猪圆环病毒2型灭活疫苗佐剂选择

用水包油佐剂Merckinade SDA 25、HS1010和双向佐剂Montanide ISA 206三种不同佐剂分别制成猪圆环病毒2型灭活疫苗,对三种疫苗的稳定性、黏度、免疫仔猪后的安全性及效力进行了比较。试验结果表明,以3 000 r/min离心15 min,三种疫苗均无水析出;三种疫苗的黏度均低于200 cP;三种疫苗按2.0 mL/头的剂量接种21日龄健康易感猪,试验猪体温、采食、饮水、精神状况均正常,均无不良临床反应,剖检后各脏器均无病理变化;加强免疫后21d,各组试验猪采血,检测猪圆环病毒2型抗体效价,结果表明,佐剂MontanideISA206相较MerckinadeSDA25可诱导更高水平抗体效价。攻毒试验结果表明免疫组可以得到100%的保护。根据以上试验结果,确定猪圆环病毒2型灭活疫苗使用Montanide ISA 206。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫效果试验

本试验将10窝同期出生的共105头仔猪,随机分为试验组和对照组,试验组于14日龄、45日龄分别进行猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫,对照组不免疫。通过临床跟踪观测和定期采血进行猪圆环病毒2型ELISA抗体和PCR病毒核酸检测。结果表明,临床免疫猪群成活率及生长指标明显好于不免疫猪群;试验组及对照组病毒核酸阳性检出率和抗体阳性率差异不显著,且可同时检出圆环病毒核酸及抗体。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫试验

采用勃林格殷格翰动物保健公司生产的猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗,在光明农牧科技有限公司3个畜牧场分别进行免疫核心试验。结果显示,相比对照组,实验组猪成活率、日增重、整齐度等都有较大的改善,投入产出经济效益较好。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗种毒株的筛选

为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×10⁴拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性及免疫效力的评价

为了对制备的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)灭活疫苗进行安全性及免疫效力的评价,本试验将3批次猪圆环病毒2型灭活疫苗以2倍剂量接种PCV2阴性仔猪后,进行了安全性分析抗体检测和攻毒试验。结果显示：3批次疫苗以2倍剂量接种仔猪后,仔猪均无异常临床反应,可达到1∶1600以上,而攻毒对照组及空白对照组仔猪的抗体水平均在1∶400以下;攻毒后免疫组可以达到100%保护,攻毒对照组出现100%发病。结果表明,所制备的猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪不仅安全性好,而且可以为仔猪提供有效的保护,为疫苗推广奠定了重要基础。     

3种不同类型佐剂的猪圆环病毒2型亚单位灭活疫苗免疫效果的比较研究

为制备猪圆环病毒2型商品化亚单位疫苗选择良好的佐剂,对由水性佐剂GEL 01、白油佐剂以及氢氧化铝胶佐剂分别制备的3种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的免疫效果进行比较研究。本实验选取3～4周龄猪圆环病毒2型抗体阴性猪30头,根据试验疫苗接种情况分为6组,分别为:3种不同佐剂制备的亚单位疫苗(A组、B组和C组)、商品化疫苗(D组)以及空白对照组和攻毒对照组,然后进行临床观察、抗体水平监测和免疫效力评价,观察各组仔猪的不良反应情况、抗体水平以及攻毒保护情况。结果显示:3种不同类型佐剂制备的猪圆环病毒2型亚单位疫苗接种猪后均无任何不良反应、能刺激机体产生良好的ELISA抗体水平和免疫效果,但水性佐剂GEL 01制备的疫苗与另外2种佐剂制备的疫苗相比,综合抗体水平、免疫效果等因素,水性佐剂GEL 01制备的疫苗在临床使用上更具优势,为商品化亚单位疫苗佐剂的选择提供了重要的数据支持。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究

猪圆环病毒2型（PCV2）经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下：①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著（P〈0.05）。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗最小免疫保护剂量研究

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,疫苗是防制该病的主要手段.为研究PCV2灭活疫苗的免疫效果,本研究将PCV2 SH株灭活,用生理盐水稀释成5×105.0TCID50/mL(高剂量)、2.5×1050 TCID50/mL(中等剂量)、1.25×105.0 TCID50/mL(低剂量)、6.3×104.0 TCID50/mL(超低剂量)4种剂量,与等量白油佐剂乳化后,通过断乳仔猪的免疫攻毒试验观察该灭活疫苗的免疫特性.结果表明,PCV2疫苗抗原含量大于1.25×105.0 TCID50/mL时免疫仔猪后均可以产生特异性抗体,能够明显减轻攻毒后仔猪的临床症状、缓解组织病变、降低病毒血症,对免疫猪有一定的保护效果,可以作为预防PCV2感染的疫苗使用.本研究为研制商品化的PCV2灭活疫苗提供实验依据.     

