金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究

为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率大于50%的抗菌药有6种,敏感率小于10%的有5种。31株金黄色葡萄球菌毒素基因携带率为93.5%,同时携带2种及以上毒素的菌株占67.7%,有SEA基因的占38.7%,含其他传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占40.4%,携带新发现的毒素基因SEG、SHE、SEI和SEJ的菌株占67.7%。说明本次试验中的31株金黄色葡萄球菌对6类13种抗菌药都有不同程度的耐药性,且多重耐药现象比较严重。生鲜乳中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,且携带新发现的肠毒素基因较多。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐氟喹诺酮类基因的检测

为了解宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌携带氟喹诺酮类药物的耐药基因的情况,采用PCR对临床分离鉴定的220株金黄色葡萄球菌的gyrA、norA和grlA基因进行了检测,并对PCR产物进行测序和分析。结果显示,gyrA基因、grlA基因和norA基因的检出率分别为80%、78.64%和78.18%。测序结果显示,grlA、norA基因的同源性为99%,gyrA基因的同源性为100%。这表明在宁夏地区gyrA、norA和grlA基因已广泛存在。     

牛乳金黄色葡萄球菌分离株超抗原肠毒素基因分型研究

为研究牛乳金黄色葡萄球菌 SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型，设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因 SEA-SEE 及 TSST-1特异性引物，并以其固有基因 femA 和 femB 为阳性对照，以分离菌株 DNA 为模板，经 PCR 扩增菌株携带的毒素基因。结果表明，SP-3分离株和阳性对照菌株均含有femA 和 femB 基因，且牛乳分离株携带 sea、sec、sed 和 tst-14种超抗原肠毒素基因，为开展动物源超抗原毒素基因系统分型及有效防控金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎奠定基础。     

内蒙古地区乳源金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布

为了了解内蒙古地区金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况,并为评估金黄色葡萄球菌肠毒素的污染风险和研制金黄色葡萄球菌疫苗提供基础资料,试验采用PCR方法,对2015年从内蒙古地区临床型奶牛乳房炎乳样中分离的121株金黄色葡萄球菌进行16种肠毒素基因的检测。结果表明:121株金黄色葡萄球菌全部携带肠毒素基因,其中携带比例较高的是sei、selm和selj基因,分别为121株(100%)、81株(66.94%)和64株(52.89%),未检测到see、selo和selp基因。携带传统肠毒素基因(sea-see)的有59株(48.76%),携带新型肠毒素基因(seg-selq)的有121株(100%)。同时携带2种及2种以上肠毒素毒基因的有118株(97.52%),组合也很复杂。说明内蒙古地区的奶牛场存在着很大的金黄色葡萄球菌安全隐患,防治较为困难。     

生鲜牛奶中不同类型金黄色葡萄球菌污染差异性分析

[目的]了解我国部分地区生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素的污染状况,分析产不同类型肠毒素的金黄色葡萄球菌在不同地区的流行状况。[方法]采集三个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,并对分离菌肠毒素分型。[结果]从360份生鲜牛奶中共分离到102株金黄色葡萄球菌,分离率为28.33%?;92.3%的菌株产SEA—SEJ;不同地区产各种类型肠毒素的菌株存在明显差异,湖南和内蒙分离到的产各型肠毒素菌株占比例较高。     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌超抗原的检测

用PCR方法对分离到的临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌124株.隐性乳腺炎金黄色葡萄球菌213株,进行超抗原毒素sea,seb,sec,sed,see和tst基因的榆测.结果表明:奶牛临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素基因和tst基因的阳性率为27.42%,隐性乳腺炎金黄色匍萄球菌肠毒素基因的阳性率为1.41%,奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌产生毒素的类型以SEA,TSST-1和SEC为主,对于肠毒素基因和tst基因PCR阳件的金黄色葡萄球菌同时用ELISA和RPLA两种方法进行检测,3种检测方法结果基本一致.     

西宁市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其肠毒素基因型分布研究

为了掌握金黄色葡萄球菌在西宁地区食品中的分布规律,了解不同来源、不同种类食品中金黄色葡萄球菌的污染状况及其5种肠毒素基因型(A、B、C、D、E)的分布状况。在西宁市地区采集108份食品样品,按食品微生物学(GB 4789.10-2010)金黄色葡萄球菌检验方法结合Baird-Parker氏鉴别培养基筛选金黄色葡萄球菌,通过对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因的PCR扩增以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(Matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对疑似菌落进行鉴定;同时利用PCR技术对金黄色葡萄球菌的5种肠毒素基因型进行分型检测。经分离及生化鉴定,从108份样品中得到60株疑似金黄色葡萄球菌、PCR方法及MALDI-TOF MS结果,确认为金黄色葡萄球菌,检出率为55. 56%;同时60株金黄色葡萄球菌分别检出A型6株、B型34株和D型2株,共检测到42株,检出率为70%,C型和E型未被检测到。表明西宁市食品中金黄色葡萄球菌的污染处于一个相对较高水平,因食品来源与种类不同,金黄色葡萄球菌的污染情况和毒素基因的分布情况也各不相同,对西宁市食品质量安全控制具有参考意义。     

