适于SDSPAGE分析的高粱叶片蛋白质提取方法

为了探索适于高粱叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,对TCA/丙酮沉淀后的蛋白质分别用裂解液Ⅰ(尿素+硫脲+CHAPS+DTT)和裂解液Ⅱ(尿素+DTT)2种裂解液进行裂解,用改良的Bradford法进行定量分析,并进行SDS-PAGE分离检测。结果表明,裂解液Ⅰ所得蛋白质质量浓度(2.538g/L)高于裂解液Ⅱ所得蛋白质质量浓度(1.905g/L),且两者呈极显著差异(P<0.05),但裂解液Ⅰ所得蛋白质电泳条带出现1条杂带;而裂解液Ⅱ所得蛋白质能满足上样要求且电泳条带清晰无杂带。因此,TCA/丙酮沉淀并用裂解液Ⅱ进行裂解的方法适用于高粱叶片的SDS-PAGE分析。     

水浸提制备待测液火焰光度法测定牡丹叶中钾含量的方法研究

烘干、磨碎、过40目筛的牡丹叶样品，用水浸提法、醋酸铵浸提法及硫酸消化法制备待测液，火焰光度法测定牡丹叶钾的百分含量分别为0．978，9．0825，0．9788，显著性检验结果表明三者相关不显著，说明在测定牡丹叶含量时，可以用水浸提法制备待测液。     

花饮料中沉淀成分的分析

为了解花饮料中化学沉淀的本质 ,寻求防止花饮料产生沉淀的方法和措施 ,试验对复合花饮料生产中所用的浸提液、多道过滤液及成品中可能导致沉淀的蛋白质、单宁、果胶及矿质元素等成分进行了跟踪分析。结果表明 ,引起花饮料产生沉淀的主要成分是蛋白质、单宁和果胶 ,且蛋白质、单宁、果胶的沉淀具有明显相关性 ,而小分子有机物和矿物质不会引起花饮料产生沉淀 ;在浸提时加入 0 .15 g/ kg蛋白酶、0 .2 5 g/ kg果胶酶 ,可使蛋白质和果胶彻底分解 ;在浸提液中加入 0 .6 0 g/ kg聚乙烯吡咯烷酮可去除单宁 ,同时结合超滤可充分防止花饮料产生沉淀。     

沼液中乙酸含量比色测定法研究

为了建立一种能用于沼液中乙酸含量灵敏准确分析的常规检测方法,通过对沼液沉淀、脱色及过滤处理获得无色透明待测液,再利用乙酸与FeCl₃反应形成乙酸铁红色化合物的特性,研究了沼液中乙酸含量比色分析的可行性及准确度。结果表明：沼液预处理时,沉淀剂吸附乙酸导致待测液中乙酸测值偏低,在沉淀剂用量固定时其负偏差为一常数,可用该常数对乙酸测定结果进行校正;将脱色时间控制在10 min以内时,加入活性炭脱色剂对乙酸测定结果无影响;沼液预处理获得的含乙酸待测液与100.0 g·L^-1FeCl₃显色剂反应得到乙酸铁化合物,其在550 nm处的吸光值在显色后3.0~6.0 h内基本不变,其相对偏差为±5%;在沼液预处理待测液中,用乙酸铁比色法测定乙酸时的平均回收率为97.52%（RSD为1.44%,n=5）。该研究表明,乙酸铁比色法简单、灵敏且准确度高,适用于沼液中乙酸含量的常规测定。     

碱法提取东亚飞蝗蛋白质的工艺条件

采用稀碱法对东亚飞蝗蛋白质的提取条件进行了研究,主要讨论了碱浓度、料液比、粒度、浸提时间、沉淀pH、沉淀时间等条件对蛋白质提取率的影响.单因素试验结果表明,较优的提取工艺条件为稀碱浓度1.5%(W/V),浸提时间2 h,虫粉粒度80目,料液比1:20,沉淀pH值4.5,沉淀时间1 h.     

