4种高梁基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少、纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后2种方法提取的DNA降解严重、纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

4种高粱基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少,纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后两种方法提取的DNA降解严重,纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

一种简易有效的提取真菌DNA化学改良方法

[目的]探索适合真菌基因组DNA提取的有效方法。[方法]以酵母茵（Hansenula sp.HS07A）和青霉菌（Penicillium sp.HS07）为供试菌株,分别采用煮沸裂解法、石英砂研磨法、研磨和反复研磨冻融法和化学改良法提取其基因组DNA,比较这4种方法的提取效果。[结果]化学改良法提取基因组DNA,除去了机械破壁过程,减少了机械力对DNA造成的破坏,运用阴离子去污剂SIB提取DNA安全、价廉,能有效、完整地提取高质量的基因组DNA,凝胶电泳条带清晰、无弥散,以此基因组DNA作为目的片段的PCR扩增模板,扩增效果优于改良前的方法,并且这种方法也适合多种真菌和细菌基因组DNA的提取。[结论]化学改良法是提取真菌基因组DNA的有效方法。     

玉米DNA纤维的制备及端粒DNA的Fiber-FISH

[目的]建立了一种快速制备DNA纤维的方法,用端粒DNA在玉米纤维上进行物理定位。[方法]采用刀切法从玉米嫩叶中提取细胞核。以端粒DNA为探针,在玉米DNA纤维上进行伸展DNA纤维的荧光原位杂交(Fiber-FISH),研究端粒DNA重复序列在玉米染色体上的拷贝数。[结果]用刀切法提取玉米细胞核,提高了核的完整性,并改善了DNA纤维的制备效果。玉米细胞核裂解的最佳时间为8~9 min。玉米的Fiber-FISH试验结果表明,杂交信号为伸展的念珠状长链,玉米各条染色体端粒DNA的长度为7~103μm,各染色体端粒重复序列的拷贝数存在显著差异(为15~230 kb)。[结论]玉米各染色体中端粒的长度可能不同,而且随着玉米生长及环境的变化,各条染色体端粒DNA长度的变化也不一致。     

棉花不同组织DNA的不同提取方法比较

[目的]研究棉花不同组织DNA提取的最佳方法。[方法]以棉花嫩叶、种子、黄化苗作为研究对象,比较CTAB法、SDS法、SDSCTAB法提取DNA的效果。[结果]若对DNA的量没有要求,棉花嫩叶、种子、黄化苗等组织均应选用SDS-CTAB法提取DNA。若对DNA的量有一定要求,如浓度需大于100 ng/μl,质量大于20 000 ng的情况下,针对不同试验材料推荐使用的提取方法是:棉花嫩叶用CTAB法,棉花种子SDS法,棉花黄化苗CTAB法。[结论]为快速高通量地检测转基因棉花基因漂移距离和频率提供参考。     

节杆菌基因组DNA提取方法的改良

[目的]研究比较了节杆菌的不同DNA提取方法,以获得高质量的基因组DNA。[方法]采用反复冷冻研磨、甲苯处理对细胞进行预处理,随后进行CTAB抽提,并与细菌基因组提取试剂盒进行比较。[结果]改良的CTAB法提取的DNA,纯化之后经电泳检测表明,基因组DNA条带清晰,量度均一,DNA片断大小一致;以上述DNA为模板进行PCR扩增,条带单一、特异性强,其中利用经甲苯方法提取的DNA快速、简便、经济实用,可作为PCR扩增的模板进行后续的基因操作和分子生物学研究。[结论]改良的CTAB法能够有效地提取节杆菌基因组DNA,纯度达到要求。     

粉蚧科无损形态基因组DNA提取技术

以双条拂粉蚧(Ferrisia virgata Cockerell)为研究对象,釆用蛋白酶K代替粉蚧玻片标本制作中的10%KOH用于组织消化,消化液用试剂盒法进行基因组DNA提取,剩余虫体进行玻片制作;同时比较了虫体全研磨、腹部微针扎孔与虫体不做任何处理共3种处理方法提取基因组DNA的效果。结果表明:3种处理方法均可成功提取基因组DNA,后2种方法处理后的剩余虫体可制作成玻片标本,实现了粉蚧无损形态的基因组DNA提取技术,为粉蚧的DNA条形码和系统发育研究提供了技术保障。     

