马病毒性动脉炎血凝及血凝抑制试验研究与应用

在RK-13细胞上培的马动脉炎病毒在4℃、室温和37℃条件下，用各种动物的红细胞进行血凝试验，证实病毒在不同温度下均可凝集小鼠和鸡的红细胞，但不能凝集牛、绵羊、山羊、马、猪、豚鼠、仓鼠、兔及鹅红细胞，病毒用吐温-80和乙醚处理后，血凝活力会显著增强，其血凝滴度比未经处理的病毒高4-8倍，且血凝像更加清晰，最适处理条件是病毒在冰、浴状态下用终浓度0.06%-0.125%(V/V)二温-80振荡处理15min-60min，再加50%（V/V）乙醚振荡作用5min-15min。用EAV免疫SPF豚鼠，4周后采血做HI和NT试验，显示HI抗体和NT抗体产物成正相关，对550份来自新西兰、吉尔吉斯、内蒙古、新疆的马血清做EAV的抗体检测，比较两个试验，二者符合率为97.8%，血凝抑制抗体与中和抗体效价呈显著的正相关，但抗体效价略低于后者。     

保存与现配红细胞悬液在新城疫血凝与血凝抑制中的对比试验

为了研究红细胞悬液保存时间对新城疫血凝与血凝抑制试验的影响,同时比较用卵黄和血清检测新城疫抗体水平的结果差异,笔者在不同地区随机选取72份鸡蛋（其中16份鸡蛋对应16份血清）,用保存1周的红细胞悬液和现配红细胞悬液进行了对比试验。结果显示：在新城疫血凝与血凝抑制试验中,保存1周的红细胞悬液HA试验的结果比现配红细胞悬液低2个滴度;用4单位工作量进行HA试验时,得到了相同的结果;用卵黄测得的新城疫抗体水平稍低于用血清测得的结果,但差异不明显。表明用保存1周的红细胞悬液测定卵黄中新城疫的抗体水平比用现配红细胞悬液所测得的抗体水平低接近1个滴度,并且可以用卵黄代替血清检测新城疫抗体水平。     

犬细小病毒血凝特性的研究

犬细小病毒和猫泛白细胞减少症病毒在PBS4℃下能凝集恒河猴、猪、马和猫的红细胞,不能凝集牛、绵羊、山羊、犬、兔、豚鼠、小鼠、地鼠、鸡、人O型和鹅的红细胞。在22℃、37℃,病毒血凝的敏感性降低,经2～3小时即从红细胞上解脱下来。红细胞浓度与CPV的HA滴度成反比,HI滴度则随着红细胞浓度的增加而平行升高。     

冻干红细胞检验鸡新城疫血清抗体的试验

冻干(醛化)红细胞和新鲜红细胞与同一份鸡血清分别做鸡新城疫(ND)的血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验,二者血凝抑制价基本符合率达98.72%,相关系数为0.9288.冻干红细胞完全可以代替新鲜红细胞做血凝抑制试验检测鸡新城疫抗体效价.     

对血凝试验用鸡红细胞保存条件的探讨

对血凝试验所用的鸡红细胞的保存条件进行了比较。在新鲜红细胞液中加入甘油或尿素可以延缓细胞破裂溶血。鸡红细胞经戊二醛处理后，于4℃保存9个月，其凝集特性未发生变化，同时在醛化红细胞中加入甘油更能稳定血凝活性。在4℃、室温和37℃条件下将制备的新鲜红细胞和醛化红细胞用作血凝试验的指示剂，不影响新城疫病毒抗原血凝滴度。结果表明，所制备的醛化鸡红细胞的甘油悬液可以替代新鲜红细胞用于临床实践中新城疫的血凝和血凝抑制试验测定。     

给有母源抗体的幼犬施行高滴度弱毒苗

用140只4—11周龄的幼犬研究了活的、致弱的、同源的犬细小病毒(CPV)苗的作用。用血凝抑制试验和标准的ELISA试验测定出在有母源抗体存在的情况下,疫苗诱发血清学应答的能力与剂量(感染滴度)相关。当剂量为10~(7·0)TCID_(50)时试验疫苗对血凝抑制抗体滴度≤8、16、32和>32的犬血清阳转反应率分别为95％、89％、82％和44％。就可变性和科学性而言,标准ELISA似乎比血凝抑制试验要好,尤其当感染滴度低时。     