酚二磺酸比色法测定叶菜类硝酸盐的探讨

酚二磺酸法是测定蔬菜中硝酸盐含量的常用方法,但是,该方法的应用受测定条件的制约且操作繁杂。为了快速、准确地测定蔬菜中的硝酸盐含量,本研究探讨了菜浆的制备方法、提取方法、待测溶液制备方法、反应条件对叶菜类蔬菜中硝酸盐测定的影响。结果表明：(1)组织捣碎机法适用于制备菜浆,所获得的菜浆硝酸盐含量与研磨法制备的量相当;(2)常温水提法可很好地提取硝酸盐,其提取量与煮沸法的无显著差异;(3)过滤法与离心分离法获得的待测液中硝酸盐含量无显著差异;(4)在干燥条件下冷却干燥后的待测物及进行显色可显著提高测定的准确度。     

原子吸收光谱法测定土壤中铅的不确定度评定

根据土壤中铅的测定方法及测定程序,分析了原子吸收光谱法测定铅含量的不确定度来源,并对其待测液中铅浓度、重复性、待测标准溶液产生的不确定度分量进行了评估,结果表明待测液铅浓度的相对合成不确定度(1.7×10-2)＞样品测量重复性的相对合成不确定度(0.71×10-2)＞待测标准溶液系列的相对合成不确定度(0.50×10-2),样品待测液中铅浓度测量产生的不确定度对试验测量结果的不确定度贡献最大,而且样品重复性也是重要的不确定度分量.     

土壤SO_4~(2-)的2种简易速测法

土壤SO_42-速测是利用待测液加BaCl_2形成BaSO_4混浊体进行比浊。本实验采用2种方法进行测试:双试管比浊法和制备比浊表利用比浊环比浊法。结果显示:可达到简易速测的效果;在浓度稀的情况下,可推广添加标准液法(以浓测稀),使之成为可测。     

紫外分光光度法测定蔬菜硝酸盐含量

以硝酸盐含量差别很大的两种蔬菜(苦瓜和芥菜)为材料，采用硼砂、亚铁氰化钾、乙酸锌、活性碳粉制备待测液，有效地去除了有机物质的干扰。进而用紫外光度法直接测定待测液中的N03。苦瓜和芥菜N03测定结果的变异系数分别为0．9％和1．3％，回收率分别为97．1％、105．7％，平均回收率101．4％。     

含磷活性炭对土壤速效磷测定的影响

通过试验对土壤速效磷测定过程中存在的待测液脱色问题进行探讨,初步得出以下结果:(1)样品中加入0.25g含磷活性炭,对待测液的脱色效果较好,但对养分含量较低的土样测定结果有一定的影响,使样品的测定结果大约增加了1mg/kg。(2)在没有无磷活性炭的情况下,对于有颜色的待测液,可根据颜色深浅,适当减少待测液吸样量进行测定,对样品的测定结果没有影响。     

基体效应对火焰光度计测定土壤和植株钾素含量准确性的影响

为定量研究基体效应干扰对火焰光度计测定土壤或植株钾素的影响,测定了土壤和植株标准样品中各形态钾素(水溶性钾、速效钾、缓效钾、土壤全钾和植株全钾)待测液和具有相同基体钾标液的电信号值,研究了基体效应对测定结果的干扰。结果表明:当钾标准溶液和待测液的基体一致时,标准样品各形态钾素的测定结果均具有较好的回收率。若各形态钾素的测定均使用基体为纯水的钾标准溶液,则基体效应干扰会使测定结果存在一定的负误差,尤其是对土壤全钾和植株全钾待测液的电信号值影响极大。稀释能够在一定程度上减少基体效应的干扰,但在通常的土壤和植株样品待测液稀释倍数范围内,不同基体钾标液的电信号值仍差异较大。因此,在采用火焰光度计测定土壤和植株样品钾素含量时,为消除基体效应干扰,应当保证钾标准溶液的基体与各形态钾素待测液的基体相同。     