贺兰山紫蘑菇基因组DNA提取方法研究

[目的]研究适合于贺兰山紫蘑菇（Corinarius rufo-olivaceus）基因组DNA的提取方法。[方法]通过采用改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、SDS法、Doyle-Doyle法和KI法5种基因组DNA提取方法,分别提取贺兰山紫蘑菇的基因组DNA,用DU800核酸蛋白检测仪测定其DNA含量、浓度和纯度,并通过琼脂糖凝胶电泳进行提取结果比较。[结果]5种不同的提取方法均能提取该紫蘑菇的基因组DNA,其中KI法提取的DNA纯度、浓度和得率为最好。[结论]KI法是贺兰山紫蘑菇（C.rufo-olivaceus）DNA提取的适宜方法,该法具有简单、便捷、省时、适合基因组DNA大量提取的特点。     

单头肿腿蜂DNA提取方法及多个基因片段PCR反应体系建立

[目的]采用分子生物学技术研究肿腿蜂类天敌昆虫近缘种关系。[方法]利用SDS法和试剂盒法2种方法对8种肿腿蜂的单头个体进行基因组DNA提取。[结果]琼脂糖凝胶电泳结果表明,试剂盒法提取的单头肿腿蜂基因组DNA虽成本较高,但提取总量大、提取成功率高、单位浓度高。且利用试剂盒法提取的基因组DNA进行多个基因片段PCR扩增,均得到正确的扩增产物。[结论]该研究为进一步分析肿腿蜂种类及遗传进化关系奠定基础。     

Chelex-100法快速提取白粉菌基因组DNA及ITS2序列的克隆

[目的]建立快速提取及克隆白粉病菌基因组DNA的方法。[方法]以豌豆白粉菌分生孢子为材料,用Chlex-100法快速提取白粉菌基因组DNA,并以此为模板对内转录间隔区Ⅱ（ITS2）序列进行了巢式PCR扩增、克隆、测序及分析。[结果]Chlex-100法可高效的提取白粉病菌基因组DNA,适用于PCR扩增及相关分析。[结论]为快速有效地对白粉病资源进行大规模分子分类鉴定奠定了基础。     

一种高效提取棉花细胞核的技术

1材料与方法1．1材料二倍体亚洲棉品种石系亚1号,来自中国农业科学院棉花研究所。试剂HEPES购自Amresco公司,DTY购自BioBasicInc．,TritonX-100、PVP40购自Sigma公司,DAPI购自Roche公司,其他试剂均为国产分析纯。     

一种高效提取棉花细胞核的技术(英文)

[Objective] The experiment aimed to study an efficient method of Nuclei extraction of cotton and provided technical support for constructing large-insert genomic library and sequencing complete genome. [Method] The cotton cotyledons germinated in dark moisture chamber for one week were chopped with a sharp sterile scalpel in a Petri dish which contained ice-cold nucleus isolation buffer (10 mmol/L MgSO4, 5 mmol/L KCl, 0.5 mmol/L HEPES, 1 mg/ml DTT, 0.25% Triton X-100 and 2% PVP40), then the nuclei were collected after selected through 100, 50 and 30 μm nylon meshes and centrifugation. Meanwhile, the tender leaves and cotyledons with different germination time in dark were treated by grinding method and sharp scalpel method. [Result] The chopping with a sharp scalpel method was very simple and rapid, which did not need grind and mercaptoethanol treatment and the successful extraction rate was 100%.[Conclusion] An efficient method of nuclei extraction of cotton with simple, high efficiency, rapid reaction and poison free were established.     

反相离子对液相色谱-二极管阵列检测器测定红薯粉条中溴酸钾

[目的]建立反相离子对液相色谱-二极管阵列检测器测定红薯粉条中溴酸钾的分析方法。[方法]样品以超纯水超声波提取,加入甲醇混合后离心,取上清液微孔滤膜过滤作为供试品液。使用Waters Symmetry shield~(TM)RP18色谱柱,以甲醇∶水(含4.0 mmol/L柠檬酸与0.5 mmol/L十六烷基三甲基溴化铵溶液,pH为4.5)40∶60(V/V)为流动相,二极管阵列检测器扫描检测,以保留时间和190~400 nm光谱定性,210 nm波长下溴酸钾峰面积定量。[结果]溴酸钾在5.135~513.500μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.999,方法回收率在83.5%~88.5%,检出限为0.9 mg/kg,定量限为2.5 mg/kg。[结论]该方法简单、快速、可靠、灵敏、高效,可用于红薯粉条中溴酸钾的分析检测。     

涂层毛细管胶束电动色谱法快速测定三聚氰胺

[目的]初步建立了涂层毛细管胶束电动色谱快速测定三聚氰胺含量的简便方法.[方法]以40 mmol/L磷酸二氢钠和20mmol/L十二烷基硫酸钠（SDS）为分离缓冲溶液,以石英毛细管为分离柱,于234 nm波长处检测,采用峰高外标法定量.通过对分离缓冲液的组分、石英毛细管涂层、pH及电压对三聚氰胺分析的影响进行研究.[结果]该方法检出限0.48 mg/L,线性范围为10 ～ 500mg/L,线性相关系数0.998 5,三聚氰胺出峰时间小于0.8 min.[结论]通过改进样品处理和试验操作方法,提高回收率,可望满足乳制品中三聚氰胺的定性、定量测定.     