口蹄疫LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度和中和抗体滴度相关性的比较研究

为了评价口蹄疫液相阻断LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度、中和抗体滴度的关系,本研究对野外采集的38份牛血清分别进行LPB-ELISA、正向间接血凝(IHA)和微量细胞中和试验(VNT),检测各份血清的LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度和中和抗体滴度,并进行相关性分析比较。结果表明LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度相关性极显著,相关系数r=0.489(P<0.01);LPB-ELISA抗体滴度和血凝抗体滴度相关系数仅为0.149,血凝抗体滴度和中和抗体滴度相关系数为0.179,相关性均不显著。本研究为利用LPB-ELISA方法进行口蹄疫血清学监测和普查提供了试验依据。     

用间接血凝试验检测伊氏锥虫病抗体

间接血凝试验已广泛应用于寄生虫病的诊断。其中Gill(1965)报道了用甲醛化红细胞间接血凝试验检查家兔和大白鼠血清中的伊氏锥虫抗体;Jatker等(1971)报道了骆驼伊氏锥虫间接血凝试验;Verma等(1977)报道了实验感染水牛犊和黄牛犊的间接血凝滴度。胡氏等(1979)报道了用丙酮醛—戊二醛双醛化红细胞间接血凝试验以诊断耕牛锥虫病,取得了较好的结果。笔者在上述基础上进一步试验,初步标化了各种反应要素,并对疫区耕畜血清,以补体结合反应作对照,检测了伊氏锥虫病抗体。现将结果总结如下。     

血凝抑制试验的影响因素及控制

正血凝抑制试验(HI试验)的原理是病毒在适宜条件下对鸡的红细胞具有凝集作用,这种凝集作用可以被特异性抗体所抑制,抗体与病毒结合后,可使血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上,红细胞将进行自然下落,沉降到V形孔底部,利用这种特性检测血清中的病毒抗体的试验就叫血凝抑制试验。血凝抑制试验的方法是将     

禽流感血凝抑制试验中应注意的一些问题

禽流感病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制实验(HI)。由于血凝反应可被特异性抗体所抑制，抗体与病毒结合后，血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上，因此血凝抑制试验可以用于：①检涮血清中的抗体水平；②鉴定病毒；③辅助诊断病毒性疾病；④作为适时免疫的辅助手段，     

鸡醛化红细胞在血凝和血凝抑制试验中的应用

应用鸡醛化红细胞 (FoRBC)代替新鲜配制红细胞 (FrRBC) ,进行血凝试验 (HA)和血凝抑制试验 (HI) ,以检测病毒滴度及其对应抗体效价。结果 :0 75 %FoRBC与 1 %FrRBC所测病毒HA和相应抗体HI效价一致。表明 0 75 %FoRBC可以替代 1 %FrRBC ,且具有不易破裂 ,保存期长 ,使用方便 ,无自凝 ,图象清晰、稳定 ,结果易判定等优点     

鸡新城疫血凝抑制(HI)抗体研究——微量法HI试验的影响因素

本试验系统地比较了影响鸡新城疫血凝抑制(HI)试验β-微量法的诸因素。试验表明温度及抗原与血清作用时间对 HA和 HI 的影响最为显著。温度的影响主要发生在加红细胞前,每升高5℃,HA 和 HI 滴度都平均上升0.35(log_2)。作用时间在最初30分神内使 HI 滴度递增显著,随后变缓。在22℃下,作用时间自0分钟延长至150分钟,HI 滴度递增2.3(log_2)。抗原浓度与 HI 滴度成反比。红细胞浓度与 HA 滴度成反比而与 HI 滴度呈正比。不同个体供血者的红细胞对 HA 和 HI 有一定程度影响,但与供者免疫水平无关。稀释液的酸碱度在 pH7.0时红细胞沉降最充分,图形最清晰,5.8以下时红细胞易自凝,7.8以上时易洗脱。以 Lasota系弱毒提取的浓缩抗原作 HI 试验时,判定时间对试验值的影响较小。     

分泌抗猪痢疾密螺旋体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以猪痢疾密螺旋体X_(23)株免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,共获得5株分泌抗X_(23)的单克隆抗体杂交瘤,对其中的6H株进行了鉴定:其染色体的平均数为97.5条,培养上清液的间接血凝滴度可达1∶128,玻片凝集滴度可达1∶32;经注入小鼠腹腔后产生的腹水提取抗体免疫荧光染色滴度可达1∶64,间接血凝滴度可达1∶1280。分泌抗体的分子类型为IgG。其针对的抗原成分存在于X_(23)的酚水抽提物的水相脂多糖内,具有型的(或株的)特异性。经长期的体外传代培养和长达7个月的冻存,其分泌抗体的特性保持稳定。     

