猪、鸡源分离粪肠球菌的核糖体分型及耐药性分析

对上海地区1个规模化养猪场和1个规模化养鸡场分离鉴定的40株粪肠球菌,采用微量肉汤稀释法对12种抗菌药物进行药敏试验,采用Riboprinter^®微生物基因指纹鉴定系统检测分离菌株的基因指纹图谱,分别检测分离菌株中的核糖体型和耐药性。结果表明,在40株粪肠球菌中,80%以上为多重耐药菌株,有4株猪源粪肠球菌对万古霉素耐药,其中有2株表现为对万古霉素高度耐药（MIC>64 mg/L）,且对链霉素和庆大霉素同时表现为高度耐药（MIC>2 048 mg/L）。从耐药表型和核糖体分型共同分析粪肠球菌的耐药性,发现多重耐药性严重,同一核糖体型菌株的耐药表型并非完全一致。     

福州动物园工作人员及普通人员高水平耐庆大霉素肠球菌耐药表型检测

为了解福州动物园饲养员和兽医以及普通人群的细菌耐药现状,选用肠球菌为指示菌,采用琼脂平板筛选法（ADSP法）筛选高水平耐庆大霉素肠球菌（HLGRE）;根据美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的微量肉汤稀释法测定耐药菌株对6种抗菌药物的耐药性;用PCR法对分离出的不同来源的高水平耐氨基糖苷类肠球菌进行菌种的鉴定.从所有37个样本中共筛选出15株HLGRE.其中动物园饲养员及兽医的分离率为62.50％,而普通人群的分离率为23.81％,差异显著.分离到的肠球菌中,以粪肠球菌为主要,根据药敏实验结果显示,不同人群的HLGRE均以红霉素和土霉素的耐药率最高,均达到100％;以氨苄西林和万古霉素的耐药率最低.     

北京市伴侣动物源肠球菌的抗菌药物耐受情况调查

为研究北京市伴侣动物源肠球菌对常见抗菌药物的耐受情况,于2015年5月至2016年1月以北京市某宠物医院门诊就诊犬、猫作为采样对象,采集犬、猫自然排出的粪便作为样品,共得到样本320份。采用选择性培养基进行菌株分离和VITEK-2型全自动微生物分析仪进行肠球菌的鉴定;对分离鉴定的菌株进行8类11种常见抗菌药物敏感性试验;同时进行高水平庆大霉素和高水平链霉素耐受的检测试验,对受试肠球菌的耐药性和多重耐药性进行分析。共得到菌落形态及生化特性不同的非重复的肠球菌318株,其中粪肠球菌（49.06%）和屎肠球菌（29.87%）分离率较高。受试肠球菌对高水平庆大霉素和高水平链霉素的耐药率分别为39.94%和43.40%,对四环素（78.62%）、红霉素（67.30%）和奎诺普丁-达福普汀耐药率（43.71%）较高,对替加环素全部敏感,对万古霉素和呋喃妥因非耐药率也很高（均为98.74%）。受试肠球菌对1类到7类抗菌药物有不同程度的耐药性,多重耐药现象普遍,多重耐药率高达57.23%。耐受4类抗菌药物的数量最多（n=65株）。经分析共得到44种不同的耐药谱,以耐受4类药物的红霉素-奎诺普丁-达福普汀-四环素-高水平氨基糖苷类耐药谱占比最高（45/318,14.15%）。本研究证实受试的北京市伴侣动物源肠球菌对常见抗菌药物的耐药程度较高,多重耐药情况普遍存在,应加强对其耐药性的监测工作。     

95个猪场大肠杆菌耐药表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查

为调查我国规模化猪场大肠杆菌细菌耐药性及其氨基糖苷类药物耐药基因的流行状况,采用K—B（Kirby-Bauer）法检测2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种抗生素的耐药性。结果表明：仅有多黏菌素B（85．6％）、头孢噻肟（85．3％）、阿米卡星（84．8％）和大观霉素（65．0％）相对敏感。480株大肠杆菌以多重耐药菌株为主,其中13、14、15、16和17重耐药较多,并且有26株18重耐药,14株19重耐药。采用WHONET5．4软件分析大肠杆菌耐药性,对阿米卡星、头孢噻肟和多黏菌素B耐药的猪场相对较少,分别是29、26和24个。采用PCR方法检测氨基糖苷类相关耐药基因,耐药基因检出率分别是aadA1（65．89％）、aaC2（52．35％）、aaC4（12．91％）和aphA3（10．95％）。耐药基因型检出率较高的是aadA1／aaC2（29．61％）、aadA1（18．04％）。Excel软件统计相关耐药基因的猪场分布,表明耐药基因型aadA1／aaC2（43）、aadA1／aaC2／aaC4（20）和aadA1／aaC2／aaC4／aphA3（20）在猪场分布较普遍。耐药基因和耐药性比较表明大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药表型与耐药基因型符合率较高的是阿米卡星（68．39％）。本研究表明猪肠道内常在大肠杆菌菌群不仅产生较高的多重耐药性,也成为耐药基因的储存库,对猪场环境中耐药基因在致病菌和非致病菌间传播发挥重要作用,能够作为检测细菌耐药性的指示菌。     

