辣椒细胞悬浮培养中体细胞胚形成及植株再生

本研究通过体细胞胚在液体培养基中的培养完来成辣椒(Capsicum annuum var.Ace)植株的再生。并以成熟合子胚为外植体,在含有9.05μM 2,4-D和3%蔗糖的MS液体培养基介质中,形成胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织转移到含有4.52μM 2,4-D和3%蔗糖的MS液体培养基中进行继代培养。柠檬酸钾预处理胚性愈伤组织后,细胞放入含6 g/L的L-脯氨酸和铵浓度为10 m M的胚胎起始培养基中。胚胎在含脱落酸1.89μM的1/2 MS培养基中成熟,且体内和体外转化为植物的效率高达97%。     

苹果体细胞悬浮培养及植株再生研究

以苹果试管苗叶片的再生不定芽嫩叶为试材,对苹果体细胞悬浮系的建立及植株再生的影响因素进行了研究.结果表明:在MS+NAA 0.5 mg/L+BA 2.0 mg/L培养基上可诱导获得高活力的愈伤组织.将该愈伤组织转入MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L液体培养基中培养,采用无菌筛网分离获得含单个细胞和少于8～10个细胞的小细胞团进行继代培养,建立体悬浮细胞培养系.将悬浮细胞转到MS+2,4-D 2.0 mg/L+BA 1.0 mg/L的固体增殖培养基上暗培养25 d后,可形成微型愈伤组织,将该愈伤组织转到MS+BA 5.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L的植株再生培养基上暗培养30 d后转入光下,光照培养30 d后53％的愈伤组织可再生植株.该研究建立的苹果体细胞悬浮培养技术,不仅可用于细胞融合及遗传转化过程中杂种细胞和转化细胞的分离及植株再生研究,而且对于利用组织培养技术筛选变异株系也具有重要意义.     

甜菜原生质体培养再生植株的研究

以栽培甜菜的未授精胚珠成胚为外植体，在ＭＳ附加ＮＡＡ和ＢＡ的培养基上诱导愈伤组织，选择胚性愈伤组织进行继代培养，从该愈伤组织分离原生质体并以液体浅层法或半固体琼脂糖法培养在一系列培养基上，植板率为０．０１％－１．２％。再生愈伤组织形成后，转入固体培养基（ＭＳＢ）上培养，再转入分化培养基上分化出苗，分化率可达２．５％，由愈伤组织上切下分化苗在生根培养基上很容易诱导生根。     

酿酒葡萄原生质体再生植株

将酿酒葡萄品种白诗南、梅郁的花丝接种在含６ＢＡ２．０ｍｇ·１－１、２,４－Ｄ０．５ｍｇ·１－１的Ｂ５诱导培养基上,诱导产生胚性愈伤组织。胚性愈伤组织经液体悬浮培养形成含大量胚性细胞团的悬浮培养物。用Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　　Ｒｓ２％、Ｐｅｃｔｏｌｙａｓｅ　Ｙ２３０．３％,５ｍｍｏｌ·１－１ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ、０．６ｍｏｌ·１－１甘露醇、０．３％葡聚糖硫酸钾、ｐＨ５．６～５．８的酶混合液从胚性细胞团分离得到原生质体。原生质体培养到第５天出现第一次分裂,４０ｄ形成上百个细胞的大细胞团,５０ｄ形成０．５～１．０ｍｍ大小的小愈伤组织。这些小愈伤组织在含６ＢＡ０．５ｍｇ·１－１的Ｂ５分化培养基上分化出胚状体进而形成幼苗,在生根培养基上生根形成再生植株。     

枇杷原生质体植株再生

以普通批粑（价iobotlya joponica Lindl．）‘解放钟’等品种的不同发育期胚为材料诱导愈伤组织。起源于鱼雷形胚的胚性愈伤组织是游离原生质体的合适材料。最合适的游离原生质体的酶混合液为：l％纤继素酶＋2％果胶酶干！2％甘露醇，其原生质体得率高于L 07／g愈伤组织，原生质体成活率在 95％以上。原生质体经液体培养 4天后，出现第一次细胞分裂，并继续分裂，形成大量肉眼可见的小愈伤组织。愈伤组织在含3％山梨醇的培养基土培养3周后，其表面出现茎原基，并进一步发育成芽苗。芽苗移入生根培养基后生成完整植株。已获得解放钟和‘白梨’移栽成活的原生质体再生植株。     

