猫疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立与初步应用

建立猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)PCR检测方法,应用于临床样品中FHV-1的快速检测。根据猫疱疹病毒Ⅰ型的gI基因序列设计了一对特异性引物,以疑似猫疱疹病毒Ⅰ型感染猫的眼鼻分泌物总DNA为模板,建立了PCR检测方法,对所建立的方法进行特异性、敏感性和重复性验证,并对26份临床样本进行检测。结果表明,所建立的PCR诊断方法与犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、绵羊肺炎支原体(M.ovis)、牛支原体(M.bovis)、牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)均无交叉性反应,最低检测DNA模板浓度为3.23×10~3 copies/μL。对26份临床病例进行检测,阳性率61.54%。说明建立的FHV-1PCR检测方法具有特异性强、敏感度高、方便快捷等优点,适合于临床FHV-1感染的快速检测。     

犬猫耳痒螨病的防治

犬、猫的耳痒螨病(Otodectosis)都是由耳痒螨属的耳痒螨(Otodectes cynotis)寄生于外耳道所引起的外耳部的炎症。此螨分布于世界各地,犬、猫感染较为普遍,而且还可感染雪貂和红狐。此病临床多见。     

CDV、CPV、CAV-2及CPIV多重PCR的建立及应用

为建立一种快速检测犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒Ⅱ型(CAV-2)和犬副流感病毒(CPIV)的多重PCR方法,参照Gen Bank中的相关病毒基因序列,分别设计了4对引物,用于特异性扩增CDV H基因、CPV VP2基因、CAV-2 E3基因和CPIV NP基因上的目的片段。通过优化反应条件,建立了同时扩增CDV(410 bp)、CPV(253 bp)、CVA-2(655 bp)和CPIV(868 bp)的多重PCR方法。利用建立的多重PCR方法,对CDV、CPV、CAV-2、CPIV、CDV+CPV+CAV-2+CPIV和犬冠状病毒(CCV)的DNA或c DNA模板进行扩增,发现该方法的特异性良好。利用建立的多重PCR方法与单一PCR方法进行敏感性比较,发现两者敏感性相差10倍,证明多重PCR方法敏感性良好。利用该方法对从北京市采集的30份犬病料样品进行检测,发现CDV阳性率为63.33%(19/30)、CPV阳性率为33.33%(10/30)、CAV-2阳性率为6.66%(2/30)、CPIV阳性率为0(0/30)。检测结果证明建立的多重PCR方法可用于临床诊断。     

北京地区犬猫弓形虫病流行病学调查

为初步调查北京地区犬猫弓形虫感染的流病学特征,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测2010年5月至2011年4月采集的家养犬猫、流浪猫血清样本.其中,家养犬血清样本1876份,家养猫血清样本561份,检测发现,家养犬动物弓形虫IgG抗体阳性率24.9％;家养猫弓形虫IgG阳性率21.2％;同时检测流浪猫样本201份,阳性率30.3％.家养犬弓形虫血清抗体阳性率不同季节间差异显著(P＜0.05),夏季最高,为30.0％,家养猫弓形虫血清抗体阳性率不同季节间无显著差异(P＞0.05).不同性别犬猫弓形虫血清抗体阳性率无显著差异(P＞0.05).随着年龄增长,犬猫弓形虫抗体阳性率均有明显增长.对25例弓形虫抗体阳性家养犬病例和37例弓形虫抗体阳性家养猫病例进行了回访调查,结果发现,该62例动物主人的弓形虫检测结果均为阴性.     

犬附红细胞体PCR检测方法的建立及应用

通过将GenBank上报道的犬附红细胞体16S rRNA基因序列与其他物种同源序列进行比对,取其种间特异性和种内保守性较高区域设计1对引物,以吉林省延边地区犬附红细胞体基因组DNA为模板进行PCR扩增,并进行特异性、敏感性试验验证,建立犬附红细胞体PCR诊断方法,应用于临床检测。结果表明:该方法可成功扩增出大小为529 bp的犬附红细胞体片段,与GenBank中German no.1(AY150973.1)序列同源性为98.5%。其最低DNA检测量为25 fg/μL,不与犬巴贝斯虫、犬弓形虫及猪附红细胞体等病原体基因组产生交叉反应。同时通过对57份犬血液样本的检测结果说明,该方法检出率明显高于姬姆萨染色镜检法,且避免了假阳性。本试验所建立的PCR检测方法具有特异、敏感、准确等优点,为犬附红细胞体病的诊断提供了一种可靠的方法。     

