银杏叶提取物对体外培养心肌膜微血管内皮细胞分泌NO和ET-1的影响

研究银杏叶提取物(EGb761)对微血管内皮细胞分泌NO和ET-1的影响。采用体外培养大鼠心肌膜微血管内皮细胞(RMMMVECs)模型,测定其一氧化氮(硝酸还原酶法)和内皮素-1(ELISA法)分泌量的变化。EGb761能显著性提高RMMMVECsNO和ET-1的分泌量,且NO/ET-1值没有显著性变化。     

口蹄疫A型病毒AF/72株标准细胞毒株的研制

用口蹄疫A型病毒AF/72株的第3代乳鼠组织毒,通过乳鼠继续适应3代后,转适BHK-21细胞,获得该毒株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为10-8.0/mL;经RT-PCR获得其VPI基因序列,并与GenBank中的其他6株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ng/mL,远大于22 ng/mL的国际标准.综合纯净性检验结果、特异性检验结果和146S含量,确定AF/72/MF6/BF12为口蹄疫A型病毒株AF/72的标准细胞毒.     

内毒素对肠黏膜微血管内皮细胞内分泌一氧化氮和内皮素的影响

目的是研究内毒素（lipopolysaccharide; LPS）导致肠黏膜微血管内皮细胞损伤的作用机制。将所培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为空白对照组和LPS组，每组按时间分为4个亚组：3h、6h、9h、12h。空白对照组加维持培养液，LPS组加1μg/ml LPS培养液，在CO2培养箱内静置培养。结果表明，一氧化氮（NO）分泌明显升高，3h后达到高峰，随后逐渐降低，而内皮素（endothelin; ET）分泌急剧升高，9h后达到高峰，随后又开始逐渐降低，但一直保持在较高的水平。所以引起了NO和ET的升高可能是LPS导致肠黏膜微血管内皮细胞的损伤机制。     

口蹄疫病毒AF72株 3D聚合酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用RT—PCR方法扩增口蹄疫病毒（FMDV）AF72株的3D聚合酶基因,并将其克隆至pGEM—Teasy载体,测序分析结果表明,AF72 3D聚合酶基因与GenBank中公布的其他4个参考序列均具有较高的同源性。将目的基因插入原核表达载体pET-30a（＋）中,构建了重组表达质粒pET-3D,鉴定后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导,3D聚合酶基因在大肠杆菌中获得了正确表达,目的蛋白的分子量为46ku。Western blot检测结果显示,表达产物可以与抗A型FMDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。     

大鼠GTH细胞内PKC的改变对LH表达的影响

目的是分析大鼠分泌LH的GnRH受体后信号转导机制。将GTH细胞内PKC兴奋或抑制后,用高频GnRH脉冲刺激,再用ELISA法检测其LH分泌量,并与空白组比较。结果表明,细胞PKC活性显著影响LH的分泌。得出结论,PKC-Ca2+是GnRH脉冲刺激引起的LH分泌的GnRH受体后信号转导途径之一。     

中西药结合治疗奶牛乳房炎效果好

乳房炎是影响奶牛生产的一种常见病，是由于环境卫生不良，乳房不清洁，附着在乳头上的病原菌经乳汁进入乳房引起感染造成的。另外，挤奶技术不熟练或挤奶方法不当，分娩后挤奶不充分、奶汁积存过多，乳房外伤或冷、热、化学刺激等，感染一些疾病（如口蹄疫、感冒、子宫炎）均可引发乳房炎。     

山楂提取物牡荆素鼠李糖苷对力竭训练大鼠心肌损伤的保护作用

山楂(Crataegus pinnatifida Bunge)提取物牡荆素鼠李糖苷(vitexin-2"-O-rhamnoside, VOR)是一种黄酮苷类化合物,具有心脏保护作用。本实验旨在考察牡荆素鼠李糖苷对力竭训练大鼠心肌损伤的保护作用。本实验通过力竭游泳建立了力竭训练大鼠模型,训练当天对大鼠分别灌胃3个剂量(20, 40和80 mg/kg)的牡荆素鼠李糖苷,共给药4周。然后检测了大鼠的力竭时间、心肌损伤指标(LDH, CK和cTnI)、心肌形态、心肌氧化应激(SOD, CAT和MDA)和炎症(IL-1β, IL-6和TNF-α)指标。通过Western blot检测心肌组织中Nrf2、Keap1、HO-1、NQO-1、p38 MAPK、p-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白的表达水平。结果表明,3种剂量的牡荆素鼠李糖苷均提高了大鼠的力竭时间,降低了血清LDH、CK和cTnI水平,升高了心肌组织SOD和CAT水平,降低了MDA水平,降低了心肌组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平,升高了心肌组织细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量,降...     