超声-微波协同萃取桑叶总黄酮的工艺研究

[目的]探讨超声-微波协同萃取法提取桑叶中总黄酮的工艺,以期优化超声-微波协同萃取法提取桑叶中总黄酮的最佳条件。[方法]通过单因素试验确定影响总黄酮提取的主要因素及最佳水平范围后,再通过正交试验确定影响总黄酮提取的主要因素的最佳水平。[结果]总黄酮提取的最佳条件为：超声-微波提取功率为400 W,提取液为体积分数为65%的乙醇溶液,料液比为1∶10（W/V）,提取时间为12 min,在此条件下桑叶总黄酮的提取率可达3.07%。[结论]该试验筛选出了超声-微波协同萃取法提取桑叶中总黄酮的最佳条件,该法具有工艺简单、快速、高效、环保等特点。     

基于微波提取法的茼蒿中黄酮类物质提取工艺优化

[目的]优化茼蒿中黄酮类物质的提取工艺。[方法]采用单因素试验考察乙醇体积分数、料液比、微波功率、提取时间等因素对茼蒿中黄酮类物质提取率的影响,并用正交试验对其提取工艺进行优化。[结果]微波提取茼蒿中黄酮类物质的最佳工艺条件为：乙醇体积分数60%,料液比1∶20（g∶ml）,微波功率为解冻档,提取时间为120 s。在此条件下提取茼蒿中黄酮类物质的提取率为0.319%。[结论]利用微波法提取茼蒿中总黄酮类物质,具有简单实用的特点,可大大缩短提取时间,达到省时、节能和高效的目的。     

复合酶在叶下珠有效成分提取中的应用

[目的]探索复合酶辅助提取叶下珠有效成分的工艺条件,为叶下珠的高效利用提供依据。[方法]以水为提取溶剂,以总黄酮提取得率为考察指标,选择料液比、提取温度、提取时间、纤维素酶浓度和果胶酶浓度等5因素4水平,用正交试验优选其最佳工艺条件。[结果]复合酶法提取叶下珠有效成分的最佳提取工艺为：提取时间2 h,料液比1∶25（g∶ml）,提取温度40℃,纤维素酶浓度1.4 g/L,果胶酶2.0 g/L。在此条件下,黄酮的提取率为1.589%。试验所考察的5个因素中,对提取率影响的主次顺序为：提取温度〉果胶酶浓度〉料液比〉提取时间〉纤维酶浓度。[结论]复合酶法提取省时、高效、低碳耗且提取率高,是一种对环境友好的方法。     

罗布麻组织培养快繁技术体系研究

[目的]研究罗布麻组织培养快繁技术,为其产业化栽培提供种苗来源。[方法]通过处理罗布麻种子获得无菌苗,切取无菌苗子叶、胚轴和茎尖置于不同激素配比的培养基上,比较不同激素浓度组合对子叶和胚轴分化、茎尖快繁、再生芽快繁和快繁苗生根的影响。[结果]子叶和胚轴分化形成再生芽的最佳培养基分别为MS+2.0 mg/L BA+0.03 mg/L NAA和MS+0.07 mg/L NAA;MS+2.0 mg/LBA+0.02 mg/L NAA为茎尖快繁的最佳培养基;MS+1.9 mg/L BA+1.7 mg/L NAA为再生芽快繁的最佳培养基;1/2MS+0.6 mg/LNAA为快繁苗的最佳生根培养基。[结论]该研究筛选出了罗布麻组培快繁技术体系的培养基激素配比,为罗布麻产业化栽培提供了技术保障。     

超声波提取-分光光度法测定海金沙草药中的总黄酮

[目的]优选海金沙草药中总黄酮的最佳提取工艺,并测定海金沙中总黄酮的含量。[方法]采用超声波提取海金沙中的总黄酮,以无水乙醇为提取剂,通过正交试验探讨溶剂浓度(乙醇浓度)、超声提取时间、温度和提取次数等条件对提取结果的影响,并采用分光光度法测定其含量。[结果]最佳提取条件为:乙醇浓度60%,温度25℃,超声时间10 min,提取次数为3次。将所得的结果与常规的水提取法和索氏提取法进行比较,其总黄酮的提取含量达到了4.12%。[结论]该方法与其他常规方法相比,具有简洁、方便、提取速度快和节能的优点,并提高了提取效率。