猪圆环病毒2型灭活苗免疫试验

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)由于常与其它病原混和感染,给养猪业造成巨大的经济损失。本试验用圆环病毒2型灭活苗免疫20日龄仔猪,观察免疫后猪体内抗体消长规律及其对猪只生长的影响。     

猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗免疫试验报告

猪圆环病毒病是近年来新发现的猪传染病之一,其病原是Ⅱ型猪圆环病毒(PCV-Ⅱ),以5~12周龄的猪发病率较高,临床主要表现为生长迟缓、进行性消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸和腹泻等,急性暴发猪群的死亡率可达10%,个别情况可高达50%。此外该病与猪的多种疾病综合征有关,特别是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎及肾坏死综合征(PDNS)。PCV-Ⅱ能侵害猪体免疫系统,导致猪体的免疫抑制及抵抗力下降,干扰和破坏猪对其它疫病免疫抗体的产生和维持,从而继发或并发其它疾病,已成为危害养猪业的主要疾病之一。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗效力检验中参考疫苗的应用

制备了4批不同抗原含量的猪圆环病毒2型（PCV2）灭活疫苗,灭活前PCV2病毒含量分别为107.0、106.5、105.5和104.5TCID50/mL。对此4批PCV2灭活疫苗,利用本实验室建立的小白鼠效力检验标准进行效力检验,即以PCV2参考疫苗作为对照品,测定待检疫苗免疫小白鼠后血清中PCV2抗体效价的高低来判定疫苗效力。3次重复检测结果都显示灭活前病毒含量为107.0、106.5和105.5TCID50/mL批次的疫苗合格,而灭活前病毒含量为104.5TCID50/mL批次的疫苗不合格,这与猪体内的效力检验结果一致,表明建立的针对猪圆环病毒2型灭活疫苗的小白鼠效力检验方法具有良好的准确性和重复性。     

猪圆环病毒2型的分离与鉴定

利用PCR方法,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征(PMWS)的自然病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)的DNA片段,并用限制性内切酶对PCR产物进行了酶切鉴定。将经PCR扩增和酶切鉴定为PCV2阳性的组织样品匀浆液接种到无PCV污染的PK15细胞中传代,经间接免疫荧光检查,在接毒细胞内观察到了特异性免疫荧光;用接毒细胞制备超薄切片,在电镜下观察到了直径大约为17nm的圆形病毒样粒子和大量不同形态的胞浆内包涵体。由此表明分离出的病毒为猪圆环病毒2型。     

猪圆环病毒2型诊断技术研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是新发现的迄今为止最小的动物病毒,是猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的病原.PMWS给世界养猪业造成了巨大的经济损失.本文综述了猪圆环病毒2型的诊断技术,包括抗原和抗体的检测技术.     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗.选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒.攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化.采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高.2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护.以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株.病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤.本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护.     

猪GM-CSF基因对猪圆环病毒2型DNA疫苗诱导仔猪免疫反应的调节作用

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）能够诱导树突状细胞的成熟和存活，并提高其抗原递呈功能，是非常有潜力的分子佐剂之一。为了探讨猪GM-CSF对猪圆环病毒2型（PCV2）DNA疫苗诱导免疫反应的调节作用，本研究将表达猪GM-CSF和PCV2衣壳蛋白的重组质粒混合物（pcDNA3．1-gm-csf和pcDNA3．1-orf2）及在同一载体上表达PCV2衣壳蛋白与猪GM-CSF的双表达重组质粒（pIRES-orf2／gm-csf），分别接种于7日龄健康仔猪，共肌肉注射3次，每次间隔2周。结果表明猪GM-CSF基因能够明显增强PCV2DNA疫苗诱导的特异性体液免疫反应，提高外周血淋巴细胞（PBLC）对ConA刺激的增殖活性，增强NK细胞的杀伤功能，影响细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平。但GM-CSF基因单独表达和与PCV2衣壳蛋白基因在同一载体上表达，对上述4个细胞因子表达的影响有一定差异。     