烟叶中氯和钾常规法测定前处理改进初探

以烤烟为材料,对测定氯的莫尔法前处理进行改进,即用5%1∶2 Na2CO3和NH4NO3的混合液取代5%1∶2 Na2CO3和KNO3的混合液以制备待测液,用于同时测定氯和钾,结果表明,采用改进方法制备的待测液可同时用于测定氯和钾,且精密度和准确度均较高,与常规方法相比,无显著性差异。改进后的方法省去了钾测定的前处理,降低了检测成本,并提高了工作效率,便于推广应用。     

人凝血因子Ⅷ的提取工艺研究

[目的]考察制备过程中工艺优化对人凝血因子Ⅷ制备的影响。[方法]以人冰冻血浆经过融解,0~4℃离心,收集的冷沉淀为原始材料,通过调整不同倍数的溶解液、选择不同的抗凝剂、调节不同的酸沉pH,观察蛋白液的稳定性,检测蛋白液中蛋白质含量及凝血因子Ⅷ的活性。结果:加入冷沉淀重量5倍的溶解液,用4 IU/ml肝素钠抗凝,调节酸沉的pH在6.2~6.4范围内,蛋白液的稳定性最佳,人凝血因子Ⅷ的活性最高。[结论]通过优化人凝血因子Ⅷ提取过程的参数,可以显著提高人凝血因子Ⅷ的稳定性,降低杂蛋白浓度,保护Ⅷ因子的活性。     

土壤SO4^2-的2种简易速测法

土壤SO4^2-谴劂是利用待测液加BaCl2形成BaSO4混浊体进行比浊。本实验采用2种方法进行测试：双试管比浊法和制备比浊表利用比浊环比浊法。结果显示：可达到简易速测的效果；在浓度稀的情况下，可推广添加标准液法（以浓测稀），使之成为可测。     

基于iTRAQ技术的水牛卵泡液蛋白质样品预处理的优化

[目的]优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础.[方法]在蛋白质样品溶液酶解过程中,选择两种不同沉淀剂沉淀蛋白质,分别比较蛋白质酶解、iTRAQ标记反应和多肽色谱分离的效果;在纳升液相色谱(nano-LC)分离样品前用快速分离小柱进行处理,鉴定色谱分离效果,以确定蛋白质样品预处理的优化程序.[结果]相对于丙酮,使用含0.1％乙酸的丙酮—乙醇混合液(1∶1)作为沉淀剂可获得较好的蛋白质沉淀效果,蛋白沉淀为白色,蛋白质浓度为5.76μg/μL.相对于蛋白质溶液在还原烷基化后直接使用胰蛋白酶酶解,在酶解前沉淀蛋白质溶液可使蛋白样品的酶解效率更高,获得的肽段峰更丰富、峰值更高;可使多肽和iTRAQ试剂间产生有效的标记反应,母离子具有较高的碎裂效率,获得的二级碎片峰更丰富,iTRAQ试剂的特征报告离子116 m/z较117 m/z的谱图强,辨识度高;获得的多肽nano-LC分离色谱峰更丰富,峰值和分辨率更高.相对于直接进行LC分离,在nano-LC分离前用快速分离小柱对多肽溶液进行杂质处理,也可获得丰富的多肽nano-LC色谱峰,且峰值和分辨率较高.[结论]在iTRAQ试剂标记、蛋白质液相分离和差异分析前,使用适宜的沉淀剂处理蛋白质溶液,并以快速分离小柱除去多肽混合液小分子杂质,可使质谱获得更准确的鉴定结果.     

