棕榈藤基因组DNA提取及RAPD反应条件探索

棕榈藤(rattan)是棕榈科(Palmae Juss．)藤本植物，属棕榈科省藤亚科(Calamoideae)省藤族(Calameae)植物，包括13属600余种，主要分布于热带地区。棕榈藤是热带森林宝库中的多用途植物资源，具有很高的经济价值和开发前景，是仅次于木材和竹材的重要林产品，其中黄藤(Daemonorops margaritae(Hance)Seccari)和单叶省藤(Calamus simplicifolius Wei)是我国大面积栽培的2个重要藤种。     

闽楠基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以闽楠叶片为材料，研究了闽楠基因组DNA提取方法及RAPD反应条件。采用改良的CTAB高盐法提的DNA质量较高，适宜RAPD-PCR分析。在20μL反应体积中，RAPD分析的优化反应体系为：2mmol/L的Mg^2 ，200μmol／L dNTP，1，5ng/μL的模板DNA，1UTap酶，50nmol／L引物。     

麻竹RAPD反应条件的优化

以麻竹DNA为模板,对影响麻竹RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立麻竹RAPD反应的最适体系。最终得出的麻竹RAPD反应体系为:20μL反应体系,2μL10倍反应缓冲液,模板含量为50ng,2 5mmol·L-1的Mg2+,1 5U的Taq酶,dNTP为1 75mmol·L-1,引物浓度为0 4μmol·L-1。优化后的RAPD反应程序为:94℃3min→[94℃1min→37 5℃1min→72℃1min20sec]40个循环→72℃8min→4℃保持。     

桢楠DNA提取和RAPD条件的优化

以桢楠（Phoebe zhennan）新鲜叶片、硅胶干燥叶片为材料,研究了DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化。得到了桢楠RAPD的优化反应体系及程序,适合桢楠RAPD反应的体系总体积为25μL,DNA模板2μL,Taq DNA聚合酶用量0.3μL,引物用量1μL,Mg2＋用量5μL,dNTPs用量0.5μL,ddH2O16.2μL;适合桢楠RAPD扩增的程序是94℃预变性3 min,94℃变性1min,36℃复性1 min,72℃延伸2 min,42个循环,最后72℃延伸10 min,产物于4℃保存,同时结果表明硅胶保存的样品完全可以与传统的新鲜叶片得到同样的PCR扩增结果,完全可以满足研究需要。     

落叶松—杨栅锈菌DNA提取及RAPD条件优化

本文对采自全国8个省市的落叶松—杨栅锈茵茵株进行了基因组DNA提取，并以其为模板对影响RAPD扩增1的重要参数进行优化试验，以期建立落叶松—杨栅锈茵RAPD反应的优化体系。结果表明，PCR扩增体系最佳条件是：25μL体积中，2．5mmol／LM^2 ，30ng／μL模板，0．15mmol／LdNTP，1．5μL引物，0．75UTaq聚合酶。     

试剂盒法提取山杨基因组DNA的条件优化

利用DNA提取试剂盒提取山杨叶片DNA,对其过程进行改良优化,从而获得一种快速、简便的提取山杨高质量基因组DNA的方法.在原试剂盒的操作基础上,对异丙醇是否冰预冷、消化时间、洗脱液用量、材料用量等条件进行了优化,并对所提取的基因组DNA的浓度、纯度进行了检测.优化后的方法提取到了较高质量的山杨基因组DNA.     

光核桃叶片DNA提取条件的优化

光核桃是我国特有的蔷薇科桃属植物,具有较强的耐旱、抗病能力和更新容易等特性。提取高质量的基因组DNA是研究光核桃的分子特性的关键所在。为了获得高质量的光核桃基因组DNA,利用CTAB提取法对其提取方法进行了优化。结果表明:CTAB提取液的最佳用量为700μL,最佳裂解时间为40 min,酚、氯仿、异戊醇混合液(体积比为25∶24∶1)的最佳使用次数是2次,氯仿、异戊醇混合液(体积比为24∶1)的最佳使用次数也是2次,异丙醇的最佳使用体积分数为2/3。     