致母猪子宫内膜炎金黄色葡萄球菌鉴定及致病性与耐药性检测

为分析2018年-2020年广州地区规模化猪场致母猪子宫内膜炎金黄色葡萄球菌的致病性、血清型及耐药性情况,采集患子宫内膜炎母猪的子宫化脓性分泌物样品177份,进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定。采用人工感染动物试验、PCR和K-B药敏纸片法分别检测金黄色葡萄球菌的致病性、血清型和耐药性。结果表明,分离得到了96株金黄色葡萄球菌,其中72株能引起小鼠发病与死亡,具有致病性;分离的72株致病性金黄色葡萄球菌以荚膜5型(52.8%)为主要流行血清型,对阿莫西林、氨苄西林、青霉素等9种药物的耐药率在58.3%～95.8%之间;对头孢噻肟、头孢噻呋、恩诺沙星等5种药物耐药率在11.1%～29.3%之间。说明从该地区分离的72株致母猪子宫内膜炎金黄色葡萄球菌以荚膜5型为主要流行血清型,耐药性严重。     

猪粪便中致病性病原菌检测与耐药性分析

为了检测猪粪便中的致病微生物并分析其耐药性,试验采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR检测与测序、致病性试验等方法对从镇江地区不同养猪场采集的100份粪便样品进行病原菌鉴定,采用K-B药敏纸片法测定致病性病原菌的耐药性。结果表明:从100份粪便样品中分离得到大肠杆菌25株、沙门氏菌17株、金黄色葡萄球菌15株,其中致病性大肠杆菌20株,致病性沙门氏菌15株,致病性金黄色葡萄球菌10株;分离菌16S rRNA PCR扩增得到大小约为1 492 bp的目的条带;57株分离株的PCR产物测序结果与GenBank中参考株基因序列的同源性高于97.0%;致病性大肠杆菌对阿莫西林、环丙沙星、磺胺间甲氧嘧啶等12种药物的耐药率在65.0%～95.0%之间,致病性沙门氏菌对阿莫西林、氟苯尼考、庆大霉素等12种药物的耐药率在46.7%～100%之间,致病性金黄色葡萄球菌对阿莫西林、庆大霉素、氟苯尼考等9种药物的耐药率在50.0%～100%之间,且存在多重耐药性。     

内蒙古地区致奶牛子宫内膜炎葡萄球菌超抗原基因分布及耐药性研究

为了解内蒙古地区致奶牛子宫内膜炎葡萄球菌超抗原基因分布及其耐药情况,采用PCR对分离到的葡萄球菌进行鉴定并检测超抗原基因在分离菌中的分布,应用微量肉汤稀释法开展分离菌的药敏试验和PCR检测β-内酰胺类耐药基因BlaZ和mecA的流行情况.结果表明,共分离到金黄色葡萄球菌28株(52.8％),凝固酶阴性葡萄球菌(CNS) 25株(47.2％);超抗原基因SEJ在分离菌中的携带率最高(70.0％),超抗原基因SEA、SEB及SEE携带率最低(1.9％),其他超抗原基因携带率在9.4％～43.4％之间;分离到的葡萄球菌对青霉素耐药率最高(96.2％),对万古霉素最敏感,有多重耐药菌株检出;分离菌中BlaZ携带率达98％,金黄色葡萄球菌中未检出mecA,但CNS中mecA携带率为24.5％.内蒙古地区奶牛子宫内膜炎致病葡萄球菌有12种肠毒素及eta、etb、TSST-1检出,其中SEJ基因的携带率最高;葡萄球菌对β-内酰胺类耐药率较高,并且发现了多重耐药菌株的流行.     

牛奶中金黄色葡萄球菌的耐药性及其肠毒素分型研究

为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据.采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型.结果从338份生鲜牛奶中共分离鉴定金黄色葡萄球菌共39株,分离率为11.54％;所有分离菌株都有不同程度的耐药,尤其对磺胺类药物和青霉素类的耐药性非常严重；92.3％的菌株含SEA SAJ基因肠毒素.     

