荜茇酰胺对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨荜茇酰胺(PL)对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖、凋亡和生长迁移的影响.方法 用MTT法检测不同浓度(0、5、20 μmol/L)的PL干预后的人胆管癌HCCC-9810细胞增殖活力,并用Hochest33258试验和细胞划痕试验分别检测HCCC-9810细胞的凋亡和生长迁移情况.结果 人胆管癌HCCC-9810细胞经不同浓度(0、5、20 μtmol/L)的PL处理后,其PL浓度越高,细胞增值率越降低(P＜0.01),核变形细胞比例越高(P＜0.01).结论 PL能明显抑制人胆管癌HCCC-9810细胞的增殖,且具有明显的浓度依赖性;PL且可诱导人胆管癌HCCC-9810细胞的凋亡,并明显抑制人胆管癌HCCC-9810细胞生长迁移.     

大肠癌中HSP27、p14^ARF和caspase-3蛋白的表达及意义

目的：探讨HSP27、p14^ARF和caspase-3蛋白在大肠癌中的表达及其与大肠癌I临床病理特征的关系。方法：利用sP法检测大肠癌48例和大肠腺瘤10例以及正常大肠黏膜组织15例中HSP27、p14^ARF和caspase-3蛋白的表达。结果：大肠癌组织中HSP27、p14^ARF和caspase-3蛋白阳性表达率分别为79．2％、58．4％和66．7％,大肠腺瘤组织中分别为40．0％、70．0％和100．0％,正常大肠黏膜组织中分别为33．3％、80．0％和93．3％。p14^ARF和caspase-3蛋白的表达在高、中分化癌组的表达率分别为64．1％、74．4％,明显高于低分化组22．2％、33．3％（Pd0．05）。结论：HSP27、p14^ARF和caspase-3与大肠癌的发生有关,可作为大肠癌临床评价肿瘤生物学行为的指标。     

IGFBP-3、caspase-3在小鼠白念珠菌阴道炎模型黏膜组织中的表达

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）在ICR小鼠白念珠菌阴道炎模型中阴道黏膜局部的表达及其临床意义。方法构建ICR小鼠白念珠菌阴道炎模型,运用荧光实时定量PCR及免疫组化检测感染组与正常组中IGFBP-3、caspase-3表达的差异。结果构建ICR小鼠白念珠菌阴道炎模型成功,感染组阴道组织中见大量念珠菌丝及炎症细胞浸润;IGFBP-3c、aspase-3在感染组中较正常组高表达（P〈0.01）且两者表达呈正相关（rs=0.683,P〈0.01）。结论IGFBP-3、caspase-3在感染组中高表达可能与念珠菌下调阴道黏膜免疫并致病有关。     

宰后鸭肉骨骼肌中caspase-3活化对嫩度的影响

【目的】探讨caspase-3在宰后鸭肉中是否被激活以及参与改善宰后鸭肉的嫩度,为进一步用细胞凋亡机理阐明水禽类肉的成熟机理提供新的试验依据。【方法】分析检测宰后鸭胸肉和腿肉胞浆中细胞色素-C含量变化,caspase-3、-8和-9活化片段和酶活力变化、PARP降解片段的表达水平以及宰后鸭肉剪切力的变化情况。【结果】宰后鸭肉骨骼肌胞浆中细胞色素-C含量均显著升高（P＜0.05）,caspase-3、-8和-9酶原分别劈开成17、18和23 kD左右的活化片段,酶活力于宰后均迅速升高（P＜0.05）;作为caspase系统的标志性蛋白,胸肉和腿肉中PARP蛋白均被劈开成小片段,且剪切力值于宰后4-24 h均显著减小（P＜0.05）。相关性分析的结果显示,宰后胸肉和腿肉中caspase-3酶活力和caspase-8,caspase-9酶活力变化均呈显著正相关（P＜0.05）,与宰后剪切力值的变化呈极显著负相关（P＜0.01）。【结论】酶原的激活,酶活力的上升表明caspase-8和caspase-9各自介导的激活途径共同参与了鸭肉caspase-3的活化;PARP的降解,剪切力值的显著下降则表明活化的caspase-3直接或间接参与了鸭肉的成熟过程。     

