绍兴蛋鸭和高邮鸭胚胎发育过程中激素水平的变化

绍兴蛋鸭和高邮鸭种蛋各１２００枚同时入孵,分别于１２,１６,２０和２４胚龄测定胚蛋及胚胎重并采血分析血液胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）,甲状腺激素和雌激素含量。结果显示,绍兴蛋鸭的蛋重和各胚龄胚胎重都显著低于高邮鸭。孵化过程中胚蛋失重在两种鸭之间无显著差别,而胚蛋相对失重,绍兴蛋鸭却显著大于高邮鸭。两种鸭胚胎时都检测不出雌激素。三碘甲腺原氨酸（Ｔ３）含量在两种鸭之间无显著性差异,而血清甲状腺素     

蛋清内注射三碘甲腺原氨酸对鸭出雏前后生长发育、血清中甲状腺激素水平及肝脏中D1和D3表达的影响

【目的】以金定鸭为研究对象,孵化前向蛋清内注射三碘甲腺原氨酸（triiodothyronine,T3）,检测鸭出雏前后体重、胸浅肌重、血清中甲状腺激素（thyroid hormones,THs）水平的变化,分析肝脏中I型脱碘酶（deiodinases I,D1）和Ⅲ型脱碘酶（deiodinasesⅢ,D3）mRNA表达、蛋白水平及酶活性的变化,探究外源性T3对鸭出雏前后生长发育及肝脏中脱碘酶表达的影响。【方法】将200枚金定鸭种蛋随机分为对照组和试验组,在孵化前从蛋的锐端往试验组种蛋蛋清内注射100 μL含250 ng T3的生理盐水,对照组注射不含T3的100 μL生理盐水,两组种蛋在相同条件下同期孵化。在27胚龄和7日龄时,记录鸭的体重和胸浅肌重,采用放射免疫分析法检测鸭血清中T3和四碘甲腺原氨酸（thyroxine,T4）水平,利用实时荧光定量PCR检测鸭肝脏中D1和D3的mRNA表达,利用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测鸭肝脏中D1和D3蛋白水平及酶活性。【结果】在27胚龄和7日龄时试验组鸭的体重（P = 0.035,0.044）和胸浅肌重（P = 0.027,0.037）均显著高于对照组;试验组血清中T3和T4水平在27胚龄时与对照组之间差异不显著（P > 0.05）,而7日龄时均显著低于对照组（P = 0.040,0.040）;试验组鸭肝脏中脱碘酶mRNA表达量仅D3在7日龄时显著低于对照组（P = 0.040）;在7日龄时试验组鸭肝脏中D1和D3的蛋白含量和酶活性亦均显著低于对照组（P = 0.017,0.045;P = 0.013,0.039）。鸭出雏前后的胸浅肌重与血清中T3水平呈强的负线性相关（r = -0.431,P = 0.025）;血清中T3水平与肝脏中D3的mRNA表达呈极显著正向相关（r = 0.778,P = 0.005）,血清中T4水平与D1和D3的蛋白水平和酶活性均呈正线性相关（r = 0.685,P = 0.020;r = 0.662,P = 0.026;r = 0.710,P = 0.014;r = 0.705,P = 0.015）。【结论】蛋清内注射T3促进了鸭出雏前后生长发育,同时伴随着出雏后循环中THs水平的降低,肝脏中D1和D3的表达发生下调。     

外源T3对鸭胚骨骼肌发育和MyoD mRNA表达的影响

甲状腺激素(thyroid hormones,THs)是体内肌肉发育的重要调节因子,MyoD在骨骼肌特异基因的转录调控,肌细胞的定向和分化中起着主要作用。为探讨三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)对鸭胚骨骼肌生长发育和Myod mRNA表达的影响,分别注射100μL含0.25μg(注射组)和0μg(对照组)T3的生理盐水溶液到入孵前的鸭种蛋蛋清内,检测鸭胚骨骼肌发育和MyoD mRNA的表达情况。结果表明,外源T3对鸭胚胸肌率、腿肌重和腿肌率的影响不显著(P0.05),但显著提高27胚龄鸭胚的体重和胸肌重(P0.05);胸肌MyoD mRNA表达与胸肌重的变化趋势相一致,其中27胚龄注射组胸肌的表达水平显著高于对照组(P0.05);注射组腿肌MyoD mRNA表达在13胚龄显著提高(P0.05),与腿肌发育早于胸肌相一致;注射组胸肌MyoD mRNA表达与胸肌重呈显著正线性相关,胸肌率呈负相关,腿肌MyoD mRNA与腿肌重呈负线性相关。结果显示,外源T3提高了出雏前鸭胚的体重和胸肌重,可能是通过调节MyoD mRNA表达参与胸肌的生长发育。     