"索蚌"百合原生质体分离及培养的研究

用纤维素酶、离析酶、果胶酶、山梨醇的混合酶液提取"索蚌"百合的幼叶和愈伤组织的原生质体.对影响原生质体提取得率因素进行分析,用液体浅层培养法在MS、改良MS和NLN培养基附加不同浓度6-BA,2,4-D等进行培养.结果表明:纤维素酶和酶解时间对原生质体提取得率有极显著影响,最适合百合幼叶原生质体提取的酶液组合为:2?llulase R-10,0.5% Macerozyme R-10,酶解4 h.百合愈伤组织的原生质体提取的酶液混合液组合为:2% Cellulase R-10 0.5% MacerozymeR-10 0.05%Pectolyase Y23 147 mg/L CaCl2·2H2O 976 mg/L MES 0.6 M Sorbitol.进行原生质体的培养仅愈伤组织为来源的观察到细胞的分裂,幼叶为来源的原生质体几乎没有分裂,但两者最终都没有形成愈伤组织.     

桃悬浮细胞的原生质体形成愈伤组织

材料与方法用栽培在温室里的三年生桃(品种‘Hakuho’)的叶块诱导愈伤组织,其步骤与以前叙述的一样,除Nitsh’—Nitsh培养基用作基本培养基外,培养物放置在黑暗中。培养一个月以后,诱导出的愈伤组织转移到附加10μm的NAA和1μm的BA培养基上。为了便于游离原生质体,把经过在琼脂培养基上几次继代培养的愈伤组织转移到成份相同的液体培养基上,照例每两星期继代培养一次。     

香榧体细胞胚发生、发育的形态与细胞学观察

将香榧(Torreya grandis‘Merrillii’)的未成熟合子胚置于SH+0.1 mg·L-1 NAA+500 mg·L-1AC+3%蔗糖+0.5 g·L-1 Gln培养基上暗培养45 d,诱导产生半透明颗粒状胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转入SH+20 g·L-1 PEG+10 mg·L-1 ABA培养基中暗培养3个月诱导体细胞胚。采用碘—碘化钾染色和石蜡切片技术对体胚起源、形态发育与细胞组织学进行了观察。结果表明:胚性愈伤组织起源于合子胚胚轴表皮或皮层细胞的对称分裂。胚性愈伤组织含有两类细胞,一种是细胞质浓厚、细胞核大、体积小的圆形胚性细胞,另一种是高度液泡化拉长的细胞。胚性愈伤组织包含由这两种细胞构成的原胚团Ⅰ、原胚团Ⅱ和原胚团Ⅲ,以及一些游离细胞。原胚团Ⅲ在无植物生长调节剂的SH基本培养基上形成原胚,原胚接入成熟培养基,历经球形、棒状、心形、鱼雷形胚后发育成子叶胚。将子叶胚转入萌发培养基后胚根伸长,胚芽发育长出针叶,形成完整的再生植株。同时在离体培养中合子胚胚柄处退化的裂生多胚也能重新发育形成胚体。在初生体胚发育过程中表面常伴有次生体细胞胚的形成。     

银杏成熟胚乳培养的细胞组织学观察

诱导银杏（GinkgobilobaL．）成熟胚乳产生愈伤组织时无需胚的存在。单独使用生长素或在细胞分裂素／生长素为0．5～0．9的范围内均能诱导部分胚乳切块产生愈伤组织。并且在White＋Kt2．7mg·l-1＋2,4－D1．0mg·l-1＋NAA2．0mg·l-1的培养基上,愈伤组织的诱导率最高,达到83．3％。胚乳细胞脱分化进行有丝分裂和无丝分裂,其中无丝分裂可以观察到劈裂和缢裂两种类型。愈伤组织起源于胚乳表皮及其下方2～3层细胞,且愈伤组织的形成需经历一个“假愈伤组织化”阶段。     