芦荟治疗对子宫内膜癌survivin表达的影响

目的:探讨芦荟治疗对子宫内膜癌中凋亡相关基因surv iv in表达的影响。方法:应用芦荟治疗子宫内膜癌患者35例,采用免疫组化(SP)法检测治疗前后癌组织中surv iv in的表达水平。结果:芦荟治疗前后子宫内膜癌组织surv iv in的阳性表达率及表达强度分别为71.4%、(19.36±4.78)和25.7%、(13.35±2.93),治疗后子宫内膜癌surv iv in阳性表达率及表达强度显著降低(P<0.01)。子宫内膜癌组织中surv iv in表达强度与组织学分级、手术分期、肿瘤大小均呈正相关(r=0.412,0.398,0.408,P均<0.05)。结论:芦荟治疗子宫内膜癌的作用可能与其抑制癌组织surv iv in的表达有关。     

微小隐孢子虫TSP3蛋白的定位分析

通过对微小隐孢子虫TSP3氨基酸序列进行生物信息学分析设计多肽片段,偶联KLH载体蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测血清效价并利用特异性亲和层析的方法纯化抗体。以该抗体作为一抗,利用Western blot检测虫体天然蛋白质在体内的表达情况,通过间接免疫荧光方法进行亚细胞定位分析。结果表明:制备的多克隆抗体能够特异性识别虫体天然蛋白,亚细胞定位发现其位于子孢子以及裂殖子的顶端。     

宫颈癌演变过程中PTEN、survivin基因的表达及其意义

应用qRT-PCR及Western blot技术检测不同阶段宫颈病变组织中PTEN和survivin的表达状况,探讨其临床意义。结果表明:①PTEN mRNA在宫颈癌、CINⅢ组织中的表达显著低于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ及CINⅠ组织中的表达亦低于正常宫颈组织(P0.05);survivin mRNA在宫颈癌、CINⅢ组织中的表达显著高于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ组织中的表达亦高于正常宫颈组织(P0.05),而CIN I组织中则与正常宫颈无差异(P0.05)。②PTEN蛋白在宫颈癌、CINⅢ、CINⅡ、CIN I组织中显著低于正常宫颈组织(P0.01),并随着病变程度的增加而减弱。survivin蛋白在宫颈癌、CINⅢ组织中显著高于正常宫颈组织(P0.01),在CINⅡ中的表达高于正常宫颈组织(P0.05),而在CINⅠ组织中则与正常宫颈无差异(P0.05)。说明PTEN和survivin基因在宫颈从癌前病变向宫颈癌演变过程中发挥重要作用,有望成为宫颈癌分子诊断与分子靶向治疗的新靶点。     

E-64对绵羊卵母细胞体外成熟过程中caspase表达规律的影响

为了研究E-64对绵羊卵母细胞体外成熟过程中caspase表达的影响,从而探究E-64抑制卵母细胞凋亡的基本途径。本试验利用双夹心ELISA方法,研究体外成熟过程中绵羊卵母细胞内caspase-3,caspase-8以及caspase-9的蛋白表达水平及酶活水平的变化规律,以及成熟液中添加E-64对其产生的影响。结果表明:caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白表达水平均呈先升高后降低的变化规律,caspase-3和caspase-9的活性与其蛋白表达的变化规律相一致,而caspase-8的活性则呈逐渐升高的变化规律;成熟液中添加E-64,对caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白表达水平均无显著性(P0.05)影响,但可以降低caspase-8和caspase-9的酶活性(P0.05),而对caspase-3的酶活性无显著性影响(P0.05)。表明E-64通过在酶活性水平上下调死亡受体途径中caspase-8的活性和线粒体途径中caspase-9的活性,从而降低了卵母细胞体外成熟过程中的细胞凋亡刺激。     