丹皮酚对LLO诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1的影响

为了研究李斯特菌溶血素(LLO)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)分泌一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）的影响,阐释作为治疗李斯特菌病方剂中单味中药丹皮的有效成分丹皮酚(Pae)调节LLO诱导细胞分泌紊乱的作用机理,试验将培养的RIMVECs分为LLO+Pae组、LLO组、Pae组、空白组,通过MTT比色法测定细胞生长情况;硝酸还原酶法测定细胞上清液细胞因子NO浓度以及酶联免疫法检测ET-1浓度;并用原位杂交方法对结果进行验证;结果显示LLO组与其他各组相比：细胞增殖显著性下降;12小时内,NO、ET-1分泌量高于正常水平,并导致NO／ET-1比值失衡（下降）;而LLO+Pae组NO/ET-1的比值显著上调;由此可见,Pae可以通过改善LLO引起细胞因子NO、ET-1失衡,有效调节细胞微环境,部分解释了中药丹皮治疗李斯特菌病的作用机理。     

兴奋或抑制GTH细胞内PKC对FSH分泌的影响

为了分析大鼠FSH分泌受体后信号转导机制。将GTH细胞用PMA或H7处理后,用GnRH脉冲刺激,再用ELISA法检测其FSH分泌量,并与空白对照组比较。结果表明,PMA能显著提高GTH细胞中PKC活性,H7能显著降低GTH细胞中PKC活性,PMA或H7都不会影响GTH细胞的cAMP含量,GTH细胞PKC活性显著影响FSH的分泌,FSH随着PKC活性的升高而升高,随着cAMP的降低而降低。得出PKC-Ca2+是GnRH脉冲刺激所引起的FSH分泌的受体后的信号转导途径。     

脂多糖对肠黏膜微血管内皮细胞表达TLR2和TLR4的影响

为研究TLR2、TLR4在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致肠黏膜微血管内皮细胞(RIMECs)损伤中的作用,以体外培养的肠黏膜微血管内皮细胞为模型,用浓度为1、5、10μg/mL的LPS刺激RIMECs3、6、9、12、24h后,采用半定量RT-PCR法检测细胞表面TLR2和TLR4的表达情况;再以浓度为1、5、10μg/mL的LPS刺激RIMECs9h后,半定量RT-PCR法检测细胞TLR2和TLR4的表达情况。结果发现：与对照组比较,不同浓度LPS刺激均能引起RIMECs表面TLR2和TLR4mRNA表达增加。不同浓度LPS刺激不同时间后,RIMECs表面TLR2和TLR4mRNA表达基本均在9h达到峰值,且无时间依赖性。用LPS刺激RIMECs9h,5μg/mL的LPS对细胞表达TLR2mRNA作用最强且无剂量依赖性,10μg/mLLPS对细胞表达TLR4mRNA作用最强且呈剂量依赖性。TLR2和TLR4在LPS损伤RIMECs的过程中起到重要作用。     

口蹄疫病毒5’端非翻译区致病机理的分子基础

本文阐述了口蹄疫病毒5’端非翻译区的结构和功能,综述了近年来口蹄疫病毒5’端非翻译区与宿主细胞间关系及其致病机制方面的研究进展,分析了口蹄疫病毒5’端非翻译区致病机理的分子基础,认为其5’端非翻译区的基因组结构对口蹄疫病毒的复制和扩增是必不可少的, 为进一步研究口蹄疫病毒的复制机理、毒力及其决定因素、致弱机理、致病机理及宿主嗜性提供理论参考。     

O型口蹄疫病毒蛋白酶3C基因在哺乳细胞中的表达

为构建O型口蹄疫病毒(FMDV)蛋白酶3C基因的真核表达质粒,并在BHK-21细胞中进行表达,以RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒蛋白酶3C基因,利用XhoⅠ和HindⅢ限制性内切酶将3C基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),通过脂质体法转染重组质粒pcDNA3.1(-)-3C。PCR,双酶切鉴定及测序结果表明：重组质粒pcDNA3.1(-)-3C构建成功;Western-blot分析结果表明：重组质粒pcDNA3.1(-)-3C在BHK-21细胞中能够表达O型FMDV蛋白酶3C基因。该真核表达质粒的构建,为进一步研究O型口蹄疫空衣壳的体外组装以及O型口蹄疫空衣壳疫苗的开发建立了实验基础。     