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗（HB株）母源抗体的消长规律

【目的】评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗母源抗体的效力,制定疫苗的最小免疫日龄。【方法】随机采集鸭坦布苏病毒病灭活疫苗（HB株）二免后135日樱桃谷种鸭的种蛋孵化,随机取5、7、10和15日龄免疫种鸭后裔雏鸭10只和相对应日龄非免疫种鸭后裔雏鸭5只,采血,分离血清,测定母源抗体,并以0.1mL/羽（含100DID₅₀）的剂量经腿部肌肉攻毒。观察雏鸭攻毒后的临床表现（采食量、粪便、精神和死亡情况）,观察至攻毒后10d。攻毒后2d经颈静脉采血,分离血清进行病毒分离。每份血清接种5枚6日龄SPF鸡胚,0.1mL/枚,37℃孵化,24h以内死亡鸡胚视为非特异死亡,孵化至168h。只要有1枚及以上鸡胚死亡则判该鸭感染。计算母源抗体雏鸭组的攻毒保护率和无母源抗体组的发病率。攻毒后5d,分别称量雏鸭的体重,计算平均日增重。对成对样本进行T检验,分析母源抗体对雏鸭增重的影响。通过试验鸭中和抗体、增重变化和病毒分离的方法评价母源抗体的效力。【结果】（1）1日龄雏鸭的母源抗体阳性率最高,1、5、7、10和15日龄雏鸭的母源抗体阳性率分别为56.1%（37/66）、40%（4/10）、50%（5/10）、30%（3/10）和0%（0/10）,5-7日龄抗体阳性率处于平台期,15日龄时母源抗体降低至全阴性;（2）攻毒后对照鸭表现精神沉郁（20/20）、仰翻和侧翻等神经症状（6/20）及死亡（2/20）,有母源抗体的雏鸭临床症状明显轻于对照组。（3）5、7、10和15日龄免疫种蛋孵化雏鸭攻毒后5d平均增重115.5、142.8、177.8和162.2g。5、7、10和15日龄非免疫种蛋孵化雏鸭攻毒后5d平均增重54.5、91.0、165.0和118.8g。（4）5、7、10和15日龄免疫种蛋孵化雏鸭的攻毒保护率分别为50%（5/10）、60%（6/10）、20%（2/10）和0%（0/10）; 5、7、10和15日龄非免疫种蛋孵化雏鸭的发病率均为100%。（5）5和7日龄雏鸭平均增重和攻毒保护率最高,分别为50%（5/10）和60%（6/10）,10和15日龄雏鸭的母源抗体尽管低（20%和0%）或阴性,仍然有明显的保护作用。【结论】（1）鸭坦布苏病毒病灭活疫苗母源抗体能够保护10日龄内雏鸭;（2）疫苗首次免疫的时间以7-10日龄为最佳。     

