英国培育无种子苹果

英国国际园艺研究所正在培育无子苹果．第一批无子苹果树可望2006年开花结果，研究者在自然界发现了两种无子苹果．虽然这两种苹果又硬又酸．无法入口．但这两种野生苹果的无子基因对于培育酸甜可口的苹果非常有用．他们用优良的普通苹果的花粉与无子野生苹果授粉．经两代杂交．培育出口感较好的无子苹果。     

酿酒酵母与酒类酒球菌融合子特性及分子生物学研究

对酿酒酵母(S accharomy ces cerev isiae)与酒类酒球菌(O enos.oen i)的跨界融合子F-20-7进行抗生素筛选、降酸试验、生长试验等生产性能测试及相关基因鉴定研究。结果表明,氨苄青霉素对融合子的影响较小,融合子对L-苹果酸的降解率在54.06%~78.81%,在挑选出的融合子中仅有4株能够在YNB、模拟葡萄汁及天然葡萄汁中生长,其生长力较葡萄酒酵母差。PCR扩增结果显示,融合子质粒DNA中存在苹果酸-乳酸发酵的两个关键酶基因,即苹果酸-乳酸酶基因M leA和苹果酸-乳酸通透酶基因M leP,测序结果表明M leP基因与G enB ank中M leP基因序列的同源性高达97%,较好的解释了融合子的降酸行为。     

Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae

苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶。笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建。利用来自重组质粒pLmleA的，mleA基因，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件。以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒pYELmleA，并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。SDS—PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中。获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d；取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量，采用t检验进行差异显著性分析，结果表明mleA基因进行了功能性的表达，将L-苹果酸转化成L-乳酸，L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著，L-乳酸的生成量为1002—1106mg／L。苹果酸的相对降低率为19．16—22．34％。     

英国培育无种子苹果

英国国际园艺研究所正在培育无籽苹果,第一批无籽苹果树有望今年开花结果。研究者在自然界发现了两种无籽苹果,虽然这两种苹果又硬又酸,无法入口,但这两种野生苹果的无籽基因对于培育酸甜可口的苹果非常有用。他们用优良的普通苹果的花粉与无籽野生苹果授粉,经两代杂交,培育出口感较好的无籽苹果。每培育一代苹果树约需要5年时间,每培育出一代无籽杂交苹果则大约需要10年时间。英国国际园艺研究所正在培育无籽苹果,第一批无因对于培育酸甜可口的苹果非常有用。他们用优良的普籽苹果树有望今年开花结果。通苹果的花粉与无籽野生苹果授粉,经两…     

马铃薯蛋白酶抑制子StPI基因的克隆及表达分析

 【目的】克隆马铃薯蛋白酶抑制子基因StPI的全长cDNA。【方法】以马铃薯高抗青枯病二倍体基因型ED13为材料，采用RACE方法进行StPI基因全长cDNA的克隆，利用半定量RT-PCR方法进行该基因的诱导表达分析。【结果】获得了StPI基因的全长cDNA，序列分析表明：该基因具有完整的开放阅读框架，编码116个氨基酸，与马铃薯蛋白酶抑制子 I 前体具有较高的同源性（核苷酸和氨基酸序列同源性分别为89%和74%）。该基因同时受青枯病菌的诱导和茉莉酸的调节，在6～12 h内即达到最高表达水平，但二者又有明显不同。相对而言，StPI基因受青枯病菌的诱导较弱，而受茉莉酸（JA）的诱导较为强烈，在JA处理3 h表达量即明显升高，6～12 h迅速升至最高。【结论】本研究从马铃薯抗青枯病基因型ED13中获得了StPI基因的全长cDNA。该基因可能参与了马铃薯的抗青枯病反应，且病菌处理对该基因的诱导可能与JA刺激具有相似或相同的信号途径。     