基于iTRAQ技术的水牛卵泡液蛋白质样品预处理的优化

[目的]优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础.[方法]在蛋白质样品溶液酶解过程中,选择两种不同沉淀剂沉淀蛋白质,分别比较蛋白质酶解、iTRAQ标记反应和多肽色谱分离的效果;在纳升液相色谱(nano-LC)分离样品前用快速分离小柱进行处理,鉴定色谱分离效果,以确定蛋白质样品预处理的优化程序.[结果]相对于丙酮,使用含0.1%乙酸的丙酮—乙醇混合液(1∶1)作为沉淀剂可获得较好的蛋白质沉淀效果,蛋白沉淀为白色,蛋白质浓度为5.76μg/μL.相对于蛋白质溶液在还原烷基化后直接使用胰蛋白酶酶解,在酶解前沉淀蛋白质溶液可使蛋白样品的酶解效率更高,获得的肽段峰更丰富、峰值更高;可使多肽和iTRAQ试剂间产生有效的标记反应,母离子具有较高的碎裂效率,获得的二级碎片峰更丰富,iTRAQ试剂的特征报告离子116 m/z较117 m/z的谱图强,辨识度高;获得的多肽nano-LC分离色谱峰更丰富,峰值和分辨率更高.相对于直接进行LC分离,在nano-LC分离前用快速分离小柱对多肽溶液进行杂质处理,也可获得丰富的多肽nano-LC色谱峰,且峰值和分辨率较高.[结论]在iTRAQ试剂标记、蛋白质液相分离和差异分析前,使用适宜的沉淀剂处理蛋白质溶液,并以快速分离小柱除去多肽混合液小分子杂质,可使质谱获得更准确的鉴定结果.     

纠正全国农业高校教材《家畜饲养学》中的一处错误

全国农业高校教材《家畜饲养学》第96～97页,“日粮中某一种饲料养分的测定”一节给出的计算公式:式中参数:F—补加待测饲料养分的消化率;T—试验日粮中养分的消化率;B—基础日粮中养分的消化率;f—试验日粮中补加待测饲料所占比例。由于对“f”定义出现概念错误,导致用此公式进行两期试验套算待测饲料养分消化率时结果出错。这样的事例在畜牧期刊文章和考研试卷中都发生过。因此,有必要借贵刊“一家之言”版面说说明白。《教材》中的“f”实际上应该是:待测饲料中的养分占试验日粮中该养分的比例。《教材》的计算示例中,“f”是试验日粮…     

土壤全量氮磷钾测定方法的研究

土壤肥力指标的测定是农业科学化生产中"测土、配方、施肥"的基础和依据,对于指导合理施肥,降低农业生产成本、提高效率等影响很大。传统的国标法测定土壤全量氮磷钾采用强酸强碱、高温分两次消煮取得待测液进行测定的方法费时费力且受环境、设备等影响较大。本文采用低温低压消煮技术进行消煮,即采用195℃低温能耗低,只需少量硫酸、高氯酸、氢氟酸,封闭消煮无需全程监测,一次性消煮四小时所得待测液可同测NPK元素,结果可靠,具有简便、快速、准确、成本低等优点。     

陕西关中小麦品种品质性状与面包体积的通径分析

对陕西关中51个小麦品种(品系)蛋白质含量、湿面筋含量、沉淀值、吸水率、稳定时间等品质指标与面包体积进行相关分析,结果表明:湿面筋含量、沉淀值、稳定时间与面包体积呈0.01水平显著正相关,蛋白质含量、吸水率与面包体积不存在相关性。通径分析表明,稳定时间、湿面筋含量、吸水率、沉淀值、蛋白质含量对面包体积的直接作用依次减弱,沉淀值、稳定时间、湿面筋含量、吸水率、蛋白质含量对面包体积的综合影响程度依次减弱,其中沉淀值为面包体积的主要决策变量。     

绵羊卵泡液蛋白质组2-DE图谱的构建及初步分析

为了获得绵羊卵泡液蛋白质组表达图谱,采用2-Dclean-upkit法和热的SDS直接裂解法制备卵泡液蛋白质样品,进行双向凝胶电泳,运用PDQuest8.0对图谱进行初步分析,最后与血浆蛋白质表达图谱做初步对比。结果显示：热的SDS直接裂解法处理的蛋白质样品图谱蛋白质斑点较多,更能真实反映卵泡液蛋白质组的全貌;卵泡液蛋白质图谱与血浆蛋白质图谱匹配率达75.62%。研究表明,热的SDS直接裂解法处理蛋白质样品效果较好;卵泡液蛋白质成分与血浆蛋白质成分比较相似,可以用处理血浆样品的方法来优化处理卵泡液蛋白质样品。