Caspase-3和Bcl-2／Bax在胆管癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性研究

目的：探讨相关凋亡蛋白Caspase-3、Bcl-2／Bax在胆管癌组织中的表达及与胆管癌病理类型以及肿瘤分期的关系。方法：采用免疫组化链霉素抗生物素-过氧化物酶复合物法（SP法）检测胆管癌组织38例标本中Caspase-3、Bcl-2／Bax的表达,结合临床病理资料进行回顾分析。结果：①18例胆管高分化腺癌组织中,Caspase-3阳性检出率为50．00％（9／18）,11例低分化腺癌中,Caspase-3阳性率为18．18％（2／11）,Caspase-3在高、低分化腺癌之间阳性率差异具有统计学意义（P〈0．05）;Caspase-3蛋白表达与胆管癌的分化程度、有无淋巴结或远处转移及临床分期相关（P〈0．05）。而与患者年龄、性别、肿瘤大小关系无统计学意义（P〉0．05）。②18例胆管高分化腺癌组织中Bcl-2阳性检出率为16．67％（3／18）,11例低分化腺癌中,Bcl-2阳性率为54．54％（6／11）,Bcl-2在高、低分化腺癌之间阳性率差异具有统计学意义（P〈0．05）;Bcl-2蛋白表达与胆管癌的分化程度、有无淋巴结或远处转移及临床分期相关（P〈0．05）。余无明显差异（P〉0．05）。③18例胆管高分化腺癌组织中,Bax阳性检出率为44．44％（8／18）,11例低分化腺癌中,Bax阳性率为9．09％（1／11）,Caspase-3在高、低分化腺癌之间阳性率差异具有统计学意义（P〈0．05）;另外,Bax蛋白表达与胆管癌的分化程度、有无淋巴结或远处转移及临床分期相关（P〈0．05）。结论：胆管癌中Caspase-3、Bcl-2／Bax蛋白表达可能与胆管癌的发生发展有关;检测Caspase-3和Bcl-2／Bax的表达对胆管癌的预测有一定的参考价值。     

微小隐孢子虫TSP3蛋白质的表达与功能

通过对微小隐孢子虫TSP3基因克隆构建原核表达载体,纯化TSP3 His-tag重组蛋白质免疫新西兰家兔,间接ELISA方法检测特异性血清效价并纯化多克隆抗体。纯化TSP3 GST-tag重组蛋白质并与HCT-8细胞进行共孵育,通过Western blot与间接ELISA检测细胞黏附特性。结果表明:成功构建了微小隐孢子虫p ET-TSP3和p GEX-TSP3重组表达质粒,并用亲和层析法成功纯化出较高质量的重组蛋白质。Cp TSP3重组蛋白质具有良好免疫原性,并能与HCT-8细胞黏附。     

诊断超声照射对大鼠早孕胚胎组织细胞Caspase-3表达的影响

目的 了解诊断超声照射对大鼠早孕胚胎组织细胞Caspase-3表达的影响.方法 40只孕7dSD大鼠随机分为4组,用3.5 MHz超声持续照射腹部子宫体表投影区,分别照射0、10、20、30 min,超声照射后24 h取胚胎组织,用SP免疫组织化学检测Caspase-3蛋白表达.结果 超声照射20、30 mir组,Caspase-3表达明显高于对照组（P＜0.01）.结论 经腹诊断超声持续照射大鼠早孕胚胎超过20 min可使Caspase-3蛋白表达增高,从而可能导致早孕胚胎组织细胞凋亡.     

喉癌PCNA和survivin的表达与肿瘤化疗敏感性的关系

目的观察喉癌组织PCNA和survivin的表达水平与肿瘤化疗敏感性的关系。方法随机选取36例喉癌,给予顺铂、5-氟尿嘧啶和平阳霉素为方案联合化疗,取各例在治疗前的喉癌活检组织的石蜡标本,用免疫组化检测PCNA和survivin的表达情况,分析其表达水平与肿瘤化疗敏感性的关系。结果喉癌组织中PCNA表达阳性者对化疗的敏感性明显高于PCNA阴性表达者（90.0%vs37.5%,P〈0.01）;survivin表达阳性的喉癌组织与表达阴性的喉癌组织对化疗的敏感性则差异无统计学意义（65.2%vs69.2%,P〉0.05）。结论 PCNA的表达可能增强喉癌对化疗的敏感性,而sur-vivin的表达对喉癌化疗敏感性可能无影响。     