氟苯尼考联合多西环素缩小猪源大肠杆菌耐药突变选择窗

为使临床合理使用抗菌药物,防止细菌耐药性的产生提供理论依据。本研究探讨在体外初步联合氟苯尼考和多西环素缩小猪源大肠杆菌耐药突变选择窗（MSW）。应用琼脂二倍稀释法,肉汤法富集10^11：FU/mL细菌分别测定了氟苯尼考、多西环素对15株猪源大肠杆菌临床分离株的最小抑菌浓度（MIC）、防耐药突变浓度（MPC）,并计算出它们各自的MSW,对于2种药物MSW均比较大的菌株S8、S11、S12进行氟苯尼考联合多西环素用药,测定其MPC和MSW。结果显示,从吉林省分离的15株猪源大肠杆菌对氟苯尼考、多西环素耐药率分别为33．3％和46．7％;MPC大于100mg／L的分别占到40％和13．3％;MSW大于50的分别占40％和0．067％。对于S8、S11、S12氟苯尼考联合多西环素用药,联合指数分别为0．75、0．09、0．438,均呈现相加或协同作用。联合用药可使氟本尼考对S8、S11、S12菌株的MPC分别由原来的256．0、128．0、460．8mg／L,变为8．0、8．0、16．0mg／L,均关闭了MSW。结果表明,氟苯尼考联合多西环素可以缩小或关闭猪源大肠杆菌耐药选择突变窗。     

鲜蛋表面屎肠球菌耐药性及万古霉素vanA基因检测

为了研究新鲜鸡蛋表面屎肠球菌耐药性和万古霉素A(vanA)基因的携带情况,试验在养鸡场收集新鲜鸡蛋,分离蛋壳表面的屎肠球菌,用16S rDNA通用引物对分离的屎肠球菌进行种属鉴定,K-B纸片琼脂扩散法进行耐药性分析,并检测耐万古霉素屎肠球菌携带vanA基因的情况。结果表明:革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性单个、成对或短链状排列的圆形菌体,符合屎肠球菌的染色和形态特征;从200枚鸡蛋样品中分离到38株屎肠球菌,分离率为19%;分离到的屎肠球菌对14种抗生素表现出不同程度的耐药性,耐药谱广,最多发现8重耐药菌;在5株耐万古霉素的菌株中检测到了vanA基因。说明新鲜鸡蛋蛋壳表面的屎肠球菌对抗生素耐受性较高,对屎肠球菌特别是耐万古霉素屎肠球菌的监测具有公共健康意义,需要进一步调查以评估食源性传播给人类带来的风险。     

湖北地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与耐药性分析

本研究旨在分离鉴定湖北地区致奶牛乳房炎的病原菌，鉴定细菌的耐药特征．为奶牛乳房炎防治提供理论依据。从湖北两个主要奶牛小区的9个不同规模的奶牛场采集牛奶样本200份，经检测．其中3份为临床乳房炎样本，49份为隐性乳房炎。两地区隐性乳房炎的检出率分别为36．4％（20／55）与20％（29／145）。两地区乳房炎牛奶的细菌种类分布也各不同。其中武汉东西湖地区停乳链球菌的分离率最高，占33.3％（8／24）．而宜昌夷陵区以金黄色葡萄球菌分离率最高，占29％（9／31），其次为无乳链球菌，占25．8％（8／31）。从乳房炎牛奶中共分离到7种细菌共55株，其中金黄色葡萄球菌11株，表皮葡萄球菌10株，无乳链球菌10株，停乳链球菌14株，乳房链球菌2株，大肠埃希氏菌4株，克雷伯氏菌4株。分别对所有分离株进行12种药物的敏感性试验，结果表明所有菌株对先锋V、氧氟沙星均高度敏感．对临床常用的青霉素、链霉素具有较高的耐药性。     

