An X chromosome gene, WTX, is commonly inactivated in Wilms tumor

Wilms tumor is a pediatric kidney cancer associated with inactivation of the WT1 tumor-suppressor gene in 5 to 10% of cases. Using a high-resolution screen for DNA copy-number alterations in Wilms tumor, we identified somatic deletions targeting a previously uncharacterized gene on the X chromosome. This gene, which we call WTX, is inactivated in approximately one-third of Wilms tumors (15 of 51 tumors). Tumors with mutations in WTX lack WT1 mutations, and both genes share a restricted temporal and spatial expression pattern in normal renal precursors. In contrast to biallelic inactivation of autosomal tumor-suppressor genes, WTX is inactivated by a monoallelic "single-hit" event targeting the single X chromosome in tumors from males and the active X chromosome in tumors from females.     

Characterization, Imprinting Status and Tissue Distribution of Porcine GTL2 Gene

The callipyge （CLPG） phenotype, exhibiting polar overdominance （POD）, is an inherited skeletal muscle hypertrophy described in sheep. The callipyge locus maps to the distal portion of ovine chromosome 18 within the DLKI-GTL2 region and corresponds to human chromosome 14 and mouse chromosome 12. The POD phenomenon is confirmed to the homologous region of swine chromosome 7. In order to clone and investigate the expression of porcine GTL2 gene, DNA and RNA samples from 60-day-old F1 animals, generated with reciprocal crosses between Large White and Meishan breeds and their parents, were used. The authors showed that porcine GTL2 acted as a uoncoding RNA. cDNA samples exhibited maternal expression of the gene in the heart, liver, spleen, lung, kidney, stomach, small intestine, skeletal muscle, and fat in pigs, and a unique tissue-specific expression different from that of humans and mice. These results indicated that the gene was conserved in the pig, human, mouse, and bovine. It will be of interest to further study the gene functions in muscle growth and fat deposition.     

草鱼MHC I区基因的表达特征

为全面了解草鱼MHC I区基因及其表达特征,利用已知斑马鱼MHC I区基因序列,通过本地Blast得到草鱼MHC I区的部分基因序列。采用RT-PCR技术,检测MHC I区BRD2、KNSL2、RXRB、TAPBP、FABGL、MHC Ia、PSMB9以及TAP2等8个基因在健康草鱼各组织的表达水平。结果表明,除FABGL在肾脏表达量最高外,其他基因都在血液中的表达量最高。通过实时荧光定量PCR检测草鱼在嗜水气单孢菌感染后4、12、24、48及96h,MHC I区免疫相关基因在脾脏和肾脏中的表达情况。结果发现,BRD2表达量分别在12h和24h在肾脏和脾脏中达到最高;MHC Ia表达量在脾脏和肾脏中都先上升后下降,并都在24h达最大值;PSMB9表达量在脾脏先上升后下降,在12h达最大值,在肾脏中则先下降后上升,在24h达最大值;TAP2在脾脏和肾脏中整体呈先下降后上升的趋势,在24h都达最大值,并最后都回调至正常范围。BRD2、MHC Ia、PSMB9、TAP2的表达量在攻毒后都有显著性变化,表明这4个基因在草鱼免疫方面具有重要的作用。     

A mouse model of the aniridia-Wilms tumor deletion syndrome

Deletion of chromosome 11p13 in humans produces the WAGR syndrome, consisting of aniridia (an absence or malformation of the iris), Wilms tumor (nephroblastoma), genitourinary malformations, and mental retardation. An interspecies backcross between Mus musculus/domesticus and Mus spretus was made in order to map the homologous chromosomal region in the mouse genome and to define an animal model of this syndrome. Nine evolutionarily conserved DNA clones from proximal human 11p were localized on mouse chromosome 2 near Small-eyes (Sey), a semidominant mutation that is phenotypically similar to aniridia. Analysis of Dickie's Small-eye (SeyDey), a poorly viable allele that has pleiotropic effects, revealed the deletion of three clones, f3, f8, and k13, which encompass the aniridia (AN2) and Wilms tumor susceptibility genes in man. Unlike their human counterparts, SeyDey/+ mice do not develop nephroblastomas. These findings suggest that the Small-eye defect is genetically equivalent to human aniridia, but that loss of the murine homolog of the Wilms tumor gene is not sufficient for tumor initiation. A comparison among Sey alleles suggests that the AN2 gene product is required for induction of the lens and nasal placodes.     

