紫薇LiUFGT基因的克隆与生物信息学分析

为探究类黄酮葡萄糖基转移酶基因(UFGT)在紫薇花青素生物合成中的分子机制及表达情况,本文以紫薇花瓣为试材,根据紫薇转录组序列设计特异性引物,通过PCR克隆LiUFGT基因开放序列,进行生物信息学分析,再对LiUFGT基因进行荧光定量PCR分析。结果表明：LiUFGT基因的开放阅读框长1 431 bp,编码476个氨基酸,相对分子量为52 465.22 Da,理论等电点为5.66;LiUFGT蛋白为不稳定疏水蛋白,且以α-螺旋和无规则卷曲为主;经过多序列比对发现,LiUFGT蛋白和石榴的相似性最高,为68.70%;系统进化分析表明,LiUFGT蛋白与杨树、石榴、夏栎UFGT蛋白的同源性最高。此外,LiUFGT基因在红色花瓣紫薇中的表达量最高,在白色中最低,说明LiUFGT基因对紫薇花色基因具有直接调控的作用。本研究结果为进一步阐明LiUFGT基因在紫薇花青素合成机制中的调控作用提供了理论基础。     

油茶丙酮酸激酶基因全长cDNA克隆及序列分析

丙酮酸激酶是糖酵解途径的关键酶,在油料作物脂肪酸合成中有重要作用。在实验室构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶PK基因的全长cDNA克隆。该基因序列长2 114 bp,开放读码框为1 737 bp,编码579个氨基酸,蛋白分子量为63 766.5 Da,分子式为C2774H4470N784O875S30,与其他植物的PK基因具有较高的相似性。PK基因系统进化树表明,油茶与蓖麻、杨树、葡萄的亲缘关系最近。     

油茶FAD2基因全长cDNA的克隆和序列分析

FAD2基因控制油酸转化为亚油酸,是油茶油脂合成代谢的关键酶基因.在构建的油茶.EST文库基础上,采用5'RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶FAD2基因的全长cDNA克隆.该基因序列长1 682 bp,开放阅读框为1 149 bp,编码382个氨基酸,并且具有FAD2特有的保守序列和相关特征.经过比对分析,发现油茶的FAD2基因与其他植物的FAD2基因具有较高的相似性.     

雷竹OsFCA同源基因的克隆与序列分析

分别以雷竹嫩叶的基因组DNA和幼穗的cDNA为模板,采用PCR方法扩增出长为490bp及262bp的片段。序列分析结果表明,该基因序列包含1个长为228bp的内含子。其编码区共编Ns86个氨基酸。其氨基酸序列与水稻中OsFCA、小麦中TaFCA的一致性分别为79．8％与69．9％,表明雷伢中可能存在调控开花的自主调控途径。     

油茶脂氢过氧化物裂解酶基因的克隆与序列分析

以油茶近成熟种子为材料,根据油茶EST文库中已知的脂氢过氧化物裂解酶EST序列,利用3’RACE与5’RACE技术,克隆到脂氢过氧化物裂解酶的全长cDNA序列。该基因全长1648bp,,包含一个1476bp开放阅读框长,编码491个氨基酸,5’与3’非编码分别为52bp、121bp。预测该蛋白相对分子量为54.7779KDa,等电点为6.77,是个叶绿体转运肽,N端包含有22个疏水氨基酸残基组成的序列,不仅具有转运肽富含的丝氨酸,还含有大量转运肽中很少存在的脯氨酸。多序列比对发现油茶脂氢过氧化物裂解酶核苷酸序列与茶的相似性达到96%,因此将该基因命名coHPL。     

马尾松苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析

苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia lyase,PAL)是苯丙烷类代谢的关键酶,催化苯丙氨酸转化为肉桂酸,促进黄酮、木质素等次生代谢产物的合成。根据其他植物PAL基因的DNA保守序列设计的简并引物,经过PCR扩增,得到1条864 bp的特异性片段,编码288个氨基酸。通过分析其序列和编码的氨基酸序列,发现其与其他物种的PAL基因高度同源,证实为马尾松PAL基因的核心序列。所得序列已经登陆在NCBI的Genbank中,序列号为GQ142010。     