链格孢菌苹果致病型的ATMT转化体系的建立

【目的】链格孢菌（Alternaria alternate）苹果致病型是苹果上的重要致病菌,可以侵染苹果叶片和果实。论文旨在建立农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型高效稳定的分子转化体系,为在分子水平上研究链格孢苹果致病型病菌的致病机制提供技术支持。【方法】质粒pKO1-HPH是以pCAMBIA1300骨架为基础构建的穿梭质粒,含有潮霉素抗性基因,并在其多克隆位点上插入了绿色荧光蛋白基因,这个质粒在大肠杆菌和农杆菌细胞中都能够稳定地复制繁殖。将质粒pKO1-HPH采用冻融法转化到农杆菌菌株AGL1中,然后与链格孢苹果致病型菌株XP-1的分生孢子在诱导培养基上共培养进行基因转化,转化子在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选;在含有50 μg·mL^-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上检测转化子细胞中抗性基因在转化子中的表达情况;用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白基因在转化子细胞中的表达情况。在初步确认可以将绿色荧光蛋白和潮霉素B磷酸转移酶基因转入链格孢苹果致病型菌株中后,对菌落培养时间、转化前分生孢子的预处理方法对转化效率的影响进一步优化。转化子的稳定性采用分生孢子5次继代培养后,能否在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上稳定生长来检测;采用PCR方法检测绿色荧光蛋白外源基因和潮霉素B磷酸转移酶基因是否存在于转化子基因组中;用Southern杂交检测外源基因在转化子基因组中插入的拷贝数;在苹果果实和叶片上接种检测转化子致病性的变化。【结果】将100 μL孢子悬浮液（含10⁵孢子）涂布于马铃薯-胡萝卜-琼脂平板上菌落培养36-48 h后,链格孢苹果致病型菌株XP-1可以产生足量的孢子用于农杆菌介导的分子转化。将分生孢子用无菌水洗下,在4℃处理6 h,再与含质粒pKO1-HPH的农杆菌进行诱导共培养,转化子在含有50 μg·mL^-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选,转化效率较好,10⁷个分生孢子转化可获得约200个转化子。转化子经过5次继代培养,对潮霉素B的抗性没有改变。特异性引物PCR检测表明外源基因能够成功地整合到供试菌株的基因组中;Southern杂交表明外源基因多以单拷贝形式随机插入到链格孢苹果致病型菌株XP-1细胞的基因组中;转化子的菌丝和分生孢子在荧光显微镜下可以观察到明显的绿色荧光,说明荧光蛋白基因在菌丝及孢子中均能够成功表达。通过部分转化子的致病性试验,筛选获得数个在苹果果实和叶片上致病性都显著降低的菌株。【结论】建立了农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型稳定高效的分子转化体系,为进一步开展此病菌与其寄主的分子互作研究打下基础。     

苹果果实酸/低酸性状的SSR标记

【目的】通过表型分析筛选与苹果果实酸/低酸性状基因连锁的SSR分子标记,分析苹果果实可滴定酸的遗传规律,为苹果的早期选择和辅助育种提供依据。【方法】以"富士"×"粉红女士"杂交F1代的76株群体为试材,测定了成熟苹果果实的可滴定酸含量,采用BSA法和SSR技术筛选与酸/低酸性状基因连锁的分子标记,并在杂种后代中进行验证。【结果】76株杂交F1代群体可滴定酸含量为1.4~8.8 mg/g,从80对共显性遗传的SSR引物中筛选到与酸/低酸性状基因连锁的SSR标记Hi01e10,其遗传距离为10.014 cM,在杂交后代中的验证结果与可滴定酸含量在后代群体中的遗传规律基本吻合,进一步验证了该标记的可靠性。【结论】苹果果实酸/低酸性状是受主基因(Ma/ma)控制的,SSR标记Hi01e10可用于苹果的早期选择和辅助育种。     

一个苹果山梨醇转运子基因家族新成员的克隆及其表达分析

【目的】克隆一个苹果山梨醇转运子基因(命名为ST)的全长cDNA,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR法从苹果叶片中克隆ST基因,应用相关软件对其进行生物信息学分析;并采用实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)法,分析ST在苹果不同组织中以及在果实发育过程中的表达情况。【结果】获得了1个包含全长开放阅读框的ST基因,该基因cDNA全长1 767 bp,包含长达1 617 bp的完整开放阅读框,该基因所编码的蛋白与GenBank中已登录的其他植物山梨醇转运子的同源性均在72%以上,其中与苹果山梨醇转运子MdSOT5的同源性较高,为81%。Real-time RT-PCR结果表明,在不同组织中,ST在韧皮部的相对表达量最高,其次在衰老叶、成熟叶、叶柄中较高,在库器官花、幼叶、果实、果柄、根中表达较低;在果实不同发育时期,ST基因表达量在果实发育早期很低,花后30 d快速升高并达到峰值,在发育中期保持一个较高的表达水平,在果实发育后期相对表达量又降低,之后略呈递增趋势。【结论】从苹果叶片中克隆了ST基因,生物信息学分析可知ST具有糖转运功能;ST在韧皮部的表达量最高,说明其负责长距离运输;ST在果实发育过程中的表达量与山梨醇的含量变化相一致。     

高酸苹果山地栽培管理技术

高酸苹果是一种出汁率高、酸度高,最适合榨汁的苹果品种。种植高酸苹果技术难度低,对土壤条件要求不高,特别适宜于种植在农作物效益低的山地。高酸苹果具有鲜食、榨汁的双重价值。与普通苹果相比,高酸苹果的出汁率高达70％-75％。高酸苹果汁,不仅酸甜可口,而且含有丰富的维生素c和矿物质元素,是深受消费者欢迎的饮料之一。     