低温和VA对笼养蛋雏鸭抗氧化能力及内分泌的影响

以1日龄健康蛋雏鸭为试验动物,采用2×3(温度×VA)重复实验设计,研究适温、低温的环境下日粮中添加不同水平的VA(3 000、5 000、10 000 IU.kg-1)对蛋雏鸭抗氧化能力及内分泌的影响。结果表明,低温显著降低了血清总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05),但对丙二醛(MDA)含量无显著影响(P>0.05),而添加5 000 IU.kg-1 VA会使雏鸭血清中T-AOC升高,MDA水平降低,显著增加SOD活性。温度对雏鸭血清中T3、T4水平影响显著(P<0.05),随着温度降低雏鸭血清中T3、T4水平升高,皮质醇(Cort)浓度低温较适温组略有升高,但差异不显著(P>0.05),胰岛素(Ins)浓度随温度降低而略有下降(P>0.05),随着VA添加量的增加T3变化稳定,添加5 000 IU.kg-1 VA显著增加了T3水平(P<0.05),T4水平有升高趋势,皮质醇与胰岛素水平随VA添加均有下降趋势但都不显著(P>0.05)。VA添加水平在5 000 IU·kg-1还可以提高机体在冷应激下的代谢率,提高机体的抗寒能力,增强机体的免疫力。     

不同光照制度对绍兴鸭和高邮鸭生长与相关激素及其基因表达的影响

取33日龄高邮鸭和绍兴鸭公鸭各32只，每品种分为两组，分别给以20h和6h光照，试验期14d。试验前后称重。Nothern杂交法测定垂体GH mRNA和下丘脑SS mRNA表达水平，放免法测定血清中生长激素（GH）、胰岛素生长因子－1（IGF－1）、甲状腺激素（T3、T4）水平。结果表明：高邮鸭20h光照时增重、GH及T4水平显著低于6h光照（P＜0．01）；而绍兴鸭的增重变化则与高邮鸭相比（P＜0．01），血浆GH水平变化与高邮鸭相同，T4水平无显著变化。光照制度的改变未引起两品种鸭IGF－1、T3水平的显著变化。垂体GH mRNA表达水平的变化与增重变化相反。提示光照直接影响鸭生长轴基因的表达以及激素水平，从而显著影响生长速率，但这种影响在不同品种可有完全不同的表现。     

胚蛋注射25-羟基胆钙化醇对樱桃谷雏鸭孵化性能、早期发育与血清生化指标的影响

为研究胚蛋注射25-OH-D₃对雏鸭孵化性能、1~7 d生长发育和血清生化指标的影响，本研究选取60周龄樱桃谷种鸭蛋200枚，随机分为5组，每组8个重复，每个重复5枚种蛋。在孵化第13.5天时，A组不做处理，B组注射0.2 mL 0.85%的生理盐水，C、D、E组分别注射相同体积不同浓度的25-OH-D₃溶液。出壳后，饲喂基础饲粮，试验期7 d，计算每组的出壳率，测定体重和血清生化指标。结果表明:1)与A组相比，试验C、D、E组雏鸭的孵化率分别显著提高了4.79%、5.54%和3.37%(P<0.05)。试验C、D、E组对7 d雏鸭的体重无显著影响(P>0.05)，试验D组3 d雏鸭的体重显著增加了13.19%，1 d雏鸭的体重显著提高了1.65%(P<0.05)。2)与A组相比，C、D、E组对雏鸭的胫骨发育无显著影响(P>0.05)。3)与A组相比，试验C、D、E组显著提高了雏鸭血清中生长激素和胰岛素样生长因子I的水平(P<0.05)。试验D、E组雏鸭血清中25-羟基胆钙化醇的水平分别显著提高了56.16%和40.16%(P<0.05)。试验C组雏鸭血清中磷的水平提高了22.20%(P<0.05)。4)与A组比，C、D、E组显著降低了雏鸭血清中的LDL水平(P<0.05)。C组显著提高了雏鸭血清中ALB的含量(P<0.05)。D组显著提高了雏鸭血清中ALP的活性和GLU的水平(P<0.05)，E组显著降低了雏鸭血清中ALP和AST的活性(P<0.05)。C、D组显著提高了雏鸭血清中AST的活性(P<0.05)。综上，胚蛋注射25-OH-D₃可提高雏鸭的孵化率和免疫力，其最佳添加剂量为0.8 μg/枚，并促进早期发育，为后期发育提供更好的基础。这提示胚蛋注射25-OH-D₃有利于促进雏鸭胚胎发育，并对雏鸭机体健康发挥潜在的积极作用。     