一例猫耳痒螨和马拉色菌混合感染的诊治

<正>耳痒螨是由痒螨科耳痒螨属的犬耳痒螨寄生于犬、猫外耳道中所引起的疾病。多数的耳痒螨寄生于犬、猫的外耳道内,有时也寄生于头、颈及尾部,可通过刺破寄生部位皮肤以吸吮淋巴液为生。患病动物出现剧烈瘙痒、红斑、血肿、结痂乃至堵塞外耳道为主要特征。马拉色菌属有丝孢菌,常寄生于犬、猫的外耳道、口、肛周等部位,主要引起寄生部位皮肤发红、剧痒、皮肤增厚、结痂等症状。2019年8月份,本院接收一例猫耳痒螨和马拉色菌同时感染的病例,现将诊治情况进行阐述。1     

同时检测犬瘟热病毒和犬细小病毒双重PCR方法的建立

为建立可以同时检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的CDV N蛋白序列和CPV NS基因保守序列,设计合成2对特异性引物。通过优化反应条件,对CDV阳性病毒株反转录后的cDNA模板和CPV的DNA模板进行双重PCR扩增,同时得到2条与试验设计相符的669 bp(CDV)和392 bp(CPV)特异性条带,建立了同时检测CDV和CPV的双重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测这2种病毒,而对犬腺病毒Ⅰ型、犬腺病毒Ⅱ型、狂犬病毒检测均为阴性;CDV和CPV的最低检出限分别为101.8TCID50和101.4TCID50。采用该方法对在黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为30%;CPV阳性率为23.33%,表明建立的PCR方法可以用于临床诊断。     

猫等孢球虫荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速、准确检测猫等孢球虫的方法，本研究采用GenBank登录的猫等孢球虫18s r RNA基因序列(L76471.1)保守区设计并合成1对特异引物，从经显微镜检测为猫等孢球虫阳性的粪便样品中选取一份提取猫等孢球虫DNA，以其为模板经PCR扩增猫等孢球虫18s r RNA基因片段，构建重组质粒标准品p UCm-T-IF1并经PCR及测序鉴定正确后作为质粒标准品。通过优化反应条件，建立了猫等孢球虫的荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示，该方法可以特异性的检测猫等孢球虫DNA，对猫贾第虫、猫滴虫、猫细小病毒、猫冠状病毒DNA/cDNA的检测结果均为阴性；对重组质粒标准品的检测限可达6.26×102拷贝/μL。批内和批间重复性试验的变异系数分别是0.61%～2.06%和0.32%～0.50%。表明本研究建立的方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法对23份临床疑似猫等孢球虫感染的样品进行检测，荧光定量PCR的检出率为78.26%(18/23)，明显高于漂浮法检测的阳性率43.48%(10/23)，并且经漂浮法检测为阳性的样品采用该方法检测均为阳性。结果表明，本研究建立的荧光...     

犬圆环病毒EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

建立了犬圆环病毒(canine circovirus, CanineCV)EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法。用PCR方法克隆CanineCV Rep基因中的高保守区，扩增的目的片段大小为217 bp,将其克隆至pMD18-T载体上，构建PCR检测阳性参考质粒，并用阳性参考质粒，进行各项反应条件优化。建立的标准曲线呈现出较高拟合性的线性回归，R²值为0.999 5;该方法检测灵敏度为3.88×10¹ copies/μL;在重复性试验中，组内和组间重复变异系数均小于2%,表明该方法具有良好的重复性；该方法对犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬流感病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、犬冠状病毒等犬常见病原的检测均无交叉反应；临床样本检测表明，所建立的EvaGreen实时荧光定量PCR对CanineCV的阳性检出率为2.82%(5/177),高于普通PCR检测的CanineCV阳性率1.13%(2/177)。本研究成功建立了一种用于快速检测CanineCV的EvaGreen qPCR方法，该方法安全且具有较好的特异性、敏感性和重复性，可作为Canine...     