福州动物园动物高水平耐庆大霉素肠球菌耐药表型检测

为了解福州动物园动物细菌耐药现状,选用肠球菌为指示菌,采用琼脂平板筛选法(ADSP法)筛选高水平耐庆大霉素肠球菌(HLGRE)。根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法测定耐药菌株对6种抗菌药物的耐药性,用PCR法对分离出的不同来源的高水平耐氨基糖苷类肠球菌进行菌种鉴定。从动物园圈养野生动物共分离出78株HLGRE,不同动物来源的分离率不同,其中草食动物HLGRE分离率最低,占55.56%;肉食动物HLGRE分离率最高,占84.38%。药敏试验结果显示,不同动物来源的HLGRE均对红霉素和土霉素的耐药率最高,分别为100%和96.1%,对氨苄西林和万古霉素的耐药率最低。     

值得警惕的鸡万古霉素耐药性肠球菌

人类通过不断的研制出新的抗菌药物来对付细菌日益广泛复杂的耐药性,但伴随着一种新抗菌药物的临床应用随之而来就是细菌耐药性的产生。肠球菌(Enterococci)为动物生殖道和胃肠道常在菌,当机体抵抗力降低时,可引起鸡败血症、牛乳房炎、牛前心包炎及狗尿道感染。早期已知可引起感染性疾病的肠球菌主要包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、孤立肠球菌,近年来又增加了鸡肠球菌、绵子糖肠球菌和卡氏肠球菌。肠球菌的耐药性在70年代是表现对氨基糖甙类药物的耐药,如庆大霉素、链霉素等。80年代相继出现对β-内酰氨类药物以及糖肽类药物的耐药,如万古霉素和Teicoplanin等,90年代则表现为多重耐药性。     

宠物医院犬猫源肠球菌的耐药性检测及其耐药基因optrA的流行特征分析

为了解吉林地区宠物源肠球菌的耐药情况和噁唑烷酮类耐药基因optrA在宠物源肠球菌中的流行分布特征，本研究对来自长春市和吉林市4家宠物医院的200份宠物肛门拭子样品，利用肠球菌琼脂培养基进行细菌的分离，利用16S r RNA基因的PCR扩增及测序进行菌种的鉴定，采用琼脂稀释法对11类13种抗菌药物进行药敏试验，利用PCR检测酰胺醇类耐药基因fexA、fexB和噁唑烷酮类耐药基因cfr、optrA，并对携带optrA基因的菌株进行全基因组测序。结果显示，本研究分离到96株肠球菌；药敏试验结果显示，宠物源肠球菌对克林霉素、四环素、沃尼妙林、庆大霉素和红霉素耐药严重，耐药菌株分别占87.5%、76.0%、72.9%、65.6%和55.2%，其次对环丙沙星、青霉素、氨苄西林和利福平耐药的菌株分别占33.3%、24.0%、20.8%和12.5%，对氟苯尼考耐药的菌株相对较少，占5.2%，检测到1株对万古霉素耐药的屎肠球菌，未检测到对利奈唑胺和替加环素耐药的菌株。PCR检测到3株同时携带optrA及fexA耐药基因的粪肠球菌，且其均呈多重耐药性。对携带optrA基因肠球菌的全基因组测序结果显示，3株...     

β-内酰胺类药物对临床分离猪链球菌2型的体外抗菌活性

采用微量稀释法测定了32种药物对临床分离猪链球菌的体外最小抑菌浓度（MIC），以美国临床检验标准委员会（NCCLS）的临界浓度做为判断标准，判定了猪链球菌2型对10种β-内酰胺类药物的耐药性。结果表明，临床分离的菌株以耐药菌为主，头孢他定（CTD）、头抱噻吩（CFT）、头抱曲松（CRX）、阿莫西林／舒巴坦钠（AMO／SUL）对猪链球菌2型的耐药率最高，达100%；其次为青霉素G（PEN）、苯唑西林（OCL）、哌拉西林钠（PPC），达90％以上，只有头孢噻肟（CTX）有微弱的抗菌活性，其耐药率也达82．6%。MIC50 0．5～32mg／L，MIC90 2～256mg／L。猪链球菌2型对辟内酰胺类药物耐药性已十分严重，应引起足够重视。     