大豆异黄酮对樱桃谷鸭生长的影响

选用健康的1日龄樱桃谷鸭128只,随机分为4组,其中1组为对照组(基础日粮),其它3组试鸭在喂基础日粮的基础上加入不同剂量的大豆异黄酮,其添加水平分别为5、101、5 mg/kg.在21日龄和42日龄,将试鸭屠宰后测定血清和肌肉的相关指标.结果表明:在1~3周龄,大豆异黄酮5 mg/kg和10 mg/kg添加组樱桃谷公鸭血清羟脯氨酸的含量显著高于对照(P<0.05),10 mg/kg剂量添加组,肝脏DNA含量显著高于对照组,RNA/DNA降低(P<0.05).15 mg/kg添加组樱桃谷公鸭血清羟脯氨酸含量显著增加(P<0.05),樱桃谷母鸭肝脏和胸肌DNA含量显著降低(P<0.05).其它指标与对照组相比差异不显著(P>0.05),性别差异不显著.在4~6周龄,10 mg/kg大豆异黄酮添加组樱桃谷母鸭血清总蛋白含量显著降低,5 mg/kg添加组樱桃谷公鸭血清羟脯氨酸含量显著增加(P<0.05),其他指标与对照组差异均不显著(P>0.05).由此可见,大剂量大豆异黄酮对樱桃谷鸭的生长不利,尤其对幼龄樱桃谷鸭生长影响更大.     

蛋内注射T3对鸭胚骨骼肌发育和MSTN mRNA表达的影响

为探讨生长因子三碘甲状腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)对鸭胚骨骼肌生长发育和肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)mRNA表达的影响,在入孵前的鸭种蛋蛋清内分别注射100μl的生理盐水溶液(对照组)和含0.25μg T3的生理盐水溶液(注射组),检测13、17、21、25、27胚龄鸭胸肌和腿肌发育及骨骼肌MSTN mRNA的表达情况。结果显示,T3处理极显著提高27胚龄鸭胚的胸肌质量,但对腿肌质量影响不显著;21胚龄注射组胸肌MSTN mRNA表达显著高于对照组,27胚龄则显著低于对照组;注射组腿肌MSTN mRNA表达仅在25胚龄显著增加。相关性分析结果显示,两组骨骼肌质量与MSTN mRNA表达呈不同程度的线性相关。表明蛋内注射T3能增加鸭胚胸肌质量,并改变MSTN mRNA表达量,MSTN mRNA的差异表达可能在鸭胚胸肌发育过程中具有重要的作用。     

鸭胚骨骼肌GHR基因表达与生长发育的关系

为了研究不同品种鸭胚胎期胸肌和腿肌中GHR基因mRNA的发育变化规律,采用实时荧光定量PCR方法测定生长速度不同的高邮鸭和金定鸭在13日、17日、21日、25日和27日胚龄时胸肌和腿肌中GHR基因mRNA的表达水平,并分析其与胚重、胸肌重和腿肌重的关系。结果表明:GHR mRNA在两个品种鸭肌肉早期发育中表现出一致的表达规律,在胸肌中呈"波浪形",在腿肌中呈先降后升再降,然后趋于水平的表达趋势。胸肌和腿肌GHR mRNA的表达量在两个品种相同胚龄间差异均不显著(P>0.05)。不同性别间比较,除了在27日胚龄时,公鸭胸肌GHR mRNA略低于母鸭外,其他胚龄都是公鸭高于母鸭。在13日、17日和21日胚龄时,两个品种鸭的胸肌GHR mRNA的表达量均显著或极显著低于腿肌(P<0.05或P<0.01),而在25日和27日胚龄时,两个品种鸭的胸肌GHR mRNA的表达量均极显著高于腿肌(P<0.01)。相关性分析表明,两个品种鸭胸肌中GHR mRNA的表达与其胸肌重和胚重均呈极显著正相关(P<0.01);两个品种鸭腿肌中GHR mRNA的表达与其腿肌重和胚重均呈极显著负相关(P<0.01)。提示,肌肉中GHR基因表达具有显著的胚龄、组织和性别差异,但不存在品种差异;在鸭胚胎期,胸肌中GHR mRNA表达对胸肌重和胚重可能有正调控作用,而腿肌中GHR mRNA表达对腿肌重和胚重可能有负调控作用。