北美鹅掌楸LtuHMGS基因的克隆与生物信息学分析

[目的]研究北美鹅掌楸LtuHMGS基因的结构特性、亚细胞定位及表达模式,为从分子水平探究北美鹅掌楸萜类合成途径提供理论基础.[方法]从北美鹅掌楸转录组数据库中鉴定出一条HMGS基因序列,采用RACE技术克隆其全长cDNA,将其命名为LtuHMGS.对LtuHMGS基因的ORF进行生物信息学分析,探究其理化性质及与同源...     

杉木CCoAOMT基因部分cDNA克隆与序列分析

利用CODEHOP设汁CCoAOMT基因的简并引物,通过RT-PCR的方法,从杉木茎段中克隆到1个长度为614 bp的PCR产物,产物经pMD18-T载体克隆转化至DH5α大肠杆菌中,序列通过同源性比对后显示该片段与其它植物的CCoAOMT基因具有较高的同源性.利用生物信息学方法分析发现,该序列在112～651 bp片段上有一个开放性阅读框,该序列编码的是一个酸性蛋白,亲水性较弱.疏水性较强;信号肽序列为第23位至第45位,二级结构以α-螺旋(40.62%)与不规则盘绕(45.31%)为主,没有发现β转角区域.     

毛竹甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与序列分析

为了分离毛竹抗逆相关基因,利用RT-PCR和RACE技术,从毛竹叶片中克隆出甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因PeGAPDH的全长cDNA序列(GenBank登录号GU356597)。该序列全长1368bp,完整阅读框1013bp,编码一个具有337个氨基酸残基的蛋白。利用生物信息学软件对PeGAPDH蛋白进行了分析,结果表明:PeGAPDH蛋白分子量为36.643kDa,等电点为6.33;该蛋白含有2个保守区,即N端的NAD+结合区和靠近C端的催化功能区。PeGAPDH是一种亲水性、非分泌型蛋白,定位于膜的表面,属于氧化还原酶系,主要在中间产物代谢和能量代谢中起作用。蛋白质进化树的构建结果表明:PeGAPDH与水稻等禾本科植物来自细胞质中的GAPDH蛋白的亲缘关系很近,同双子叶植物的GAPDH则相差较远。     

竹子捕光叶绿素a/b结合蛋白基因全长的克隆和序列分析

采用RT-PCR技术与RACE技术,从绿竹中克隆到捕光叶绿素a/b结合蛋白基因全长cDNA,命名为cab-BO1(GenBank登记号:EF061137).该基因长1 102 bp,从第64～861 bp含有1个开放阅读框,编码265个氨基酸.cab-BO1编码的氨基酸中第64～232位包括典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域,第9～11位为蛋白激酶C的磷酸化位点,第27～52位为泛素结构功能域信号,第55～58位为酪氨酸激酶(CK2)磷酸化位点.序列相似性分析结果表明:cab-BO1 DNA序列和编码的氨基酸序列与玉米、小果野蕉、小麦、水稻等的cab基因及其氨基酸序列的相似性分别在85%和89%以上,显示了cab家族基因在进化过程中的保守性.     