石河子地区奶牛乳房炎源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解石河子地区奶牛乳房炎源肠球菌的分布情况及耐药性,采集石河子地区乳房炎奶牛奶样进行肠球菌的分离,通过生化特性鉴定和16S rRNA通用引物进行PCR扩增,选用19种抗菌药物对肠球菌进行了耐药性试验。结果表明:从患乳房炎奶牛的乳样中分离出10株肠球菌;通过生化特性鉴定和16S rRNA通用引物进行保守区PCR扩增后测序确定其中有4株是屎肠球菌,6株是粪肠球菌;分离菌株对杆菌肽、新霉素、青霉素、头孢氨苄和卡那霉素基本全部耐药,对氯霉素、氟苯尼考和恩诺沙星相对敏感,两种肠球菌中未发现万古霉素耐药株。     

广东省养禽场肠球菌耐药性及毒力因子流行分布特征

旨在调查和分析广东省养禽场肠球菌的亚型屎肠球菌和粪肠球菌耐药性及其毒力因子流行分布特征,为控制禽源肠球菌耐药性传播、保障公共卫生安全提供理论依据。作者于2018年从广东省4个养禽场采集肠道样品493份,进行屎肠球菌和粪肠球菌的分离鉴定;采用琼脂二倍稀释法测定肠球菌的最小抑菌浓度（MIC）;PCR方法检测肠球菌的耐药基因和毒力基因。结果显示：1）共分离到125株肠球菌,其中粪肠球菌84株（鸡源66株,鸭源18株）;屎肠球菌41株,均来自鸡肠道样本。2）菌株对四环素、多西环素、红霉素几乎全部耐药,对氟苯尼考和氯霉素的耐药率高达89.60%和74.40%。屎肠球菌耐药率普遍高于粪肠球菌,而粪肠球菌对环丙沙星和利奈唑胺的耐药率高于屎肠球菌;鸭源粪肠球菌对利奈唑胺的耐药率（94%）显著高于鸡源粪肠球菌（39.4%）,屎肠球菌对利奈唑胺均敏感。从鸡分离的1株粪肠球菌对万古霉素耐药。3）耐药基因在屎肠球菌中的检出率高于粪肠球菌,鸭源分离株检出率高于鸡源。耐药基因tetL、fexA、ermB最为流行,检出率均高于90%。其次是optrA基因,检出率为73.60%,poxtA和fexB的检出率均低于20%。在3株鸭源粪肠球菌中检测出cfr基因。4）已检测的毒力基因中efaA的携带率最高,为63.04%（58/92）,其他依次为gelE（54.35%,50/92）、ace（47.83%,44/92）、asa1（44.57%,41/92）。对环丙沙星及高浓度氨基糖苷类耐药的菌株及携带cfr基因的菌株,大多携带agg、asal、gelE或ace。本研究显示养殖场禽源肠球菌耐药严重,鸭源肠球菌对利奈唑胺耐药率高,耐药基因和毒力基因流行且多样,且检测出人医临床重要抗生素耐药基因,应加强对养禽场肠球菌耐药性监测。     

猪合环境中金黄色葡萄球菌耐药性及其在合内外环境中的传播

为检测各猪场中金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药程度,分析耐药性在舍内外的传播,从6个养猪场的猪粪便及猪舍内、外环境空气中分离到149株金黄色葡萄球菌,通过K—B纸片扩散法对其耐药性进行检测。结果发现,从6个猪场的粪便和空气样品中分离到的金黄色葡萄球菌菌株的耐药情况十分严重。此外,分离到的金黄色葡萄球菌菌株还呈现多重耐药,4～6重耐药的菌株居多,分别达16．1％（24／149）、32．9％（49／149）、14．8％（22／149）,9重耐药菌有3株。尤其值得注意的是,从养猪场猪粪便及猪舍内、外环境空气（上风向10、50m,下风向10、50、100、200m）分离的部分菌株其耐药性完全相同。结果证明,猪体产生的具有耐药性的金黄色葡萄球菌能产生气溶胶,并且能够借助舍内外的气体交换传播到舍外环境中去,视气象条件扩散一定的距离,不仅导致传染病的流行,而且对社区的公共卫生形成威胁。     

武汉市马源肠球菌的耐药性分析

肠球菌(Enterococci)作为条件性致病菌广泛存在于人和动物中,其耐药性和致病性随地区和动物来源的不同而变化。据现有数据显示,关于武汉市马源肠球菌的耐药性研究相当匮乏。以武汉市2个马术俱乐部42匹温血马为主要研究对象,分别对马匹粪便进行样品搜集并进行耐药研究(氨苄西林,四环素,庆大霉素,头孢氨苄,恩诺沙星,氯霉素,诺氟沙星,红霉素,万古霉素、林可霉素等)。结果显示,从42份样本中分离出10株粪肠球菌,分离率为23.8%;药敏试验结果显示,分离株中有6株为庆大霉素耐药,6株为头孢类抗生素耐药,2株为庆大霉素和头孢类抗生素混合耐药,其他药物未产生耐药性。结果表明该俱乐部马源肠球菌已对庆大霉素和头孢类抗生素产生严重耐药性,试验为该马术俱乐部用药提供了理论依据。     