复方中药制剂对SD大鼠胸腺组织结构及Caspase-3蛋白分布的影响

为研究由炒白术、山楂、黄芪、板蓝根、茯苓、陈皮、甘草、山药制成的复方中药制剂对SD大鼠胸腺组织结构及其Caspase-3蛋白分布的影响。选择60只SPF级断奶SD大鼠,随机分为对照组、1.5 mL·kg^-1组、3.0 mL·kg^-1组和6.0 mL·kg^-1组,每组15只,预饲1周后按每千克体质量分别定时灌胃3.0 mL蒸馏水、1.5 mL、3.0 mL和6.0 mL药液(每mL含1 g生药)。至90 d,各处理组SD大鼠禁食禁水3 h,称量、麻醉、处死后取完整的胸腺称量,立即投入4%的多聚甲醛磷酸缓冲液固定72 h,制作石蜡组织切片,经HE、网状纤维和Caspase-3免疫组化染色,显微观察,Image-pro PLUS 6.0软件分析并摄影。结果表明,按每kg体质量灌胃本复方中药制剂3.0 mL可显著增加胸腺皮质区且胸腺的生长指数显著高于对照组(P<0.05)。网状纤维主要分布于SD大鼠胸腺髓质部,3.0 mL·kg^-1剂量组网状纤维含量较对照组显著减少。各实验组均不同程度抑制Caspase-3蛋白的出现,其中以3.0 mL·kg^-1剂量组最为显著。说明灌胃3.0 mL·kg^-1复方中药制剂可改善SD大鼠胸腺组织结构,延缓其结构和功能退化。     

survivin与PTEN、PCNA在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的观察survivin、PTEN、增殖细胞核抗原(PCNA)在子宫内膜癌(EMC)中的表达及临床意义。方法运用免疫组化S-P法检测survivin、PTEN、PCNA蛋白在48例EMC、19例子宫内膜不典型增生、23例正常子宫内膜组织中表达情况,及其在EMC不同临床分期、组织学分级、肌层浸润程度表达。结果survivin、PCNA和PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生及EMC中的表达不同,不典型增生组、EMC组与正常子宫内膜组比较,差异有统计学意义(P<0.05或0.01),不典型增生组与EMC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EMC临床Ⅱ期、ⅢⅣ期survivin表达与Ⅰ期有不同,Ⅲ~Ⅳ期PTEN、PCNA表达与Ⅰ期有不同,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同组织学G2、G3 survivin、PTEN、PCNA表达与G1有不同,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。无肌层浸润或浸润程度≤1/2组PTEN、PCNA表达与浸润程度>1/2组不同,差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测survivin、PTEN、PCNA三者的表达水平对判断EMC的恶性程度及预测预后具有一定的临床参考价值。     

MicroRNA-34a影响宫颈癌细胞增殖及PTEN基因表达的研究

目的探讨microRNA-34a对宫颈癌细胞增殖及抑癌基因PTEN表达的影响。方法 Hela细胞株传代培养后分为上调组、下调组和对照组,分别转染microRNA-34a模拟物、抑制物和对照物,48 h后用CCK-8、定量PCR、Western blot法检测细胞增殖及PTEN mRNA、蛋白表达。采用生物信息软件预测microRNA-34a靶基因。结果上调组Hela细胞增殖比对照组降低23.43%（P〈0.01）,而下调组比对照组增加14.77%（P〈0.01）。上调组PTEN mRNA和蛋白表达升高（P〈0.01）,而下调组表达降低（P〈0.05）。靶基因预测分析显示microRNA-34a与PTEN基因mRNA的3UTR区无互补结合区。结论 microRNA-34a抑制宫颈癌细胞增殖,可能与促进抑癌基因PTEN表达有关。     

牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化

m~6A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可调控m RNA的m6A甲基化水平,调节细胞蛋白质合成,实验室前期发现METTL3为乳腺上皮细胞乳合成重要调节分子,发挥泌乳调节作用。目前尚不清楚METTL3分子结构基础及其参与的调节机制。为揭示METTL3结构与功能关系,对METTL3蛋白作原核表达及纯化。研究采用PCR方法扩增牛mettl3基因完整CDS区,将CDS区插入原核表达载体p GEX-4T-1,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导METTL3蛋白大量表达,用8 mol·L-1尿素裂解包涵体,利用GST蛋白纯化试剂盒纯化诱导获得METTL3蛋白。SDS-PAGE证实GST-METTL3融合蛋白存在于包涵体内,试验获得高纯度GST-METTL3融合蛋白,为进一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依据。