乳源金黄色葡萄球菌耐药性分析与分型

为研究内蒙古及上海部分地区金黄色葡萄球菌流行病学特征,对两个地区的分离株进行生化鉴定、16S r RNA鉴定,并对鉴定为金黄色葡萄球菌等分离株进行药敏试验及RAPD随机扩增多态性分型。结果表明:内蒙古及上海部分地区的分离菌中有91株被鉴定为金黄色葡萄球菌;药敏试验结果显示两个地区分离的金黄色葡萄球菌均有较严重的多重耐药现象,且上海地区分离菌的耐药情况比内蒙古地区严重,但两个地区的分离菌均对喹诺酮类抗生素高度敏感;RAPD结果显示菌株共分为12个基因型,其中1型5株(5.5%),2型6株(6.6%),3型15株(16.5%),4型10株(11.0%),5型13株(14.3%),6型、9型和12型各2株(2.2%),7型8株(8.8%),8型24株(26.4%),10型3株(3.3%),11型仅1株(1.1%),8型菌株占总菌株数的26.4%,为主要流行的优势菌群。地域环境可能是影响病原菌耐药及基因型分布差异的重要原因。     

湖南部分地区乳源金黄色葡萄球菌耐药性及溶血性分析

为调查湖南省部分地区奶牛场生鲜乳源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的检出情况，同时调查金黄色葡萄球菌溶血素基因型与溶血表型的分布情况及二者的关系。采用肉汤稀释法对分离自湖南省部分地区奶牛场生鲜乳的54株金黄色葡萄球菌进行18种常见抗菌药物耐药性检测，采用绵羊血琼脂平板检测细菌溶血性，并采用PCR方法扩增分离菌株mecA基因及5个溶血素基因。结果显示，54株金黄色葡萄球菌均表现不同程度的耐药，耐药谱型达21种；21株金黄色葡萄球菌表现为多重耐药，最高耐药重数为9重；对青霉素耐药最严重，耐药率达85.19%,对头孢西丁、苯唑西林、克林霉素、庆大霉素及大环内酯类药物(红霉素、替米考星)耐药率在20%～30%之间，对多西环素与万古霉素敏感；从24株分离菌中检出mecA基因，鉴定为MRSA。54株分离株在羊血琼脂平板上主要以β和γ溶血为主，α、β及γ溶血率分别为12.9%、44.4%和42.6%;各溶血素基因检出率分别为98.1%(hla)、94.4%(hlb)、96.3%(hld...     

仔猪源肠毒素性大肠杆菌毒力因子的分布研究

为了解河北省腹泻仔猪源产毒素性大肠杆菌肠毒素的流行分布情况,试验采用PCR方法以质粒DNA为模板对40株大肠杆菌进行肠毒素基因Sta和Stb的检测,并通过对其序列比对分析菌株之间的同源性。结果表明:在40株大肠杆菌中成功扩增出Sta基因36株,Stb基因23株,其中有19株同时携带2种肠毒素,占全部菌株的47.5%(19/40);单独携带肠毒素Sta基因的有17株,占肠毒素阳性菌株的42.5%(17/40)。Sta和Stb基因序列同源性分析显示,已测序的试验菌株之间的同源性在99.6%~100%之间。说明河北省致仔猪腹泻大肠杆菌流行株所携带的肠毒素主要是Sta+Stb及Sta,各地区流行菌株所携带的ST基因具有高度的同源性,具有相近的亲缘关系。     

北京地区奶牛隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

为了解北京地区奶牛隐性乳房炎中金黄色葡萄球菌的感染情况及对常用药物的敏感性,用科玛嘉显色培养基和16SrRNA PCR检测方法对5个奶牛场的100份隐性乳房炎奶样进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,采用K-B纸片扩增法进行药敏试验。结果表明,显色培养基分离到24株疑似金黄色葡萄球菌,经16SrRNA PCR鉴定,15株为金黄色葡萄球菌;药敏试验结果显示,15株金黄色葡萄球菌均对β-内酰胺类中的氨苄西林产生普遍耐药性,对克林霉素和环丙沙星的耐药率较高,分别为53.33%和40%;对氧氟沙星、庆大霉素、头孢噻肟和头孢曲松的耐药性较低,耐药率为6.67%。说明15株金黄色葡萄球菌分离株对7类9种抗菌药物都有不同程度的耐药性。     

新疆维吾尔自治区阿拉尔市某规模化养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其毒力、耐药性分析

[目的]分离鉴定新疆维吾尔自治区阿拉尔市猪乳源金黄色葡萄球菌,了解其致病性和耐药性。[方法]从阿拉尔市某规模化养殖场收集6份新鲜猪乳样本,采用甘露醇高盐琼脂（MSA）培养基分离乳样中的金黄色葡萄球菌,利用表型鉴定方法及细菌16S rDNA序列分析法对分离到的菌株进行鉴定,检测分离菌株的生物被膜形成能力,利用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验,利用PCR法检测毒力基因和耐药基因。[结果]经分离培养及分子生物学鉴定,从6份乳样中获得2株金黄色葡萄球菌,分离率为33.33%(2/6);2株金黄色葡萄球菌均具有强生物被膜形成能力（+++）;2株金黄色葡萄球菌均对利福平敏感,均对青霉素、头孢西丁、四环素、红霉素、替米考星、克林霉素和磺胺甲噁唑耐药;在检测的5种耐药基因中,2株金黄色葡萄球菌均携带ant(4)基因和mecA基因;在检测的20种毒力基因中,共检测到6种毒力基因,其中,2株金黄色葡萄球菌均携带seg、sei、hlb、fnbA、clfA基因,有1株携带hla基因。[结论]该养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力强,携带多种毒力基因和耐药基因,表现为多重耐药性。     

