小鼠生物法与ELISA法对腹泻性贝类毒素的检测比较

腹泻性贝类毒素(diarrhetic shellfish poisoning,DSP)是一类由海洋甲藻产生的赤潮藻毒素。本研究比较了小鼠生物法与酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测海洋贝类中DSP的效果。结果表明,样品中DSP含量在300 μg·kg^-1以上时,2种方法检测结果均为阳性,但存在差异;样品中DSP含量在200~300 μg·kg^-1时,ELISA法可准确检测样品中DSP含量,而小鼠生物法可能出现假阴性反应;样品中DSP含量在10~200 μg·kg^-1时,小鼠生物法无法检测到样品中DSP,而ELISA法可以准确检测样品中DSP含量;在DSP阴性样品中两者检测结果一致。比较研究表明,2种方法在快速筛选DSP时各有优缺点,日常检测工作中,将2种方法适当结合可提高检测结果准确度。     

间接ELISA法检测羊促乳素抗体方法的建立

【目的】建立促乳素单克隆抗体制备中筛选阳性分泌细胞的间接ELISA检测方法。【方法】用促乳素纯品与Freund佐剂免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,初次免疫采用抗原与完全Freund佐剂,每2周免疫1次,从第2次开始采用抗原与不完全Freund佐剂,免疫4次后尾静脉采血,收集血清制备阳性对照抗体,以未免疫的BALB/c小鼠血清为阴性对照,筛选间接ELISA法检测促乳素抗体的最佳反应条件,并对单克隆抗体制备中的阳性细胞进行筛选。【结果】间接ELISA法的最佳反应条件:血清稀释倍数为1∶200,抗原包被质量浓度为100 ng/mL,封闭液为1%牛血清白蛋白,酶标抗体的工作浓度为1∶10 000,酶标抗体作用时间为37℃90 min,底物作用时间37℃30min。用该方法检测融合的杂交瘤细胞,最终获得OD450为0.875和0.460的阳性细胞株。【结论】建立了检测促乳素抗体的间接ELISA检测方法,该方法方便易行。     

化学发光微粒子免疫法检测虾肉中磺胺类药物的残留

[目的]通过对比化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和高效液相色谱-质谱法对虾肉中磺胺类药物检测结果的差异,验证公司自研的磺胺类药物化学发光免疫试剂盒的检测效果。[方法]以虾肉为检测原料,采用直接竞争CMIA法对试剂盒进行灵敏度、特异性、精密度、准确度试验。[结果]试剂盒检测灵敏度为1.04μg/kg、加样回收率为95.25%~104.50%,变异系数(CV)均小于15%;试剂盒检测结果与仪器分析的阴、阳性结果接近。[结论]该方法检测结果稳定、可靠,达到国家相关标准,表明该款试剂盒可满足动物组织中磺胺类药物的快速检测需求。     

小麦中呕吐毒素的ELISA和HPLC法检测

[目的]考察自主研制的呕吐毒素ELISA试剂盒检测结果的准确性。[方法]对小麦样品进行加标回收试验,样品经提取后直接过滤即可用于ELISA检测,过滤后再过免疫亲和柱的样液同时经HPLC和ELISA检测。[结果]提取后的样品直接过滤后进行ELISA检测的回收率较高,在75%以上,相对标准偏差(RSD)在4.7%～10.6%;而过柱后经HPLC法和ELISA法检测,在加标浓度较高的情况下,两者回收率相当,分别为49.8%和49.7%,相对标准偏差(RSD)分别为1.8%和5.6%。[结论]采用呕吐毒素试剂盒检测小麦样品的结果准确可靠,方法简便快捷,适合大量样品的快速筛选。     

免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗

试验选取自身蛋白制备克盐酸伦特罗克伦特罗载体抗原,免疫动物后产生高效价的特异性抗体,纯化抗体与胶体金结合成免疫金,制备成简易的检测试纸条。通过检测试纸条敏感性、保存期、金标抗体工作浓度选择、操作方法对比、实验检测及与单抗金标试纸条平行检测等试验,证明建立的免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗具有实用性、可靠性和稳定性。自身全血清作载体可使抗盐酸克伦特罗的ELISA效价高达4万以上。免疫金试纸法对盐酸克伦特罗的最小检测量为40ng·mL-1,试纸条在室温保存150d不影响检测结果。实验检测86份ELISA试剂盒阴性样品和42份阳性样品,其符合率分别为100%和95.2%。市售单抗金标试纸条检测结果与ELISA法的阳性符合率为95%(19/20)。     