猪圆环病毒2型胶体金抗体检测方法的建立

为建立检测猪圆环病毒2型(PCV2)胶体金检测方法,本研究对SPA蛋白进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以重组PCV2 ORF2蛋白和猪IgG作为检测线和质控线,制作PCV2抗体检测胶体金免疫层析试纸条。检测结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10 min内可以判定结果,对PCV2免疫血清具有高度特异性,与猪其它病毒免疫血清无交叉反应,检测灵敏度与ELISA相近。试纸条在室温保存6个月,其特异性及灵敏度无明显变化。对临床采集的324份血清样品进行检测,结果与ELISA试剂盒总符合率为98.77%。表明本研究建立的PCV2抗体免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合于PCV2抗体的现场检测。     

广西猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

结合流行病学、临床症状、病理变化，采用PCR技术，对2004年1月至2005年5月采自广西14个市97个疑似猪圆环病毒2型（PCV2）感染发病猪场的197份组织病料（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测；同时，对鉴定为PCV2阳性的组织病料和猪场进行了猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪流感病毒（SIV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）的检测，另外，对6个地（市）11个生猪屠宰场采集的外观健康屠宰猪的295份组织样品（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测。结果显示，在197份组织样品中检出PCV2阳性病料108份，平均阳性率为54．82％（108／197），阳性猪场62个，平均阳性率为63．92％（62／97）。PCV2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染的组织病料总阳性率为42．13％（83／197），混合感染的猪场总阳性率为57．73%（56／97）。从21头外观健康屠宰猪的组织样品中检测到PCV2，阳性率为7．10％。由此可见，PCV2感染在广西猪群中已普遍存在，混合感染和健康带毒现象使病情更加复杂。     

江苏地区猪圆环病毒2型流行病学调查

应用复合PCR方法,对江苏地区的162份可疑病料进行了检测,结果72份病料为PCV2阳性,17份为PCV1阳性,其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看,以9~11月发病最多,阳性率高达54.67%。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26.03%和68.12%。通过流行病学调查,表明该病已在江苏地区呈流行趋势。同时对18头PCV2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行PCV2检测,结果有7头PCV2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV2;在这些脏器中,肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100%,较其他受检脏器更适合作为PCV2的检测样品。     

Efficacy of single dose of an inactivated porcine circovirus type 2 (PCV2) whole-virus vaccine with oil adjuvant in piglets

Background

Post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) associated with PCV2 is one of the most costly diseases currently faced by the swine industry. The development of effective vaccines against PCV2 infection has been accepted as an important strategy in the prophylaxis of PMWS.

Methods

In the present study, a PK-15 cell-adapted formalin-inactivated prototype vaccine candidate was prepared using a strain of PCV2 from China. Inactivation of the virus was accomplished using a standard formalin inactivation protocol. The protective properties of the inactivated PCV2 vaccine were evaluated in piglets. Ten 28-day-old pigs were randomly assigned to two groups, each with five. Group 1 was vaccinated intramuscularly with the inactivated virus preparation; Group 2 received sterile PBS as a placebo. By 28 days post-vaccination (DPV), Groups 1 and 2 were challenged intranasally and intramuscularly with 5 × 10⁷ TCID₅₀ of a virulent PCV2 isolate.

Results

The vaccinated pigs seroconverted to PCV2 and had high levels of serum antibodies to PCV2 at 28 days after vaccination, whereas the control pigs remained seronegative. No significant signs of clinical disease were recorded following the challenge with PCV2, but moderate amounts of PCV2 antigen were detected in most lymphoid organs of the control pigs. PCV2 was detected in two out of the five vaccinated pigs. Furthermore, pathological lesions and viremia were milder in the vaccinated group.

Conclusions

The obtained results indicate that the inactivated PCV2 virus vaccine with an oil adjuvant induce an immunological response in pigs that appears to provide protection from infection with PCV2. The vaccine, therefore, may have the potential to serve as a vaccine aimed to protect pigs from developing PMWS.     

猪圆环病毒2型、猪巨细胞病毒和TTV-2混合感染的流行病学调查

本研究根据猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2、猪巨细胞病毒（PCMV）gB基因和TTV2非编码区序列合成引物,利用PCR方法对2009年来自江苏、浙江、上海、广东和广西等5个省市76个患病猪群的仔猪病料进行了病原学检测。结果显示,PCV2阳性率64.5%（49/76）,TTV2阳性率47.4%（36/76）,PCMV阳...