相思基因组DNA提取及其RAPD初步分析

以马占相思、大叶相思、厚荚相思幼苗的叶片为材料,采用SDS法、改良SDS法和改良CTAB法进行了基因组DNA的提取并对DNA提取方法作了比较,结果表明改良CTAB法提取效果最好。同时利用改良CTAB法提取出的DNA为模板进行了RAPD分析,鉴别了不同树种之间的多态性。其中有11个引物共扩增出117条谱带,树种间多态性比率为54.7%,遗传多态性明显高于种内。     

山竹子基因组DNA提取及SRAP反应体系优化

采用改良CTAB法提取山竹子基因组DNA,并以me1和em3正反向引物组合对山竹子进行了SRAP体系的优化。结果表明：使用CTAB free缓冲液进行前处理可去除大部分的杂质,获得的DNA纯度较高,OD260/OD280均在1.7~1.9之间,RNA消化彻底,DNA无明显降解,进行SRAP分析条带清晰,多态性好。在25μL反应体系中,5种主要成分的适宜浓度或用量分别是：Taq DNA聚合酶0.5 U,Mg2＋2.0 mmol.L-1,dNTPs 0.15~0.2 mmol.L-1,模板DNA 10~50 ng,引物0.6~0.8μmol.L-1。该体系适用于山竹子SRAP分析,进行遗传图谱构建、基因定位与克隆、比较基因组学、遗传多样性、cDNA指纹图谱等方面的研究。     

梓树属植物基因组DNA提取及RAPD体系优化

以楸树幼嫩叶片为材料,进行楸树基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化,试验表明,采用改良的2×CTAB法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析。RAPD反应的优化体系为(25 ul反应体系):17.8 ul ddH2O;0.5 ul dNTP;2.5 ul 10×buffer;1.0 ul随机引物;2.0 ul Mgcl2;1.0 ul模版;0.2 ul Taq酶。     

长叶榧RAPD反应条件的研究

以长叶榧为材料 ,研究了RAPD的各种影响因素。确定了长叶榧的最佳的RAPD反应体系为 :15 μl反应体系中含5 0mmol·l-1KCl、10mmol·l-1Tris-HCl(pH9.0 )、0 1%Triton - 10 0、2nmol·μl-1MgCl2 、0 6nmol·μl-1dNTPs、0 .75UTaq酶、30ng引物以及 10 0ng左右的长叶榧DNA。     

云南箭竹的资源分布状况调查初报

对分布在我国西南地区的云南箭竹的资源状况进行调查.结果发现云南箭竹的分布范围较广,其分布区介于北纬24°13'～28°58'之间,其生长适应海拔范围大概为1 700～2 600 m;最冷月的平均气温要大于4.2℃,年平均气温要介于17.8～19.7℃,年极端低温不能低于-11.2℃,≥10℃的积温不低于3 788.3℃;年降雨量平均为1 054.8 mm,介于559.4～1 600.0 mm之间,年平均有霜日数不能多于123.5d.目前发现云南箭竹共有3个变异类型即原变型,东坡竹和脱毛昆明实心竹,东坡竹主要分布在大理鸡足山,脱毛昆明实心竹主要分布在昆明市西山和嵩明县.     

亚侧耳RAPD反应体系的优化

经过RAPD优化试验,确定适合亚侧耳PCR扩增体系(总体积25μL)为:10×PCR Buff-er 2.0μL、2.5mM/L dNTPs3.0μL、5U/μL Taq酶0.20μL、5μM/L引物1.5μL、200ng/μl模板DNA 2.0μL、去离子水16.30μL。PCR扩增程序为:94℃预变性3min,94℃变性30s,37℃退火30s,72℃延伸2min,40个循环,72℃延伸10min。     