小鼠生物法与ELISA法检测麻痹性贝类毒素的比较

麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)是全世界分布最广、危害最大,也是最为大众熟知的一类赤潮藻毒素。本研究比较了小鼠生物法与酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测水产品中PSP的效果。结果表明,样品中PSP含量在350μg·kg-1以上时,2种检测方法结果吻合度较好;样品中PSP含量在40~350μg·kg-1时小鼠生物法无法检测到样品中PSP,而ELISA法可以快速检测样品中PSP;在PSP阴性样品中两者检测结果一致。通过比较研究,2种方法在快速筛选PSP时各有优缺点,日常检测工作中将2种方法适当结合可提高检测结果准确度。     

ELISA法与小白鼠生物法检测麻痹性贝类毒素的研究

麻痹性贝类毒素(PSP)是当前世界范围内分布最广、危害最大的一种海洋生物毒素。该研究以福建地区贻贝为原料,采用酶联免疫吸附法(ELISA)与传统的小白鼠生物测定法对20份贻贝样品中的麻痹性贝类毒素进行检测,结果表明:两种方法检测麻痹性贝类毒素的结果吻合程度较好,但ELISA法更适于检测PSP含量较小的贝类。通过比较研究,小白鼠生物法操作简单但无法准确定量;而ELISA法快速简便、灵敏度高且检测成本低,对于麻痹性贝类毒素的快速筛选检测具有重要的现实意义。这两种方法结合运用可以确保麻痹性贝类毒素检测的结果更加准确。     

荧光免疫法、ELISA法与PCR在婴幼儿腹泻常见病毒检测中的价值

目的 探讨荧光免疫法、酶联免疫吸附试验(ELISA)法与聚合酶链式反应(PCR)检测婴幼儿腹泻常见病毒的结果与一致性.方法 对急性腹泻婴幼儿61例分别用荧光免疫法、ELISA法、PCR技术对患儿粪便标本中肠道腺病毒、轮状病毒、星状病毒及诺如病毒抗原进行检测.结果 荧光免疫法肠道腺病毒、轮状病毒、星状病毒及诺如病毒抗原阳性检出率分别为11.48％、11.48％、6.56％及13.11％;ELISA法上述病毒抗原阳性检出率分别为1.64％、27.87％、13.11％及29.51％,PCR上述病毒抗原阳性检出率分别为26.23％、1.64％、1.64％、1.64％.荧光免疫法与ELISA法对比,轮状病毒、诺如病毒抗原阳性检出率差异均有统计学意义(P＜0.05),对于轮状病毒两种方法检测结果有较好一致性;荧光免疫法同PCR对比,肠道腺病毒、诺如病毒抗原阳性检出率差异有统计学意义(P＜0.05),对于轮状病毒及肠道腺病毒,两种方法检测结果有较好一致性;ELISA法与PCR对比,4种病毒抗原阳性检出率差异均有统计学意义(P＜0.05),对于4种病毒,两种方法检测结果有较好一致性.结论 ELISA法与PCR对婴幼儿腹泻常见病毒检测一致性较高,在临床诊断中,可采用ELISA法进行初筛,再通过PCR进行确认,以提高诊断效率及准确性.     

吖啶橙免疫荧光菌团培养浓集法快速检出鸡白痢和禽伤寒沙门氏菌的研究

本文报告经作者实验研究提出的吖啶橙免疫荧光菌团培养浓集法(AOIFBC法)用于人工感染雏肠内容物中S.P和S.g检出的结果:从109例感染雏中分离S.p.,并与常规分离培养对照。本法阳性率31.2％,漏检率3.7％;常规法阳性率17.4％,漏检率17.4％,二者阳性率差异显著(P<0.05),漏检率差异非常显著(P<0.01)离心沉淀物荧光菌团检查与沉淀物分离培养验证结果比较,二者符合率85.3％。从92例感染雏中分离S.g.,与常规分离培养对照。本法阳性率26.1％,漏检率2.2％;常规法阳性率19.6％,漏检率8.7％,二者阳性率和漏检率差异不显著(P>0.05)。离心沉淀物荧光菌团检查与沉淀物分离验证结果比较,二者符合率90.2％。     