白菜型油菜种子中芥酸和甘碳烯酸含量的遗传

对白菜型油菜杂交组合（金华红子×８６０４９）正交Ｆ１，Ｆ２回交一代及相应的杂交亲本种子中Ｃ１６，Ｃ１８，Ｃ２２脂肪酸含量的气相色谱测定结果表明，种子中的芥酸和甘碳烯酸含量是由胚基因决定的，受到一个共同的单基因系统的控制，但对芥酸含量主要表现为加性效应，对甘碳烯酸则具有显性或部分显性作用，芥酸含量Ｃ１８酸，Ｃ１６酸之间呈显或极显负相关，Ｃ１６酸含量与甘碳烯酸含量呈高度负相关或负相关不明显，芥酸和     

中国节节麦在中国特有小麦系统演化中的作用

六倍体普通小麦是由具有AABB染色体的四倍体小麦与二倍体节节麦天然杂交然后通过自然加倍形成的异源多倍体。这一起源过程是自然条件下天然发生的，它的发生需要具备一个条件即四倍体小麦与节节麦获得的天然杂交种子在自然条件（没有幼胚培养等）下能够正常发芽出苗。这一条件受节节麦FHSD基因所控制。本研究发现中国节节麦没有FHSD基因，这表明中国产节节麦没有参与中国特有普通小麦的起源与演化。     

苹果山梨醇转运子cDNA的克隆及其序列分析

[目的]为进一步研究糖运输蛋白的功能、作用机理奠定基础。[方法]以嘎啦苹果叶片总RNA为模板,根据报道的山梨醇转运子的保守区设计引物,对山梨醇转运子cDNA片段的PCR扩增,PCR产物的克隆和测序和序列分析。[结果]经RT-PCR获得一条长度为581bp的片段,回收并进行测序,该片断编码181个氨基酸。应用B lastn和B lastx软件,通过与GenBank蛋白数据库比对分析发现其蛋白序列与MdSOT4、MdSOT6、MDSOT1 3种苹果(Malusx domestica)同源性分别为95%、92%、92%;酸樱桃(Prunus cerasus)78%;大豆(Glycinemax)77%;应用SMART软件分析,含有4个AgrB结构域,为一种跨膜蛋白结构。[结论]克隆得到的片段确定为苹果山梨醇转运子基因。     

沙门氏菌ERIC指纹分析

 在研究了沙门菌携带的第一类整合子的基因结构的基础上，采用ERIC-PCR方法对第一类整合子的阳性菌株进行基因指纹图谱分析。采用肠杆菌基因间重复一致序列PCR扩增的方法对两种不同血清型、整合子阴性与整合子阳性菌株研究基因指纹图谱，利用遗传距离矩阵，采用非加权配对法UPGMA法做遗传分析的树状图，进行指纹图谱分析。运用ERIC-PCR方法，可以将第一类整合子阴性、第一类整合子阳性菌株及其结构进行初步鉴定，同时对于两种不同的血清型也可以得到区分。ERIC可以作为第一类整合子阳性菌株及其相关血清型进行尝试性的鉴定方法，这对于研究整合子介导细菌耐药机制的特性具有重要意义。     

苹果果实中细胞质型苹果酸酶基因（NADP-ME）的克隆与表达分析

【研究目的】从苹果果实中克隆细胞质型NADP-苹果酸酶(NADP-ME)基因,并且从基因转录水平上研究该基因与苹果果实酸度的关系。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆NADP-ME基因,半定量RT-PCR分析该基因在高酸和低酸个体不同发育时期果实中的转录情况,并进行原核表达分析。【结果】成功克隆了细胞质型NADP-ME基因的cDNA全长序列,命名为Mal-ME(GenBank注册号:DQ280492);该基因表达一个约66kD的蛋白;半定量RT-PCR分析表明:不同发育时期的果实中Mal-ME的转录与苹果酸含量呈负相关,即随着Mal-ME转录水平的增强果实含酸量下降。【结论】成功从苹果果实中克隆了细胞质型Mal-ME基因,Mal-ME在果实发育过程中对苹果酸的积累起负调控作用。     