时间分辨荧光法对泰州地区宠物弓形虫感染情况分析

弓形虫病是一种人畜共患病,应引起宠物饲养者的重视。本试验采用时间分辨荧光抗体检测法对泰州地区采集的不同来源犬、猫血清样本进行弓形虫抗体检测。结果表明,该地区宠物血清样本总阳性率为12.06%,其中犬血清阳性率为8.31%,猫血清阳性率为18.87%;并且农村散养与流浪的犬、猫弓形虫抗体阳性率最高。     

犬类螨虫病的鉴别与诊治

对几种常见的犬类螨虫病的鉴别及诊断方法进行介绍。并提出了采用1%伊维菌素、癣螨净886、宠物香波治疗疥螨病、耳痒螨病以及蠕形螨病等传染性皮肤病的方法,以期为临床有效治疗犬类螨虫病提供参考。     

基于Nc-5基因的新孢子虫病PCR诊断方法的建立

根据GenBank上登录的犬新孢子虫Nc-5基因序列(AF061249),利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,以牛源犬新孢子虫吉林株DNA为模板建立了PCR诊断方法。结果显示:建立的PCR方法扩增片段大小为608 bp,克隆基因测得序列与美国株(AF061249)同源性为99%;该方法扩增不出弓形虫、牛瑟氏泰勒虫等基因片段;扩增样本DNA含量为26.5 fg,具有较好的特异性和敏感性;应用建立的PCR方法与环介导等温扩增(LAMP)进行比较,其阳性符合率达100%。说明建立的PCR诊断方法具有特异、敏感、快速等优点,完全适用于新孢子虫病的诊断。     

犬、猫钩端螺旋体病的流行病学调查

为了解钩端螺旋体病在犬、猫体内的感染情况,2011年,在北京地区建立了20个宠物疫病监测点,随机收集了犬、猫血清及尿液样本396份,进行犬、猫钩端螺旋体病的流行病学调查。调查结果为显微镜凝集试验检测犬、猫血清共计200份,抗体阳性的样品共有106份,阳性率为53%,其中猫血清为阳性的样品有20份,阳性率为27.8%;犬血清为阳性的样品有86份,阳性率为67.2%。RT-PCR检测犬、猫尿液共计196份,阳性的样品共有54份,阳性率为27.6%,其中猫尿样21份,阳性样品4份,阳性率为19%;犬尿样175份,阳性样品50份,阳性率为28.6%。     

多拉菌素浇泼剂对犬螨病的疗效观察

犬螨病主要包括蠕形螨、疥螨、耳痒螨。蠕形螨病又名毛囊虫病或脂螨病,是由犬蠕形螨寄生于皮脂腺或毛囊而引起的一种常见而又顽固的皮肤病。犬疥螨病又称疥癣,俗称癞皮狗病,是由犬疥螨或耳痒螨寄生所致,以接触感染、患畜奇痒和皮肤炎症为特征。这些寄生虫侵染后会造成犬猫贫血、消     

检测犬细小病毒和犬瘟热病毒联合PCR/RT-PCR方法的建立及初步应用

为了建立一种能同时检测犬细小病毒(CPV)和犬瘟热病毒(CDV)的快速鉴别PCR方法,试验根据GenBank中登录的CPV NS1基因和CDV F基因序列设计2对特异性引物,通过综合CPV单项PCR方法与CDV单项RT-PCR方法的扩增程序,最后确定出联合PCR/RT-PCR方法的最佳退火温度、延伸时间和循环次数等反应程序,并对扩增产物进行克隆鉴定,同时进行特异性试验、敏感性试验和临床病料的检测。结果表明:建立的联合PCR/RT-PCR方法可以在一个扩增体系内同时检测两种病毒,其最佳联合PCR/RT-PCR扩增退火温度为50.8℃;经特异性分析,联合PCR/RT-PCR方法对犬副流感病毒(CPIV)、狂犬病毒(RV)、犬腺病毒(CAV)的检测为阴性;经敏感性分析,联合PCR/RT-PCR方法在模板浓度稀释到1×10~0 TCID_(50)时仍能见到较清晰的特异性条带;应用联合PCR/RT-PCR方法对延吉市36份犬病料样本进行检测,CPV阳性率为25.00%,CDV阳性率为33.33%,CPV和CDV混合感染阳性率为8.33%。说明试验建立的CPV和CDV联合PCR/RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高,可用于犬细小病毒病和犬瘟热病毒病的临床诊断。     