欧洲鳗鲡免疫球蛋白M重链基因的原核表达与不同组织中表达变化的定量分析

通过RT-PCR技术从欧鳗(Anguilla anguilla)脾脏总RNA中获得了编码成熟免疫球蛋白(Ig)重链的基因序列(GenBank accession No.GQ249838),该序列长1 686 bp,编码562个氨基酸残基,分子质量为62.2 ku.将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明新增的66 ku蛋白条带与预期值相符,且能够与兔抗欧鳗IgM血清发生强烈的特异性反应,证实了欧鳗免疫球蛋白重链(IgH)基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;利用荧光定量PCR检测了Ig基因在欧鳗背肌注射山羊IgG前后不同组织的表达水平,结果显示欧鳗在免疫前后其肾脏与脾脏Ig基因的表达量均明显高于其它组织,在鳃、肌肉中的表达量也较高,而在肝脏、心脏中的表达量较低.此外,对同一组织免疫前后的Ig基因表达量比较发现,除肝脏外,其它组织Ig基因表达水平在免疫后均上升,在鳃和肌肉中达到显著水平,而在脾脏中达到极湿著水平.     

亚洲玉米螟两种漆酶基因OfLac1和OfLac2 cDNA 的克隆及基因表达

【目的】克隆亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）漆酶-1（OfLac1）和漆酶-2（OfLac2）基因;研究OfLac1和OfLac2在亚洲玉米螟不同发育阶段和不同组织中的表达特异性;分析蜕皮激素处理亚洲玉米螟后OfLac1和OfLac2基因表达量的变化;比较OfLac1和OfLac2表达模式的差别,推测其生理功能。【方法】根据已知的其他昆虫中Lac-1和Lac-2的保守氨基酸序列分别设计引物,以亚洲玉米螟白蛹时期提取的RNA反转录合成的cDNA为模板,通过PCR扩增OfLac1和OfLac2的保守区。然后根据所得的保守区片段分别设计基因特异性引物,采用RACE方法分别克隆OfLac1和OfLac2的3′和5′端序列,通过拼接获得OfLac1和OfLac2的基因全长。收集5龄第4天亚洲玉米螟的表皮、中肠、脂肪体、丝腺、气管、马氏管、精巢7种不同组织材料,通过半定量PCR分析OfLac1和OfLac2在不同组织中的基因表达模式。收集从卵到成虫29个不同生长发育时期的亚洲玉米螟作为材料,采用实时荧光定量PCR分析OfLac1和OfLac2在不同发育时期的基因表达水平。选取5龄第2天亚洲玉米螟幼虫进行蜕皮激素注射,分别在1、4、8、12和24 h后取样,利用实时荧光定量PCR研究OfLac1和OfLac2在蜕皮激素诱导下的基因表达水平。【结果】克隆获得亚洲玉米螟OfLac1和OfLac2的 cDNA序列。OfLac1全长3 065 bp,其中5′非编码区222 bp,3′非编码区440 bp,开放阅读框2 403 bp,共编码800个氨基酸,其编码的蛋白分子质量约为90.6 kD,理论等电点pI为5.34;OfLac2全长3 405 bp,其中5′非编码区162 bp,3′非编码区960 bp,开放阅读框2 283bp,共编码760个氨基酸,其编码的蛋白分子质量约为84.0 kD,理论等电点pI为6.43。通过SignalP分析发现,OfLac1在N端包含一个长为22个氨基酸的信号肽,OfLac2在N端包含一个长为23个氨基酸的信号肽,均为分泌蛋白质。基因表达模式分析表明,在发育过程中,OfLac1主要在成虫中表达,在其他发育时期表达量较低;OfLac2在每个幼虫龄期的末期表达水平上调,在幼虫化蛹过程中的预蛹期表达量最高;在不同组织中,OfLac1在马氏管和中肠中表达量最高,在气管和表皮中的表达量较低,在精巢、丝腺和脂肪体中几乎不表达;OfLac2在中肠和丝腺中表达量最高,在气管和表皮中的表达量较低,在精巢、马氏管和脂肪体中几乎检测不到表达。将蜕皮激素20E注射到亚洲玉米螟体内,OfLac1在注射24 h后表达量明显上调,OfLac2在注射12 h后表达量开始上调,在24 h后上调最明显。【结论】克隆得到亚洲玉米螟两种漆酶OfLac1和OfLac2的cDNA序列。两种漆酶基因的表达模式存在明显差别,但都受蜕皮激素的调控。OfLac2可能参与蜕皮过程表皮褐化。     

