绵羊支原体肺炎的诊治

1　发病情况　 2 0 0 1年 1月 ,靖江市郊区一养羊户从浙江省某地调进湖羊 1 0 6只 (其中母羊 1 0 1只 ,多为怀孕绵羊 ) ,入场后第 5天发现一只公羊流浆液性鼻涕 ,咳嗽 ,体温升高 ,食欲减退 ,经常反复。到第 2 0天 ,部分母羊体温升高、不食 ,后经紧急治疗 ,疫病得到有效控制 ,共     

羊群绵羊肺炎支原体抗体间接ELISA 检测方法的建立

利用绵羊肺炎支原体国际标准株Y-98,制备全细胞抗原,作为包被抗原,建立了一种间接ELISA方法。对4个不同羊场进行了血清学调查,确定了MoP抗体阳性率各为90%、70%、83.3%和73.9%。同间接血凝试验和鼻腔拭子培养结果相比,间接ELISA方法更加特异敏感,检出率更高,从而对该病的诊断和免疫程序的制定具有重要意义。     

两种纯化兔抗酸性红73免疫球蛋白G方法的比较研究

分别采用饱和硫酸铵法和辛酸—硫酸铵法纯化兔抗酸性红73(acid red 73,AR73)免疫球蛋白G(IgG)。通过二喹啉甲酸(BCA)法、十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试验、间接ELISA法分别测定IgG的浓度、纯度及效价。结果显示,饱和硫酸铵法所提IgG浓度为36.44 mg/mL,最高效价达1.6×10⁵;辛酸—硫酸铵法所提IgG浓度为15.79 mg/mL,最高效价达3.2×10⁵。提示,辛酸—硫酸铵法IgG纯度优于饱和硫酸铵法。     

绵羊肺炎支原体诊断方法的建立

从青海省海晏县发生胸膜肺炎的绵羊群中采集3份肺组织病料,进行病原的分离培养和特异性PCR检测。结果从3份肺组织中均分离到支原体,经鉴定为绵羊肺炎支原体,表明建立的PCR方法能对绵羊肺炎支原体做出正确诊断。     

绵羊肺炎支原体的研究进展

文章介绍了绵羊肺炎支原体的病原特征、致病性及致病机理、疫苗研制情况,并提出加强研究的方向,为该病的防治及疫苗开发提供参考。     

3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较

本研究采用改良Thiaucourt's培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae, MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CCU检测结果显示,接种后0～4 h为SC01的迟缓期,4～16 h为对数生长期,lg CCU/mL 最高达到10.7000±0.4700,16～20 h为稳定期,20 h以后进入衰亡期;浊度法定量检测结果显示,SC01培养物经过5倍浓缩后的D_{420 nm}随着培养时间延长逐渐上升,2 h时为0.0028±0.0002,4～12 h D_{420 nm}增加较缓慢,而12～24 h增加最快,24 h最高达到0.8609±0.0045,以后则趋于稳定;Real-time PCR法检测结果显示,SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升,2 h时lg 拷贝/mL为4.5889±0.0048,在30 h时lg 拷贝/mL达到7.6165±0.1089。相关性分析结果表明,在迟缓期和对数生长期,CCU法与Real-time PCR法、CCU法与浊度法、Real-time PCR法与浊度法对MO的定量检测结果高度相关,相关系数分别为0.967、0.720和0.849,而Real-time PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30 h内均高度相关,相关系数为0.912。经对检测所需时间及精确度等方面综合比较,本研究认为Real-time PCR法具有快速、准确及易标准化等特点,可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量。     

绵羊肺炎支原体PCR诊断方法的建立

由支原体导致的羊呼吸道传染病对养羊业的危害极为严重。过去对此的研究多集中于山羊支原体山羊肺亚种（M．capricolum subsp．capripneumoniae，mccp）。但是绵羊肺炎支原体（M．ovipneumonia）、山羊支原体山羊亚种（M．capricolum subsp．capricolum，Mcc）、丝状支原体山羊亚种（M．mycoides subsp．Capri，Mmc）、丝状支原体丝状亚种LC型（M．mycoides subsp．mycoides LC，MmmLC）精氨酸支原体（M．arginini）等都是导致山羊和绵羊肺炎的病原。     

绵羊肺炎支原体的培养与提纯

试验用改进的Ｈａｒｔｌｅｙ氏消化汤培养基,培养绵羊肺炎支原体效果较好,一般在菌体复苏后２４～４８ｈ即可使培养基ｐＨ值下降至６．９左右,同时建立了操作简单,省时,省力,染色效果良好的支原体复红染色法和提纯绵羊炎支原体抗原的具体方法。     

高免鸡蛋卵黄囊抗体的提取与纯化

本文用辛酸-硫酸铵盐析法从经过鸡新城疫和鸡传染性法氏囊高免的卵黄中提取二联抗体-IgG,提取液首先用琼脂凝胶沉淀试验检测鸡传染性法氏囊抗体和鸡新城疫抗体,并通过血液凝集试验和血液凝集抑制试验测定鸡新城疫抗体的血凝抑制滴度。结果表明,所提取的二联抗体对鸡新城疫和鸡传染性法氏囊抗原具有明显的特异性。     

猪支原体肺炎的诊断及防制

支原体是引起猪下呼吸道疾病和肺炎的常见病因。在世界范围内,支原体病对每一猪群都造成明显的经济损失。控制支原体病的措施包括改善通风状况、控制温度、全进全出的饲养管理、使用抗生素及疫苗等。对支原体病的诊断和确定可能存在继发性疾病的并发或与原发性疾病的互作是很重要的。     