水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析

初步比较了酶联免疫法(ELISA)中2种氯霉素试剂盒(荷兰EURO-DIAGNOSTICA试剂盒和德国r-Biopharm试剂盒)检测水产品氯霉素残留量的效果,并对测定水产品氯霉素残留量的气相色谱法(GC-ECD)和液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)的技术参数进行了比较分析。结果表明,荷兰EURO-DIAGNOSTICA试剂盒和德国r-Biopharm试剂盒的检测范围分别为0.025~2.0μg.L-1和0.05~4.05μg.L-1,其板内相对标准偏差均小于10%,2种试剂盒检测25个鱼或虾样品的假阳性率分别为12%和20%。LC-MS/MS和GC-ECD的最低检测浓度分别为0.1μg.kg-1和0.27μg.kg-1,当氯霉素添加量为2μg.kg-1时其平均回收率分别为95.2%和70.4%;LC-MS/MS样品前处理较简单,GC-ECD较繁琐。     

酶联免疫吸附法测定家禽配合饲料中氯霉素含量结果探析

为验证酶联免疫吸附法(ELISA)对家禽配合饲料中氯霉素(CAP)含量检测的实用性,根据氯霉素残留酶联免疫检测试剂盒操作说明对样本进行前处理,以0.1μg/kg、0.3μg/kg、0.5μg/kg浓度的氯霉素标准溶液进行空白添加回收实验,结果回收率在70%～120%以内,变异系数在5%以下。实验结果表明所使用的ELISA试剂盒能够满足检测饲料中氯霉素残留的需要,适合用于基层工作中大规模筛查氯霉素残留量。     

改良重氮法合成米诺环素人工抗原及结果鉴定

分别采用重氮法、戊二醛法及改良重氮法将米诺环素半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原,3种方法的偶联比分别为5∶1,10∶1和15∶1;紫外光谱、红外光谱、凝胶电泳对改良重氮法合成的人工抗原进行鉴定,成功合成了人工抗原;将改良重氮法合成的人工抗原MNC-BSA免疫BALB/C小鼠,用间接ELJSA法测定抗体效价及其特异性.结果表明:小鼠血清抗体效价均在1∶12800以上,为研究制备米诺环素单克隆抗体奠定了基础.     

ELISA法筛选抗新孢子虫中药的研究

[目的]筛选抗新孢子虫效果较好的中药。[方法]取健康昆明种小鼠,投服甲基氢化泼尼松,使其免疫力下降,然后随机分组,每只小鼠腹腔接种1.0×104个新孢子虫虫体,接种4 h后,各组小鼠灌服不同中药。给药7 d后,小白鼠眼球采血,收集血清,应用ELISA法检测其抗体水平。[结果]15个中药组中有4个中药组抗体阳性率较低。[结论]黄芩、百部、天麻、黄连可以提高感染新孢子虫小白鼠的免疫水平。     

斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病

[目的]探讨斑点免疫金渗滤法诊断猪蛔虫病的可行性,为制备诊断猪蛔虫病试剂盒提供参考依据。[方法]采用猪蛔虫的重组蛋白AS16抗原和胶体金标记葡萄球菌蛋白A（SPA）,根据免疫渗滤原理,建立抗猪蛔虫抗体的斑点金免疫渗滤检测法。[结果]斑点免疫金渗滤法检测1200份猪血清样本中猪蛔虫抗体,检出阳性率为25.00%,而琼脂扩散试验（AGP）阳性检出率为15.00%。[结论]斑点金免疫渗滤检测法具有操作简便,灵敏度高,特异性强的优点,可用于猪蛔虫病的快速检测。     

芦笋粗多糖对正常小鼠免疫功能的影响

采用腹腔巨噬细胞吞噬法、溶血素及溶血空斑形成法和淋巴细胞转化法 ,观察其对正常小鼠免疫作用的影响。芦笋粗多糖大、中、小剂量组和香菇多糖组均可显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能 (P <0 .0 1) ,而芦笋粗多糖各剂量组又优于香菇多糖组。与生理盐水组比较 ,大剂量芦笋粗多糖组对正常小鼠溶血素及溶血空斑的形成和淋巴细胞的转化有显著影响 (P <0 .0 5 ) ,中剂量组有极显著影响 (P <0 .0 1) ,小剂量组对溶血空斑的形成有显著影响 (P <0 .0 5 )。     