小麦条锈菌一个产孢相关基因PsCon1的克隆及表达特征分析

【目的】克隆小麦条锈菌产孢相关基因PsCon1,分析其在病菌不同发育时期的表达水平。【方法】利用RT-PCR和PCR技术克隆PsCon1的cDNA序列和基因组序列,采用生物信息学技术预测分析该基因的DNA序列结构及其编码蛋白的保守域等基本特性,运用实时荧光定量RT-PCR技术分析PsCon1在夏孢子,芽管以及不同侵染时间的表达水平。【结果】PsCon1由3个外显子和2个内含子构成,开放阅读框长为252bp,编码83个氨基酸;编码的蛋白PSCON1不含跨膜区,无信号肽,定位在细胞质,具有2个conidiation-specific protein6保守结构域。PsCon1与小麦秆锈菌核苷酸序列的一致性在外显子区为78%,内含子区为43%,与小麦秆锈菌(Puccinia graminis)的亲缘关系最近,与烟曲霉(Aspergillus fumigatus)和费氏新萨托(Neosartorya fischeri)的亲缘关系次之。PsCon1在小麦条锈菌萌发夏孢子时期基因表达量为新鲜夏孢子中的1.69倍。在亲和组合中,PsCon1在小麦条锈菌接种小麦后6h和24h表达量最高,分别为在新鲜夏孢子中表达量的3.21倍和2.91倍;在接种后24h至168h,基因表达基本呈下调趋势,在接种后168h的表达量最低,仅为夏孢子时期的0.0004倍,在接种后216h和264h,表达量有所增加,表达量约为接种后168h的15倍。在非亲和组合中,PsCon1在小麦条锈菌接种小麦后36h表达量最高,但仅为新鲜夏孢子基因表达量的0.13倍,基因表达总体呈下调趋势。【结论】PsCon1参与了小麦条锈菌对小麦的侵染,可能作为一个致病相关基因影响了条锈菌芽管和吸器的形成,同时促进了条锈菌在侵染过程中的产孢。PsCon1的克隆为进一步研究该基因在小麦与条锈菌互作过程中的功能奠定了基础。     

狮头鹅与乌鬃鹅Myostatin的序列和表达分析比较

Myostatin（MSTN）是调控肌肉生长发育的重要基因.本研究旨在分析该基因在广东地方鹅种狮头鹅和乌鬃鹅中序列和表达的差异.研究使用rapid-amplification of cDNA ends（RACE）技术克隆了两鹅种MSTN基因的ORF、5′和3′UTR序列,对序列进行生信分析,并对MSTN在两鹅种不同组织,及胚胎15、23 d和1 日龄的表达进行了检测. 结果发现,两鹅种MSTN基因的ORF区和3′UTR区DNA序列差异较小,5′UTR区差异较大,狮头鹅该区域存在35 bp DNA片段缺失. 两鹅种MSTN ORF区DNA和氨基酸序列与浙东白鹅、绿头野鸭和鸡一致性最高,DNA序列一致性在94.77%以上,氨基酸序列一致性在98.40%以上. MSTN在两鹅种1日龄的腿肌中特异高表达,在心、肝、脾、肺、肾和小肠中不表达或微量表达,在胚胎15 d到1日龄的腿肌中表达逐渐升高,自胚胎期23 d起,MSTN在乌鬃鹅中的表达显著高于狮头鹅.研究为进一步探究MSTN在两鹅种胚胎肌肉发育时期可能发挥的不同调控功能奠定了基础.     