动物源性肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

了解肠球菌的耐药性,对控制该菌引起的感染,研制新一代抗菌药物具有重要价值。本试验从84种样品中分离鉴定出69株肠球菌,通过抗生素耐药性试验,发现肠球菌对多数抗生素表现出不同程度的耐药性,如青霉素耐药达52.2%、四环素达71.0%、万古霉素达85.5%。本文对肠球菌的分离与鉴定,药敏试验及风险分析三个方面作了分析和阐述。     

五种动物源肠球菌耐药性监测

为了解不同动物源肠球菌耐药性,试验选用10种常用抗生素,采用统一材料、方法(KB法)和判断标准[美国临床实验室标准化协会(CLSI)2007年版]对从5种不同动物源(人、狗、鸡、牛、猪)粪便中分离得到的肠球菌进行耐药性检测。结果表明:共分离得到肠球菌646株,包括人源肠球菌146株、狗源肠球菌138株、鸡源肠球菌128株、牛源肠球菌111株、猪源肠球菌123株;各动物源肠球菌对四环素和利福平耐受性偏高,对青霉素G、万古霉素和高浓度庆大霉素耐受性偏低,其中耐万古霉素肠球菌47株,平均耐药率为7%;各动物源肠球菌的耐药性表现为鸡源肠球菌最强,猪源肠球菌、狗源肠球菌、人源肠球菌次之,牛源肠球菌最低。说明滥用抗生素已造成人和畜禽动物肠球菌较为普遍的耐药,应引起临床及畜禽业高度重视。     

湖南省猪源粪肠球菌耐药性分析

为了解湖南省猪源粪肠球菌临床分离株的耐药性及各耐药基因的分布情况,使用K-B法检测了42株猪源粪肠球菌对11种抗生素的敏感性,采用PCR方法检测了粪肠球菌中8种耐药基因的分布情况。结果显示,湖南省临床分离的42株粪肠球菌对大部分的抗生素高度耐药,对四环素、氯霉素、苯唑青霉素、红霉素、米诺霉素、左氧氟沙星、高浓度庆大霉、高浓度链霉素、环丙沙星、万古霉素、青霉素G的耐药率依次为100%、92.9%、88.1%、83.3%、81%、57.1%、52.4%、47.6%、45.2%、31%、11.9%;耐药基因的检出率为Aac(6)'/aph(2')97.6%、ant(6)'-Ⅰ90%、aph(3)'-Ⅲ76.2%、tet M 90.5%、erm B 73.8%、Van A 4.8%、Van B 54.8%、Van C 88.1%。从表型与基因型共同分析粪肠球菌的耐药性,发现粪肠球菌的多耐药性严重,其耐药表型与耐药基因并不完全一致。     

林麝源屎肠球菌LS170308株多重耐药基因岛PRI1分析

屎肠球菌作为条件致病菌在临床上报道的越来越多,主要引起宿主心内膜炎、败血症等,目前关于屎肠球菌的耐药性研究已日益突出,其原因主要在于该菌对β-内酰胺类药物天然耐药及对万古霉素等糖肽类抗生素耐药性不断增强,但该菌耐药性传播机制仍在进一步研究中。本研究拟描述1株林麝源屎肠球菌多重耐药基因岛的特征,显示出该基因岛在不同属细菌中的传播。采用单分子测序技术对这株林麝心源屎肠球菌进行从头测序,同时采用分子生物学工具对该基因岛进行分析。结果显示:这株屎肠球菌染色体上携带多个耐药基因,其中携带ANT(9)、ErmA的Tn554转座酶和携带AAC(6′)-le-APH(2″)-la的一对插入元件IS256共同构成的一个多重耐药基因岛来自金黄色葡萄球菌,该基因岛对大环内酯类、林可酰胺类及氨基糖苷类抗生素具有抗性。结果表明从死亡林麝内脏组织中分离得到1株屎肠球菌,该菌株携带有一个多重耐药基因组岛PRI1,该类型基因岛目前在屎肠球菌中并未有相关报道,同时这株菌来自野生动物,可为野生动物源细菌耐药性传播提供数据支持。     

牦牛源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500 bp特异性条带。16S rRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。