贵州地区牛源金黄色葡萄球菌分离株16S rRNA分子鉴定及RAPD分型研究

利用16S rRNA保守序列对引起贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,建立随机多态性扩增体系对金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,69份奶样中共分离出金黄色葡萄球菌37株,DNA随机多态性扩增（random amplified polymorphic DNA,RAPD）结果显示这37株金黄色葡萄球菌扩增产物在1～7条带之间,产物大小为400～4500 bp。菌株可分为7个基因型,其中Ⅰ型7株（18.9%）、Ⅱ型2株（5.4%）、Ⅲ型2株（5.4%）、Ⅳ型1株（2.7%）、Ⅴ型19株（51.4%）、Ⅵ型1株（2.7%）、Ⅶ型5株（13.5%）,Ⅴ型为该地区的流行优势菌群。地理和气候环境对病原菌流行传播的影响是病原菌基因型分布差异的重要原因。     

内蒙古地区奶牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性研究

为了确定内蒙古地区奶牛中乳源金黄色葡萄球菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,采用生化鉴定法结合PCR方法对奶牛乳源金黄色葡萄球菌进行了分离、鉴定。采用微量稀释法测定了15种临床常用抗菌药物对21株金黄色葡萄球菌的最小抑制菌浓度(MICs)。结果显示,分离菌株对青霉素和氨苄西林的耐药率较高,分别为81%和75.5%;对头孢菌素类药物的耐药率也较高,均在60%~70%之间;对大环内酯类和四环素类抗生素的耐药率均在40%~50%之间。乳源金黄色葡萄球菌对3种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率较低,均小于30%;对庆大霉素也比较敏感,耐药率13.2%。以上分离菌株对万古霉素全部敏感。联合用药的药敏试验结果显示,菌株对阿莫西林-克拉维酸高度敏感,耐药率仅9.5%。多重耐药表型结果显示,75.5%的菌株耐2~7种药,24.5%的菌株耐8~13种药。通过PCR方法对奶牛乳源金黄色葡萄球菌所携带的耐药表型及基因进行检测,结果表明,分离菌株中有3种四环素耐药基因组合在流行。分别是tet M+tet L1株(4.76%)和18株分离菌携带bla Z耐药基因,检出率为85.7%。由此可见,内蒙古地区奶牛乳源性金黄色葡萄球菌对15种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且多重耐药情况较为严重;分离菌株中有tet M、tet K、tet L和bla Z耐药基因在流行,分别编码了对四环素类和β-内酰类抗生素的耐药性。     

奶牛源表皮葡萄球菌的分离鉴定

为了探讨生牛乳中表皮葡萄球菌的分离鉴定方法,对某奶牛场的生鲜乳进行细菌分离培养和生化试验鉴定。结果显示：使用氯化钠肉汤（氯化钠质量分数为7.5%）增菌,使用Baird-Parker琼脂培养基选择培养,使用营养琼脂培养基纯化培养,可获得表皮葡萄球菌分离株;使用vitek2compact全自动微生物分析系统鉴定表皮葡萄球菌分离株,可信水平为良好;本实验获得的表皮葡萄球菌分离株与经典表皮葡萄球菌模式菌株符合率为93%。     

金黄色葡萄球菌聚集因子A(Clfa A)功能区基因的克隆及真核表达质粒构建

粘附素蛋白是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子,研究根据金黄色葡萄球菌聚集因子A(clfa A)基因, 设计合成特异性引物,以国内奶牛乳腺炎临床分离株金黄色葡萄球菌基因组为PCR模板,进行clfa A基因的克隆,并连接入pMD18-T载体进行测序和序列分析,然后经BamHⅠ和XbaⅠ双酶切后构建真核表达载体并进行鉴定.结果表明,以金黄色葡萄球菌标准株为对照,国内分离株多数在990 bp处扩增到特异性条带,经测序鉴定,与Genebank发表的金黄色葡萄球菌clfa A序列同源性为99%;构建的真核表达质粒通过PCR和双酶切鉴定证明构建成功,为研究核酸疫苗奠定基础.