美首次批准防褐变转基因苹果

<正>美国农业部说,"北极"苹果并未引入外来基因,只是通过基因工程技术使自身可导致褐色形成的物质变少,因而切片或受磕碰后相对传统苹果不易变成褐色。除这一特点外,"北极"苹果与其他苹果并无任何不同。"北极"苹果包括"青北极"和"金北极"两个品种。奥卡诺根特色水果公司说,将于2016年下半年首次在市场上试卖这种苹果,考虑到苹果树的生长周期,这种苹果大规模上市可能还需多年。目前,美国市场上不存在转基因苹果。     

mleA基因在酿酒酵母中的整合型表达

 【目的】进行中国自行筛选的专利菌种酒酒球菌 SD-2a（Oenococcus oeni SD-2a）的苹果酸－乳酸酶基因在酿酒酵母中的整合型表达,使葡萄酒生产过程中的酒精发酵和苹果酸－乳酸发酵（malolactic fermentation,MLF）同时进行。【方法】克隆Oenococcus oeni SD-2a的苹果酸－乳酸酶基因mleA,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以酵母整合型质粒YIp5为载体,构建重组表达质粒pYILmleA,并转化酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）YS59,经筛选鉴定获得酵母转化子YS59/pYILmleA。进行转化子的营养缺陷型和交配型鉴定、菌落PCR鉴定、SDS-PAGE检测及斑点杂交检测,并对酵母转化子培养上清液进行L-苹果酸及L-乳酸含量的HPLC分析,检测目的基因的功能性表达。【结果】转化子的营养缺陷型和交配型鉴定、菌落PCR鉴定表明获得了阳性转化子;SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了目标蛋白,斑点杂交检测表明目的基因整合到受体菌中。模拟发酵表明mleA基因整合到受体菌中后进行了功能性表达,将培养基中的L-苹果酸转化成L-乳酸,使得培养液中的L-苹果酸含量极显著降低。转化子YS59/pYILmleA在添加5 648 mg?L-1 L-苹果酸和10%葡萄糖的SD/-Ura培养基中培养4 d,培养液上清中L-苹果酸的剩余含量与空载体转化子YS59/YIp5（对照）差异极显著,苹果酸的相对降低率为20.18%～20.85%。供试的转化子L-乳酸生成量为1 278～1 312 mg?L-1,对照未检出乳酸的生成。【结论】中国自主筛选的专利菌种O.oeni SD-2a的mleA基因的整合型表达质粒构建成功并在酿酒酵母中进行了功能性表达。     

发展高酸苹果在盐源县苹果产业中的前景

一、国内外高酸苹果研究情况 1．高酸苹果概况在国际上，通常把可滴定酸含量不低干0．6％的原料果称为高酸苹果。首先，在果实经济性状上，高酸苹果是一种原料果，主要用于加工，部分可作鲜食果；其次，在栽培上，高酸苹果不需要精心的疏花疏果，只需要生长良好，果个、果形和着色对榨汁不构成影响即可；再次，高酸苹果对日照和昼夜温差的要求远远没有鲜食苹果那么高。目前，欧美的一些果树研究机构根据加工的需要，培育出了一些对特殊气候条件有着极大耐性的加工品种，比如红科普、奥登堡，     

开花调控基因BpMADS4无抗性表达载体的构建

为了构建含有报告基因GFP基因和BpMADS4基因的无抗性双元表达载体pCAMBIA1302-GFP-Bp,参考已发表的欧洲白桦（Betula pendula）开花调控基因（BpMADS4）序列,利用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）从欧洲白桦的幼嫩花序中克隆得到促进开花的BpMADS4基因。将该基因替换pCAMBIA1302载体中的潮霉素抗性基因,构建含有报告基因GFP基因和BpMADS4基因的无抗性双元表达载体pCAM-BIA1302-GFP-Bp。结果表明：成功构建了无抗性双元表达载体pCAMBIA1302-GFP-Bp。该表达载体在苹果遗传转化中不使用抗生素筛选,可以解决抗生素抗性筛选降低苹果转基因转化效率的问题以及转基因苹果中选择标记基因造成的生物安全性问题,用该载体转化苹果可以缩短苹果童期,有效提高其育种效率。本研究为筛选对环境安全的、具有易成花特性的苹果新种质奠定了基础。     

宁夏成为中国高酸苹果生产基地

宁夏吴忠市孙家滩开发区成为我国发展高酸苹果产业的首选地之一。到2010年，宁夏将建成高酸苹果核心区，完成10万亩高酸苹果种植任务。     

苹果主要经济性状遗传动态的研究

对９个苹果杂交组合和１个国光天然实生苗群体的童期，果实大小及颜色，成熟期和抗病性等经济性状的遗传特性进行了分析研究，结果认为，苹果遗传组成比较复杂，以上性状均属微效多基因控制，呈连续分布的数量性遗传。杂种性状明显表现母性遗传优势，杂种群体结果的早晚，果实大小及颜色均有倾向母本的现象。