怀地黄愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系的建立

研究了植物生长调节剂和接种方式对怀地黄叶片愈伤组织诱导的影响和细胞悬浮培养体系的建立。结果表明:将叶片正接在MS+2,4-D 1mg/L+6-BA 0.4mg/L培养基上,愈伤组织生长良好,诱导率达100%;在该培养基上多次继代,可形成3种类型的愈伤组织,其中Ⅰ型愈伤组织淡黄色、颗粒透亮、分散性好且疏松易脆,适合进行细胞悬浮培养;在MS+2,4-D 3mg/L+6-BA 0.5mg/L培养基中,悬浮培养细胞生长曲线呈"S"型,培养15d时细胞干重达最大值,为4.94g/L。     

鸡屎藤愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

建立鸡屎藤愈伤组织的诱导、增殖继代培养及其细胞悬浮培养的技术体系。研究不同植物激素组合对叶片、茎段和带腋芽茎段愈伤组织诱导的影响;采用正交试验研究不同处理对叶片愈伤组织增殖的影响;采用液体振荡培养法测定叶片愈伤组织细胞悬浮生长曲线。结果表明：叶片最易诱导产生愈伤组织,最佳激素配比为MS＋6-BA1.0mg/L＋NAA0.5mg/L,诱导率可达100%。叶片愈伤组织最佳增殖培养基为MS＋2,4-D0.5mg/L＋NAA0.3mg/L＋6-BA0.5mg/L,pH5.8。由叶片愈伤组织建立的细胞系生长呈＂S＂型曲线,培养24d达到最大生长量,最适继代周期为18～20d。以叶片为外植体经愈伤诱导、增殖培养可建立良好的细胞悬浮系。     

百合愈伤组织的诱导及瞬时表达的研究

以百合品种‘罗宾娜’(Robina)鳞片、花丝和花梗分化的不定芽为试材,诱导愈伤组织,并通过固体、液体和经过液体预培养后在固体上培养的方式继代增殖.结果表明:分化的不定芽在萘乙酸(NAA)0.5 mg/L的培养基上愈伤组织的诱导率最高；从芽基部形成的愈伤组织以经过液体预培养后在固体上培养的方式继代,繁殖速率最大,再生率为100％.使用农杆菌介导转化pCAMBIAl301质粒后,3种不同方式培养的愈伤组织的GUS瞬时表达效率差异并不显著.     

夏堇悬浮细胞培养与植株再生研究

以夏堇品种“小丑”的组培苗幼嫩叶片为试材,进行愈伤组织诱导、细胞悬浮培养及植株再生诱导的研究.结果表明:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D的培养基能够使叶片诱导为生长迅速、质地疏松的愈伤组织.愈伤组织最适宜的悬浮培养条件为:MS+ 1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L 2,4-D液体培养基,20 g/L的起始接种量以及100 r/min的震荡培养.将继代3～4次的细胞悬浮颗粒转到1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的固体再生培养基上培养,3周后可以诱导分化出芽,进而获得完整植株.悬浮培养有利于夏堇愈伤组织的再生,悬浮培养对提高以夏堇作为模式植物进行的相关研究具有重要的应用价值.     

荔枝龙眼细胞悬浮培养和转基因研究(英文)

应用正交设计研究了IBA、6-BA、GA3和CM等植物生长调节剂在龙眼(Dimocarpus longana Lour.)与荔枝 (Litchi chinensis Sonn.)细胞悬浮培养中的作用,并就悬浮培养细胞对Km的敏感性以及用金刚沙对胚性愈伤组织在 液体状态下进行创伤和用分别带有AP1和APBD基因的农杆菌对创伤的愈伤组织进行遗传转化进行了探讨。结果 表明:IBA、6-BA、GA3和CM均可显著地提高悬浮培养系的产量,但GA3导致细胞的快速生长和褐变。悬浮培养系 细胞在液体培养基中比在固体培养基中对Km较敏感。用金刚沙对胚性愈伤组织在液体状态下进行创伤后进行农 杆菌介导转化可以得到更多的Km抗性胚状体。PCR检测结果显示,AP1及AP-D基因均已转入龙眼的胚状体中。     

南瓜疏松愈伤组织诱导的研究

获得生长迅速,疏松的愈伤组织是进行植物细胞悬浮培养的前提.研究以"粟冠"南瓜子叶做外植体,在添加不同浓度的BA和NAA的MS固体培养基上诱导南瓜愈伤组织,比较南瓜愈伤组织的诱导率和长势,其中当外植体在MS 1.0 mg/L6-BA 0.1 mg/L NAA的培养基上培养时,愈伤组织诱导率和长势最好.     