一种三角帆蚌肌浆网Ca2+-ATP酶基因cDNA的全长克隆与表达分析

采用RACE技术,从三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)鳃组织中成功克隆得到一种肌浆网Ca²⁺-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA)基因的全长cDNA序列,共3 326 bp,包含201-bp 5’-UTR区域、3 060-bp编码框(ORF)和65-bp 3’-UTR。ORF共编码1 019个氨基酸,预测无信号肽。该基因氨基酸序列呈现出典型的Ca²⁺-ATP酶特征,由Cation_ATPase_N、E1-E2_ATPase、Hydrolase、Cation_ATPase_C四种类型结构域组成,其内含SERCAs的常见结构组成包括磷酸化区域、异硫氰酸荧光素位点、FSBA结合位点、受磷蛋白结合区以及毒胡萝卜素位点。分析显示,该基因序列高度保守且与海洋软体动物具有最高同源性。荧光定量PCR检测,该基因在三角帆蚌外套膜、斧足、鳃、肝胰腺、性腺等5个组织中均有表达,且在鳃、外套膜、肝胰腺组织中表达较高。不同Ca²⁺浓度处理试验的结果表明,随水体中Ca²⁺浓度逐渐升高,该基因在外套膜中的表达水平呈先下降后上升趋势,并在Ca²⁺浓度为60 mg·L^-1时达到最低值,80 mg·L^-1时达到最高值。同时在60 mg·L^-1 Ca²⁺浓度条件下,外套膜中SERCA基因的表达量随时间推移先上升,并于48 h时达到最高,而后逐渐下降。上述结果为进一步深入研究SERCA基因的功能及其调控机理奠定了基础。     

妊娠后期胎儿宫内生长受限对出生后羔羊内脏器官的影响

【目的】研究妊娠后期胎儿宫内生长受限对出生后羔羊内脏器官的影响。【方法】选择健康的蒙古绵    羊45只（经同期发情且同期受孕）,妊娠（90±1） d分为自由采食组（CG）、0.33 MJ ME•kgw-0.75•d-1（RG1）以及0.175 MJ ME•kgw-0.75•d-1（RG2）3个营养水平处理组,进行不同营养水平的限饲饲养。各组分别于羔羊初生及28周龄时选择4只屠宰,取出内脏。【结果】妊娠后期不同营养水平限饲母羊,严重限制了RG1（P＜0.05）、RG2（P＜0.01）组羔羊的平均初生体重：①初生时,RG1组羔羊仅肺脏重和肺脏组织总DNA含量显著低于CG组（P＜0.05）,脾脏重及脾脏组织总DNA含量极显著低于CG组（P＜0.01）;而 RG2组羔羊肺脏和脾脏均显著低于CG组（P＜0.01）,心脏、肝脏、肾脏、总胃及小肠重均显著低于CG组（P＜0.05）;其中,心脏和肾脏总DNA含量、肺脏总DNA含量和蛋白与DNA含量比、肝脏组织蛋白和DNA含量比均显著低于CG组（P＜0.05）。②28周龄时,RG1组胎儿期生长受限的肺脏、脾脏重及其总DNA含量与对照组差异不显著（P＞0.05）;除心脏外,RG2组胎儿期生长受限的肝脏、肺脏及脾脏重出生后经过28周的生长与CG组差异不显著（P＞0.05）;RG2组胎儿期降低的肾脏、脾脏细胞总DNA含量,肝脏细胞蛋白和DNA比,在试验结束羔羊28周龄时与CG组差异不显著（P＞0.05）,并且肺脏细胞蛋白和DNA比显著高于CG组（P＜0.05）,而心脏和肺脏组织总DNA含量仍显著低于CG组（P＜0.05）。【结论】妊娠后期胎儿宫内生长受限通过对其胎儿内脏器官细胞增殖与增肥不同程度的影响而改变了出生后羔羊内脏器官的生长发育轨迹。