结果表明：7种抗虫杨叶片对1龄幼虫均表现出较高的毒杀作用，其中处理3d的死亡率均达到35％，处理5d死亡率达80％。对2，3龄幼虫除具有一定的毒杀作用外，主要表现为对其生长发育的抑制作用，影响其正常的取食，降低体重增长速率和减慢发育速率。     

几种杨树树皮中酚甙和酚酸类化合物的初步研究

从毛白杨等四种树皮的热水浸提物中分离出二种酚甙结晶,经熔点测定、元素分析、薄层色谱、红外光谱、质谱等手段鉴定为水杨甙(Salicin)和杨属灵(Pop-ulin)。对树皮中的酚酸也用高效液相色谱进行分析,发现上述树皮中含有对-羟基苯甲酸等五种酚酸。     

几个杨树新品种抗旱能力与生理反应研究

利用扦插苗对 6个杨树品种进行抗旱指标与叶片水分、净光合产物、蒸腾速率等生理反应研究。确定了各品种的正常生长、抑制生长及死亡阶段的土壤含水率范围 ,对各树种抗旱性进行了定量评价。为杨树新品种推广利用提供科学依据。     

防腐剂及农村杨木建筑木结构防腐的应用研究

我国北方农村的建筑用材,多以杨、柳、榆等速生树种为主,但这些木材易发生腐朽与虫蛀。本课题对适合农村建筑中杨木等木结构的防腐、防虫剂和防腐涂料的物理化学性能,对菌、虫毒效等进行了一系列的室内外试验,提出了简易的防腐防虫处理方法。在试验基础上,选用效果较好的水溶性、油溶性防腐、防虫剂和防腐油漆,并进一步在北京大兴县农村进行了扩大应用试验。经两年多观察,尚未发现虫蛀与腐朽,但未防腐的檩条已发生虫蛀。