香榧RAPD分析实验条件的优化

试验通过系统的比较研究 ,建立了香榧 RAPD分析的优化反应体系和实验条件 ,即 2 0μl的反应体系中含有 5 0 ng DNAtemplate、1.5μl 10× Buffer、1U Tag NDA聚合酶、2 .4mmol/L Mg Cl2 、2 40μmol/L d NTPs、0 .8μmol/L Primer。适宜的扩增程序为95℃变性 3 min,1个循环 ;94℃变性 3 0 s,3 6℃退火 3 0 s,72℃延伸 60 s,3 5个循环 ;72℃延伸 5 min,反应终止。该反应体系重复性高 ,条带亮度均匀 ,弥散现象少     

五唇兰基因组DNA提取方法的优化

五唇兰组织内含有大量的酚类、多糖以及此生代谢产物,DNA提取较为困难。为获得高质量的五唇兰基因组DNA,文中采用传统十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、常规十二烷基硫酸钠(SDS)法和改进的CTAB法对五唇兰基因组DNA的提取进行比较。结果表明:改进的CTAB法比传统CTAB法和常规SDS法都好,可以得到质量较好的DNA,电泳条带清晰,通过紫外分光光度计检测,A260/A280为2.0以上。     

药用半枫荷基因组总DNA提取及ISSR-PCR反应体系优化

利用正交试验设计方法,对影响ISSR-PCR反应的Mg2＋、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶等因素进行优化的结果表明：在20μL PCR反应体系中含10×PCR Buffer,0.018μmol/L引物,4.0 mmol/L Mg2＋,15 ng/μL模板DNA,1.5 U Taq DNA聚合酶,4种dNTPs各0.15 mmol/L为半枫荷ISSR-PCR最适反应体系。     

不同地理种源云南箭竹维管束及导管形态特征研究

云南箭竹是优质笋用竹种,具有较高的开发价值.通过对不同地理种源云南箭竹的竹材维管束和导管的系统的研究,为云南箭竹的利用提供了部分基础数据.通过对云南箭竹竹材切片的维管束和导管进行定量显微观测和数理统计分析比较,结果表明:云南箭竹的维管束为开放型与半开放型,同一高度的不同部位(径向)维管束的大小和分布各有不同:地理分布、秆龄及种内变异均对云南箭竹的维管束形态有显著影响:云南箭竹导管直径在径向差异显著.     

云南箭竹化学成分分析及不同地理种源之比较

通过对不同地理种源的云南箭竹化学成分进行的研究结果表明：不同年龄间的云南箭竹的化学成分之间差异不明显,不同地理种源的云南箭竹化学成分含量差异不显著。其中采自西山云南箭竹竹秆的SiO2含量为2．02％,白马河林场云南箭竹的SO2含量为1．87％,大理云南箭竹的SiO2含量为1,93％;西山云南箭竹的灰分含量为2．56％,白马河林场云南箭竹的灰分含量为2．69％,大理云南箭竹的灰分含量为2．29％;苯一醇提取物的含量西山云南箭竹为3．47％,白马河林场云南箭竹为4．03％,大理云南箭竹为4．01％;木质素的含量西山云南箭竹为26．58％,白马河林场云南箭竹为23．39％,大理云南箭竹为23．74％;综纤维素的含量西山云南箭竹为70．86％,白马河林场云南箭竹为55．45％,而大理云南箭竹为69．56％。由于不同地理种源之间云南箭竹秆材的化学成分含量的差异并不显著,因而在筛选云南箭竹作为材用竹推广引种时,并不需要考虑地理种源因素。     

核桃RAPD条件的优化

对核桃RAPD分析中Mgh、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶浓度及复性温度等因素进行了比较影响分析。建立了适合核桃DNA多态性分析的RAPD反应体系：25μL反应液中,3．5mM Mg^2＋、0．2mM dNTPs、0．2μM随机引物、1．0UT aq酶、50ng～100ng模板DNA;反应过程为45个循环,94℃变性60s,36℃退火60s,72℃延伸120s。     

核桃DNA的提取及RAPD分析的引物筛选

以核桃叶片为材料,对其DNA提取方法和RAPD引物的筛选进行了研究。结果表明,采用核沉淀法从核桃叶片中能提取到高质量的DNA,可以用于RAPD分析;从120条随机引物中筛选出了14条显示核桃遗传差异的多态性引物。