Comparison of Mycoplasma hyopneumoniae strains by serologic methods

Six field strains of Mycoplasma hyopneumoniae isolated from pneumonic lungs of pigs, reference strains 11 and J of M hyopneumoniae, Ms 42 strain of Mycoplasma flocculare, and BTS 7 strain of Mycoplasma hyorhinis were compared serologically, using hyperimmune antisera produced in rabbits. All strains of M hyopneumoniae were closely related as determined with the disk growth-inhibition test; however, differences in zone sizes indicated that some antigenic heterogeneity existed. Cross-reactions were not detected between M hyopneumoniae, M flocculare, and M hyorhinis with the growth-inhibition test. The metabolic-inhibition test was more useful for detection of intraspecies antigenic difference than was the growth-inhibition test, since antigenic diversity was clearly detected among M hyopneumoniae strains. Slight cross-reactions were observed between M hyopneumoniae and M flocculare. Using 2-dimensional immunoelectrophoresis, antigenic differences were observed among M hyopneumoniae strains, although many common components also were detected in electropherograms. Mycoplasma flocculare possessed a close antigenic relationship to M hyopneumoniae, as determined by two-dimensional immunoelectrophoresis, whereas both organisms were less related to M hyorhinis. Evidence obtained in this study indicated that strains of mycoplasmas tentatively identified as M hyopneumoniae were similar antigenically, but evidence was obtained also of some diversity in antigenic structure among these strains.     

两种猪肺炎支原体原位杂交检测方法的应用

为了比较研究3种猪肺炎支原体(Mhp)的检测方法,利用已建立的显色原位杂交(CISH)和量子点荧光原位杂交(QD-FISH),并结合PCR方法,检测人工感染Mhp的试验猪、自然感染Mhp的试验猪和疑似感染Mhp的临床样品.结果显示,3种检测方法对人工感染组和自然感染组的检测率均为100％;对临床样品,PCR的检测率为90％,CISH的检测率为70％,QD-FISH的检测率为75％.结果表明,用于检测Mhp感染,PCR是最佳检测方法,但CISH和QD-FISH在Mhp检测和致病机理研究方面具有一定的应用价值.     

猪支原体不同靶基因PCR检测方法的比较

为筛选出检测猪支原体更为特异、敏感的PCR检测方法,本试验分别以16S rRNA、50S rRNA和膜蛋白OxaA为靶基因进行PCR检测,并从其敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,以膜蛋白OxaA和16S rRNA为靶基因的PCR方法敏感性最高,最小检测DNA量为1.86 fg/μL,而以50S rRNA为靶基因的PCR方法最小检测DNA量为18.6 fg/μL;3种靶基因引物均扩增不出大肠杆菌、猪链球菌、猪肺炎支原体、牛附红细胞体等基因片段,具有较好的特异性;通过对临床60份血液样本的检测结果表明,以膜蛋白OxaA基因设计的引物检出率最高,为25%(15/60),明显高于16S rRNA基因的21.6%(13/60)和50S rRNA基因的18.3%(11/60)。本试验为猪支原体病的诊断及流行病学调查提供了更为敏感、特异的检测技术。     

猪支原体肺炎控制和净化评价方法研究进展

简述了猪支原体肺炎各种防控措施的常规评价指标,包括临床症状和发病率的降低、肺部肉变的评分、血清抗体滴度的变化及肺炎支原体病原监测等,介绍了体液免疫和黏膜免疫评价指标分别在猪支原体肺炎灭活疫苗和弱毒活疫苗免疫效力评价中的作用,并对气溶胶中猪肺炎支原体的检测成为猪支原体肺炎防控和净化评价的主要方法之一的可能性进行了论述。     

几种检测弓形虫血清抗体方法的比较分析

本文对5种弓形虫血清IgG抗体检测方法进行比较评价。5种方法平行检测了80份血清,比较各检测方法的阳性检出率,敏感性,特异性,符合率及Youden指数。结果经配对2检验,ELISA-200,IHA,MAT,SPA-ELISA 4种方法在阳性检出率、平行检测结果之间无显著性差异(P<0.05)。ELISA-200敏感性、特异性和符合率均高于90%,Youden指数(0.85)显著高于其他方法(P<0.05)。IHA,MAT,SPA-ELISA 3种方法各指标处于中等水平,各有适合的检测环境。ELISA-100与其他四种方法在检测结果上差异极显著(P<0.01),特异性(38.3%)、符合率(58.75%)及Youden指数(0.383)都显著低于其他方法。     

对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较

本文比较了水稀释-饱和硫酸铵沉淀法（法一）和水稀释-冰乙醇分级沉淀法（法二）分离提纯鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）的产率、纯度及抗体效价。结果表明：两种方法提取的IgY纯度均较高,法一纯化的IgY的产率及蛋白活性相对更好。     

牛支原体肺炎流行RT-PCR方法的初步诊断

设计5对引物,对山东某一牛交易市场采集的64份鼻腔棉拭子样品进行了病原学检测。对所有样品进行差异脲原体、牛支原体、牛生殖道支原体、牛眼支原体和牛传染性胸膜肺炎(CBPP)PCR病原学检测,PCR产物连接T载体测序。PCR结果显示,牛支原体阳性样品7份,牛生殖道支原体、牛眼支原体和牛丝状支原体全部为阴性;测序结果显示,所测样品核酸序列与牛支原体和无乳支原体核酸序列都具有很高的同源性。对核酸序列进行遗传进化树分析表明,相对于无乳支原体而言,所测核酸序列与牛支原体物种具有更近的遗传距离。