免疫胶体金法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物的研究

对水产品中硝基呋喃类代谢物(AOZ,SEM,AMOZ,AHD)快速衍生化方法的研究发现:理想的衍生化条件是在酸性条件下,加入4-羰基苯甲醛(4-CBA)或2-硝基苯甲醛(2-NBA)经60℃恒温水浴60 min;进一步对样品的洗涤、提取和净化方法进行了优化,在此基础上建立了水产品中硝基呋喃类代谢物免疫胶体金快速检测方法,研制出免疫胶体金快速检测试剂盒,对AOZ最低检出限为0.5μg.kg-1,对SEM,AMOZ和AHD最低检出限均为1.0μg.kg-1,最短检测时间约为90 min.个-1样品。胶体金法与液相—串联质谱法的检测结果进行对比,两者的符合率约为98%。胶体金法快速、简便、成本低,有很好的应用价值。     

免疫磁珠层析试纸法快速检测野生横纹东方鲀毒性

调查并比较了野生横纹东方鲀(Takifugu oblongus)与养殖的菊黄东方鲀(Takifugu flavidus)、暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)的毒性。随机选取17尾野生横纹东方鲀并用2%乙酸两次煮沸法提取各组织中河鲀毒素TTX,超滤离心去除杂蛋白,之后采用本实验室制备的免疫磁珠层析试纸条做定性检测,并对筛选出来的典型样本用国标小鼠生物法定量检测毒素含量与定性检测作对照,分析对比各组织TTX含量。野生横纹东方鲀肌肉和精巢TTX含量在0～7μg/g组织,由于个体差异处于无毒或弱毒水平;肝脏和卵巢TTX含量在4～400μg/g组织范围内,属于强毒水平;养殖菊黄东方鲀和暗纹东方鲀各组织均处于无毒水平。     

食品中酪蛋白成分的ELISA检测方法的建立及评价

对建立并评价酪蛋白酶联免疫(ELISA)检测方法进行了研究,选用了ELISA Systerns酪蛋白残留试剂盒进行实验,结果显示:此试剂盒对食品中的酪蛋白成分特异,与其他几种过敏食品均无交叉反应.试剂盒体现了较高的精密度(CV<5%)和准确度.定性检测限小于1.56 mg/L,定量范围为0.24～1.926 mg/L.在热加工过程中,由于蛋白质变性导致抗原表位发生变化不能被抗体识别从而减弱了对酪蛋白成分的识别能力.使用ELISA Systems酪蛋白残留检测试剂盒通过ELISA方法检测食品中的酪蛋白成分可以得到可靠稳定的结果.     

强力霉素单克隆抗体制备及ciELISA检测方法的建立

以人工合成的强力霉素-牛血清白蛋白(DC-BSA)为抗原免疫BALB/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA法选择细胞融合的备用小鼠;应用杂交瘤技术建立分泌DCMcAb的杂交瘤细胞株,用体内诱生法制备DCMcAb,并对DCMcAb的免疫学特性进行鉴定;应用DCMcAb建立检测DC的ciELISA方法,并对其相关特性进行检测.结果表明:筛选后获得1株分泌特异性抗体的细胞3D1-H4,细胞培养上清效价为1∶(8×102),腹水效价为1∶(5.12×105),抗体为IgG1型免疫球蛋白,与四环素、土霉素和金霉素分别有8.87％、5.86％和2.74％的交叉反应率,与其他抑制物无交叉反应性;ciELISA检测方法的线性范围为1.58～199.53ng/mL,灵敏度为2.88 ng/mL,半数抑制的质量浓度IC50为36.31 ng/mL,斑点叉尾(鲴)肌肉和肝脏样品中DC的平均添加回收率分别为85.13％和79.69％,平均批间和批内变异系数均小于15％,不同基质对检测结果影响小.所建立的ciELISA方法可以应用于水产品中DC残留的检测.     

泰州地区外表健康猪群猪繁殖与呼吸综合征血清学调查

利用ELISA诊断试剂盒,对泰州地区猪场的后备母猪、种公猪、生产母猪和断奶仔猪以及育肥猪群的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体水平进行了检测.结果发现2010-2011年泰州地区猪场PRRSV抗体阳性率达到100％,外表健康猪群抗体阳性率在17.14％ ～ 100％之间,平均阳性率为60.24％.