‘翠秀’黄瓜子叶原生质体的高效培养及植株再生

 分离纯化的黄瓜子叶原生质体，以5.5×10～5.5×10⁵个/mL的不同密度培养于mKMSp液体培养基中，均获得不同程度的细胞分裂。当培养密度超过1.0×10³个/mL时，原生质体可持续分裂至愈伤组织形成，最高植板率为54%。原生质体来源的愈伤组织经诱导培养产生大量体胚并再生成植株。Ca²⁺ 浓度对黄瓜原生质体的稳定和细胞分裂有重要影响。     

红姜花胚性细胞悬浮体系的建立和原生质体培养

以红姜花(Hedychium coccineum)未成熟花丝和花药为试材,研究了红姜花胚性愈伤组织的诱导、细胞悬浮体系的建立以及原生质体的培养。结果表明:在MS+4mg/L 2,4-D+4mg/L NAA+1mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上经过120d培养诱导出了愈伤组织,愈伤组织在增殖培养基上经过继代筛选获得浅黄色、松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织通过3个月的悬浮培养,得到均质稳定的胚性细胞悬浮系。以胚性悬浮细胞(ECS)为起始材料分离原生质体,酶解试验表明,在原生质体分离过程中,用于原生质体分离的酶液需要保持一定的渗透压以保护原生质体不被破坏。当甘露醇的浓度为0.14mol/L时,原生质体产量最高,达到2.25×105个/mL PCV ECS(packed cell volume,PCV)。在看护培养系统中,原生质体经过7d的培养,细胞第一次分裂,经过14d培养,细胞分裂频率达到12.3%,28d时,细胞团形成频率达到4.2%。所形成的细胞团具有典型的胚性细胞特征。     

金银花疏松愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

以"巨花一号"金银花为试材,研究了外植体、培养基对金银花疏松愈伤组织的诱导以及初始接种量和蔗糖浓度对金银花悬浮细胞生长的影响。结果表明:幼叶最易诱导愈伤组织,其诱导及增殖的最适培养基为MS+2,4-D 2.0mg/L+KT 0.5mg/L;细胞悬浮培养中愈伤组织最适初始接种量为60g/L,培养基中蔗糖浓度为35g/L时细胞生长最好。     

火百合子房薄层培养器官发生的细胞组织学研究

 以火百合(Lilium ‘Star Gazer’) 子房薄层组织为外植体, 接种在附加BA 2.0 mg·L ^-1和NAA 0.2 mg·L ^-1的MS培养基上, 诱导出愈伤组织及器官。经细胞组织学观察表明: 细胞启动及愈伤组织产生于外植体近轴面和侧面的切口边缘及内方, 继而形成瘤状、棒状及胚珠状的突起, 之后从这些愈伤组织分化形成器官。火百合子房薄层培养中器官发生有3种方式: ①在愈伤组织表面形成芽; ②在愈伤组织内部或近表面形成根; ③在同一块愈伤组织表面形成芽, 内部形成根, 再通过维管系统连成1个完整的植株原始体。     

银杏成熟胚乳培养的细胞组织学观察

诱导银杏成熟胚乳产生愈伤组织时无需胚的存在，单独使用生长素或在细胞分裂素／生长素为０．５－０．９的范围内均能诱导部分胚乳切块产生愈伤组织。并且在Ｗｈｉｔｅ ＋Ｋｔ２．７ｍｇ．１＾＿１＋２．４－Ｄ１．０ｍｇ．ｌ＾－１＋ＮＡＡ２．０ｍｇ．ｌ＾－１的培养基上，愈伤组织的诱导率最高，达到８３．３％。胚乳细胞脱分化进行有丝分裂和无丝分裂，其中无丝分裂可以观察到劈裂和缢裂两种类型。愈伤组织起源于胚乳表皮及其下