金毛犬耳痒螨病引发耳血肿的诊断和治疗

犬耳痒螨病是由犬耳痒螨（Otodecees cymotis）寄生于耳道内引起的皮肤寄生虫病。犬耳血肿是在外力作用下致使犬耳部血管破裂、出血,血液集聚在耳软骨与耳廓内侧皮肤之间形成的肿胀。耳痒螨病是引发耳血肿的重要病因,一旦发病需要及时治疗,严重者采用手术疗法。对一例犬耳痒螨病引发耳血肿进行了诊治,特将诊治过程和相关分析做具体介绍,以供临床参考。     

犬耳痒螨病防治措施

犬耳痒螨病是由耳痒螨属的犬耳痒螨所引起的皮肤病。犬耳痒螨的雄虫体长0.45mm,宽0.35mm,其第3对足的端部有两根细长的毛；雌虫体长是0．55ram，宽0．37mm，第4对足不发达，不能伸出体边缘，比第3对足短3倍。螨寄生于犬的外耳道内，     

广东省部分城市犬和猫狂犬病病毒血清中和抗体的调查分析

通过对广东省部分城市宠物犬和猫狂犬病病毒中和抗体效价现状进行调查分析，探讨其风险点及改善点，为狂犬病的防控及公共卫生安全提供参考。调查于2020-2021年期间在广东省佛山市、深圳市、东莞市、云浮市、江门市等地城区采集宠物犬、猫血清735份，并对相关个体信息进行收集，采用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对所有血清样本进行了狂犬病中和抗体效价的测定和分析。结果显示，所有样本狂犬病抗体保护水平阳性率为46.9%,低于世界卫生组织推荐的70%保护水平阳性率；深圳市血清样本抗体保护水平阳性率为55.4%,为采样城市中保护水平阳性率最高；家养猫的保护水平阳性率比家养犬的阳性率低15.5%;犬养殖场样本阳性率比家庭饲养犬样本阳性率低20.8%;流浪动物的保护水平阳性率仅有8.1%。说明广东省部分城市犬、猫狂犬病免疫阳性率偏低，尚无法形成抵御狂犬病侵袭的有效屏障，需在流浪动物管理、猫饲养管理、犬猫饲养场管理等几个方面加强狂犬病的预防管制措施，加强政策引导工作，以提升狂犬病的综合防控能力。     

肉兔耳痒螨病的诊治

耳痒螨病是由耳痒螨属(Otodectes)的螨引起的,螨虫多寄生于兔、犬或猫的耳内.肉兔耳痒螨病是由寄生于肉兔体表的兔痒螨(P.communis cunicoli)引起的一种外寄生虫病,以剧痒及各种类型的皮肤炎症,形成糠麸样痂皮、蜕皮和消瘦为特征.其传染性很强,以接触感染为主.轻者使患兔消瘦、掉毛,严重时引起病兔的死亡,给养兔业造成很大危害.2004年10月,在动物生理学教学实习过程中,笔者发现购买的实验兔可能患有肉兔耳痒螨病,立即对供应实验兔的3家小型养兔场进行追踪调查,确诊为肉兔耳痒螨病.现将结果报告如下.     

犬螨病的诊治

犬螨病（犬疥癣），欲称“赖皮狗病”，是由犬疥螨或大耳痒螨寄生所致，以犬疥螨危害最大。多发于冬季，常见于皮肤卫生条件差的犬。1 诊断要点1．1 疥螨病。幼犬症状严重，先发生于鼻梁、颊部、耳根及腋间等处，后扩散至全身。起初皮肤发红，出现红色小结节，后变成水泡，水泡破溃后，流出黏稠黄色油状渗出物，渗出物干燥后形成鱼鳞状痂皮。患部剧痒，病犬常以爪抓挠患部或在地面以及各种物a体上摩擦，因而患部出现严重脱毛。 耳痒螨寄生于犬外耳部，引起大量的耳脂分泌和淋巴液外溢，且往往继发化脓。有痒感，病犬不停地摇头、抓耳、鸣叫…