Cloning and sequence analysis of atom gene from Sclerotimia sclerotiorum

An atom gene was cloned from genomic DNA of Scleortinia sclerotiorum by inverse PCR. The evolutionary relationships of S. sclerotiorum and other fungi in atom gene were studied. Results showed that the atom gene from of S. sclerotiorum has a single open reading frame of 4 773 bp and does not include any introns. The derived amino acid sequence consists of 1 590 residues, and it is homologous to all fungal AROM proteins studied so far. The theoretical isoelectric point （pl） and molecular weight （Mw） is 6.5 and 172.66 kD, respectively GC percentage of the arom gene is 44.94. According to the results of searching from CDD and Prosite database, AROM protein of S. sclerotiorum contains five conserve domains： 3-dehydroquinate synthase domain, 3-dehydroquinate dehydratase （3-dehydroquinase） domain, shikimate 5-dehydrogenase domain, shikimate kinase domain, and -enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase （EPSP sythase） domain, and four motifs： two EPSP synthase signatures, dehydroquinase class I active site, shikimate kinase signature. According to the PIR Site Rule PIRSR000514-1, four functionally important amino acid residues are found by alignment. Putative TATA box and CAAT box locate separately in -23 and -77 loci in 5＇ un-translated region, and two loci found in downstream atom gene are likely polyadenylation signals. In addition, phylogeny of atom gene is analyzed.     

油桐乙酰辅酶A羧化酶BC亚基全长cDNA克隆及序列分析

以葡萄桐的近成熟种子为材料,根据油桐转录组测序结果设计引物,采用RT-PCR技术克隆了油桐乙酰辅酶A羧化酶BC亚基基因的全长c DN A序列。该基因c DNA序列全长1 605 bp,编码534个氨基酸。推导出的BC亚基氨基酸序列蛋白的等电点p I为7.98,相对分子量58 262.0 Da,稳定系数为38.13,生物信息学分析表明,此蛋白含有2个比较明显的跨膜区,是一个不稳定的非分泌蛋白。模体搜索结果表明在BC上具有ATP结合位点。三级结构中有16个α螺旋,3个部分形成一个内凹的结构。     

油茶乙酰辅酶A羧化酶BC亚基全长cDNA克隆及序列分析

以油茶‘湘林1号’品种的近成熟种子为材料,采用简并PCR、RACE、交错PCR等技术,获得了油茶乙酰辅酶A羧化酶BC亚基基因的全长cDNA克隆。该基因cDNA序列全长1 901 bp,含有一个1 599 bp的ORF,编码533个氨基酸残基。BC蛋白的等电点pI为6.88,分子量为58 509.3 u,含两个跨膜结构域,是一个不稳定的非分泌蛋白。模体搜索结果表明在BC上具有N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、ATP结合位点等多个功能结构域。同源建模的模型中发现12个α-螺旋,整个BC蛋白为一个内凹的结构。该基因已登录到GenBank,并被命名为co-bc。     

杨树木质素合成酶hct基因的克隆及核苷酸序列分析

根据毛果杨全序列（AC185363.2）中唯一具有转移酶功能的保守区设计引物,以正在分化的2年生欧美杨107次生木质部总RNA为模板经RT-PCR扩增出hct基因片段,与pMD20-T载体连接,重组质粒经特异引物扩增、限制性内切酶酶切和测序鉴定。结果表明,扩增片段长度为709bp,包含一个708bp的开放阅读框,与毛果杨全序列及HCT2（EU603314）的同源性均为98%,编码的氨基酸序列与毛果杨HCT2氨基酸（ACC63883.1）的同源性为98%,断定我们克隆的cDNA为hct,属于转移酶超家族,GenBank登录号为FM202091,该重组质粒命名为pMD20-T-hct。     

球毛壳菌(Chaetomium globosum)小热休克蛋白HSP22.4基因克隆及表达

小热休克蛋白(sHsps_)是生物体中参与防御反应的内源细胞保护因子。为了研究球毛壳菌中(Chaetomiumglobosum)中的小热休克蛋白(AY491980)。对球毛壳菌的小热休克蛋白进行了克隆和在大肠杆菌中进行了表达。BlastX分析表明球色壳菌的小热休克蛋白与粗糙脉孢菌(Neurosporacrassa)小热休克蛋白在氨基酸上的序列同源性最高,为65%。将HSP22.4基因编码区插入原核表达载体pGEX-4T-2、构建成表达质粒pGEX-HSP。利用pGEX-HSP质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况,结果发现在50kD处有一特异性融合蛋白带,与预期相符,说明HSP22.4基因已经在大肠杆菌中表达。本研究为进一步研究小热休克蛋白的功能奠定了基础。图6参15。     