马动脉炎病毒血凝抑制试验研究及其应用

用马动脉炎病毒（EAV）免疫SPF豚鼠，4周后采血做血凝抑制试验（HI），其抗血清可以抑制血凝抗原对小鼠红细胞的凝集反应，抗原和抗血清在4℃感作24h后可以检测到最高的HI抗体效价，同时结果显示HI抗体与中和抗体产物呈正相关。对561份来自新西兰、吉尔吉斯、沙特阿拉伯及内蒙古、新疆的马血清用HI试验和微量血清中和试验（NT）进行EAV抗体检测，HI和NT阳性符合率为94．7％，血凝抑制抗体与中和抗体效价呈显著的正相关。     

血凝抑制试验影响因素分析

某些病毒(如禽流感病毒和新城疫病毒)能够与禽类的红细胞发生凝集,这种红细胞凝集现象可以被特异性免疫血清所抑制,即红细胞凝集抑制试验(HI).该方法是根据病毒的血凝蛋白具有识别并吸附于红细胞表面受体的生物学特性而建立起来的.由于血凝反应可被特异性抗体所抑制,抗体和病毒结合后,血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上,所以血凝抑制试验可用于:发现与鉴定病毒;诊断病毒性疾病;监测机体血清抗体水平;为免疫程序制定提供准确基础数据,防止重复免疫、免疫失败和免疫空档的发生.该方法是一种在基层临床实践中极易推广的检验、检疫手段与诊断方法.目前在血凝抑制试验方面存在一些不规范操作问题,从而影响试验结果的准确性,导致不正确结果的出现.     

猪传染性胃肠炎病毒NC株的分离鉴定及生物学特性试验

本试验成功分离了1株猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),并对其进行了鉴定及生物学特性研究。取华南地区某猪场腹泻病猪肛拭子经无菌处理后接种PK-15细胞分离病毒,首代培养即产生典型的细胞病变。该毒株对鸡红细胞的血凝价为26,病毒效价(TCID50)为108.15/mL。经标准TGE阳性血清的血凝抑制和细胞中和试验鉴定该病毒为TGEV,血凝抑制滴度为28、中和效价为1∶381。通过RT-PCR检测及序列分析,确定其为TGEV,并将该毒株命名为TGEV NC株。TGEV NC株在没有超离纯化和4℃处理下仍有较高血凝特性,为国内首次报道。     

H3N2亚型犬流感病毒血凝及血凝抑制试验的研究

为优化H3N2亚型犬流感病毒(CIV)的血凝抑制(HI)试验方法,本研究应用不同种类红细胞进行CIV的血凝(HA)试验,应用不同种类红细胞和不同血清处理方法进行CIV的HI试验,评价其对HA和HI试验的影响。结果表明,H3N2亚型CIV对鸡和犬红细胞的凝集性最好,对小鼠、猪和牛红细胞的凝集性较差。HI试验应用鸡红细胞悬液效果最好,受体破坏酶(RDE)和高碘酸钾处理可以有效去除犬血清中非特异血凝抑制素,但高碘酸钾对血清特异性抗体有损耗。本研究筛选出H3N2亚型CIV HI试验的最佳方法,为犬流感的血清学诊断提供技术支持。     

醛化红细胞应用的概述

<正>试剂红细胞由于两方面的原因而被广泛应用:一是作为红细胞抗原直接参与抗原抗体反应,如血型分型、未知抗体的筛选与鉴定等;二是作为指示细胞,能够指示血凝(hemagglutination,HA)和血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验的结果[1]。但在应用过程中,通常都是采用新鲜红细胞。在红细胞保存过程中,由于保存条件的不同和随着保存时间的延长,红细胞表面会发生一系列结构性与功能性的变化,从而致使新鲜红细胞容易发生溶血、破裂,而且易     

血凝和血凝抑制试验常见问题浅解

正兽医实验室中,常利用血凝和血凝抑制试验,对禽流感、新城疫等具有血凝性的病毒进行鉴定或对发病禽群进行疫病诊断、对禽群的免疫状态进行评价等。1定义与原理1.1血凝某些病毒或病毒的血凝素,能选择性的使某种或某几种动物的红细胞发生凝集,这种凝集红细胞的现象称为血凝。1.2血凝抑制当病毒的悬液中先加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接反应,也称血凝抑制反应。     

高职院校"鸡新城疫抗体水平测定"技能大赛操作要点探索

由农业部主办的全国职业院校鸡新城疫抗体水平测定技能大赛赛项是高职院校中规模最大、水平最高、竞争最激烈的比赛项目之一。为了更好的提高学生的专业技能以及在以后的比赛中取得更突出的成绩,本文从实验器材的准备、配制1%鸡红细胞悬液、血凝(HA)实验、配制四单位病毒、血凝抑制(HI)实验和抗体滴度报告等六个操作环节进行了初步分析,以供从业者参考。