C型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1基因的原核表达及其生物活性的初步分析

将口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pET-28α(+)中,获得融合表达质粒pET-P1,转化E.coli.BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,pET-P1获得融合表达, Western Blot 检测证实表达的融合蛋白具有免疫活性,表达产物主要以包涵体的形式存在,进一步采用纯化试剂盒纯化P1蛋白做为诊断抗原.     

共表达O型口蹄疫病毒P12A+3C基因的重组杆状病毒的构建

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其插入到杆状病毒转移载体pFastDual-3C的PH启动子之下,构建重组杆状病毒转移载体pD-P12A3C。通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒B-P12A3C,转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒。重组杆状病毒经增殖并感染Sf9细胞后,通过双抗体夹心ELISA方法及间接免疫荧光来检测目的蛋白的表达。结果表明,表达产物能被O型FMDV阳性血清识别,具有一定的反应原性,表明重组杆状病毒构建成功,该研究为O型FMDV空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究提供了前期材料。     

连翘酯苷对内毒素作用下RAW264.7细胞功能的影响

为探讨连翘酯苷(FS)对内毒素(LPS)作用下RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α、吞噬功能的影响。收集处于对数生长期细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养细胞,在培养液中分别加入脂多糖(LPS)以及不同浓度40、80、160 μg/mL的FS共培养。采用MTT法检测细胞增殖,Griess和ELISA法分别检测RAW 264.7细胞分泌NO和TNF-α量,染色法检测细胞吞噬能力。结果表明：低、中剂量FS可显著促进细胞增殖,而中和高剂量FS可缓解LPS对细胞的刺激作用;与LPS组比较,FS对LPS刺激的RAW 264.7细胞分泌NO影响不明显,但中、高剂量FS明显促进RAW 264.7细胞分泌;LPS与FS均能提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力。FS对RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α以及吞噬功能都有影响,结果提示这可能是连翘酯苷调节细胞免疫功能的机制之一。     

口蹄疫病毒蛋白与细胞凋亡

口蹄疫病毒在感染细胞的过程中能够根据自己的需要诱导或者阻碍宿主细胞的凋亡,为自己创造最佳的生存环境并在一定程度上逃避宿主细胞的攻击,获得最大的生存能力。本文总结了近年来对FMDV各蛋白与细胞凋亡间的研究,分析其各蛋白在调节细胞凋亡过程中发挥的作用,并对FMDV的持续性感染机制的形成进行初步探讨。     

家兔子宫内膜细胞炎症模型的建立

摘要：胶原酶消化法分离和培养家兔子宫内膜细胞,大肠杆菌细菌脂多糖（LPS）诱导子宫内膜细胞炎症,以培养细胞的形态学和传统炎症指标作为炎症发生和发展的判断标准。以不同浓度的LPS作用于细胞,收集不同时段培养上清液,ELISA法测定TNF-α、IL-1β的含量。结果表明,100ng/mL LPS是体外培养的子宫内膜细胞诱导炎症的最适浓度。炎症模型组培养上清液中TNF-α、IL-1β的含量比同期空白组高（P＜0.01）,表明炎症模型建立成功。     

Effects of Medicated Serum of HERBA POLYGONI PERFOLIATI on HBsAg and HBeAg Secretion in 2215 Cells

[Objective] To research the effects of medicated serum of HERBA POLYGONI PERFOLIATI on HBsAg and HBeAg secretion in2215 cells. [Methods]Destruction rate of medicated serum of HERBA POLYGONI PERFOLIATI to 2215 cells and HL-7702 were detected by MTT method; HBsAg and HBeAg secretion in cell supernatant was detected by ELISA method when four different concentrations of medicated serums were applied in 2215 cells for 72 h. [Results]20% and 40% medicated serums showed inhibitory effects on HBsAg and HBeAg secretion,showing certain dose-effect relationship. At the same time,medicated serum of HERBA POLYGONI PERFOLIATI had less significant inhibitory effects on HL-7702 than that on 2215 cells. [Conclusions] Medicated serum of HERBA POLYGONI PERFOLIATI had certain toxic and anti-HBV effects in vitro.