Cloning and sequence analysis of gene encoding plasma aquaporin of Tamarix albiflonum

Plant aquaporins are water-selected-channels in plants and are involved in seed germination, cell elongation, stoma movement, fertilization and so on. Some plant aquaporins also play an important role in drought stress response. In this paper, the gene encoding the Tamarix albiflonum Aquaporin (AQP) was amplified by 5′rapid amplification of cDNA end (RACE) on the basis of the sequence information obtained from the expressed sequence tag of the subtractive hybridization library constructed under PEG6000 stress. The cDNA of the T. albiflonum AQP gene is 1,043 bp long, encoding a protein of 287 amino acids with a predicted molecular mass of 30.9 kDa, has 6 transmembrane regions, and possessing the major intrinsic protein (MIP) family signal consensus sequence SGXHXNPAVT and the higher plant plasma membrane intrinsic protein (PIP) highly conservative sequence GGGANXXXXGY and TGI/TNPARSL /FGAA I/VI/VF/YN. A comparative molecular analysis of the nucleotide sequence in National Center for Biotechnology Information (NCBI) databases showed that it shared 95% homology with the gene of Arabidopsis thaliana (MIP-C), with a theoretical isoelectric point 8.84. __________ Translated from Bulletin of Botanical Research, 2006, 26(4): 475–479 [译自: 植物研究]     

天女木兰种子天冬氨酸蛋白酶基因的克隆与分析

天冬氨酸蛋白酶在天女木兰种子萌发过程中发挥着重要作用。以天女木兰种子为试验材料,利用同源克隆法RACE技术,从天女木兰种子中克隆得到天冬氨酸蛋白酶基因,全长1 545 bp,可以编码514个氨基酸残基。同源性分析显示,目的序列推导的氨基酸序列与其它植物中已知的天冬氨酸蛋白酶基因的氨基酸序列的同源性都在85%以上;采用生物信息学的方法进行分析,初步预测该基因编码的蛋白属于跨膜的分泌蛋白,大部分区域属于疏水结构;结构域的预测分析显示,此类蛋白包含约100个植物组织蛋白酶所特有的区域,该区域可能在植物液泡中发挥着重要作用。本研究为下一步系统、全面地研究天女木兰种子休眠的分子机理奠定了基础。     

Isolation and sequence analysis of the promoter and an allelic sequence of the iron-sulfur protein subunit gene from the white-rot fungusPleurotus ostreatus

We have isolated a structural gene ofsdil, which encodes the iron-sulfur protein (Ip) subunit of succinate dehydrogenase (EC 1.3.99.1), from a white-rot basidiomycete,Pleurotus ostreatus. Here we report isolation of the promoter region ofsdil and an allelic sequence encoding the second-type cDNA fragment isolated in the former experiments. The nucleotide sequence analysis of the promoter region revealed the existence of putative CAAT and TATA boxes, which permits us to develop an expression system in this species. The Southern blot analysis and the restriction fragment length polymorphism assay using monokaryotic strains demonstrated that no family genes tosdil exist in the haploid genome ofP. ostreatus. Moreover, a genetic analysis to detect a linkage between thesdil genotypes and flutolanil resistance in the mutantP. ostreatus strains was also developed.     

枣果实中苯丙氨酸解氨酶基因的克隆及序列分析

为给从分子水平上揭示枣核发育的机理及培育无核枣优良品种提供理论基础,以"金丝小枣"幼果为试材,对枣果实中苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因进行了克隆,并进行了生物信息学分析.用分子克隆方法首次从枣树中克隆了苯丙氨酸解氨酶基因部分.DNA序列,并命名为ZjPAL,ZjPAL长1954 by,编码559个氨基酸.通过核苷酸和氨基...