应用PCR和测序技术诊断吉安和抚州两地区的柑橘黄龙病

柑橘黄龙病是国内植物检疫对象,明确其地理分布对控制黄龙病扩散具有重要意义.于2008年10～11月赴吉安和抚州可疑黄龙病桔园采集30份病样,其中吉安地区19份,抚州地区11份,采用PCR方法对这30份样品进行柑橘黄龙病菌检测,结果从吉安地区4个病样(遂川县1个、万安县2个、泰和县1个)和阳性对照中扩增到预期的长约700 bp的DNA片段,其他样品和阴性对照中则没有预期的DNA片段产生.选择遂川双桥1号、万安窑头1号和泰和文田4号3个分离物的PCR产物进行纯化、测序,从中各获得一段长为654 nt的序列.经同源性比较发现,这3条DNA序列不仅完全相同,而且它们与已报道的柑橘黄龙病菌亚洲种国内外所有分离物的对应序列的同源性也均为100%,但它们与已报道的柑橘黄龙病菌非洲种核苷酸序列同源性只有79.6%,结果表明上述3个柑橘黄龙病菌分离物均属于亚洲种.柑橘黄龙病菌亚洲种在吉安地区遂川、万安和泰和县存在的发现,希望能引起有关部门足够的重视.     

庆元甜橘柚黄龙病菌的Real-time PCR检测与分析

为了解庆元县甜橘柚柑橘黄龙病的发生分布情况,为该病害的有效防控提供依据,通过Real-time PCR方法检测了庆元不同地区甜橘柚样品中黄龙病菌的存在情况。结果显示:在所检测的69个样品中,有13个样品表现为柑橘黄龙病阳性,阳性率达18.8%;其中松源街道和屏都街道样品的黄龙病菌检出率最高,可达33.3%。此检测结果表明,柑橘黄龙病已在庆元甜橘柚果园中普遍存在,应加强对该病害的防控。     

梅州市柑橘黄龙病的发生与防治

对梅州市柑橘黄龙病的发生情况进行普查,对采集的152个黄龙病样进行检测,结果表明:梅州地区已有柑橘黄龙病的发生,在此基础上提出防治方法,以为当地柑橘黄龙病的防治提供参考。     

广西柑橘黄龙病发生情况及黄龙病菌的遗传多样性分析

【目的】了解广西柑橘主产区黄龙病（Huanglongbing,HLB）危害情况及黄龙病菌（Candidatus Liberibacter asiaticus, CLas）的遗传多样性,为黄龙病的田间诊断和科学防控提供参考。【方法】对广西柑橘主产区8个地级市有代表性的柑橘园进行2个年度（2020和2021年）的跟踪调查并随机采集1048份柑橘叶片样品,利用qPCR技术对采集的样品进行CLas检测,并对阳性样品CLas菌株的基因组高变区的扩增产物进行测序,分析CLas菌株的遗传多样性。【结果】与2020年相比,除采自百色的柑橘样品CLas检出率2个年度保持不变（14.29%）外,2021年采自玉林、桂林、河池、梧州、南宁、贺州和来宾的柑橘样品CLas检出率均呈上升趋势,其中2021年采自梧州的柑橘样品CLas检出率最高（52.94%）。不同种类柑橘的CLas检出率差异明显,2021年甜橙类、柚类、杂交柑类和金柑类的样品CLas检出率均较2020年升高,2个年度的宽皮柑橘类CLas检出率相同（14.29%）。不同症状类型的柑橘样品CLas检出率也存在较大差异,其中2021年采集的缺素黄化型样...     

云南省楚雄州部分猪场衣原体血清流行病学调查

[目的]了解云南省楚雄州猪衣原体病的流行情况。[方法]从楚雄州部分规模化猪场及散养户采集1257份猪血清,采用间接血凝试验进行猪衣原体感染的血清流行病学调查。[结果]共检出阳性样品232份,阳性率为18.4%。在规模猪场的956份样品中,阳性样品193份,阳性率为20.2%;在母猪样品132份,阳性样品38份,阳性率为28.8%;在育肥猪血清824份中,阳性样品155份,阳性率为18.8%。在散养户301份样品中,阳性样品39份,阳性率为13%;母猪样品53份,共检出11份阳性样品,阳性率20.8%;育肥猪248份中,阳性样品28份,阳性率11.3%。[结论]猪衣原体病在云南省楚雄州呈一定的流行趋势。     

宠物(犬、猫)弓形虫病流行病学调查

本实验旨在了解弓形虫病在宠物(犬、猫)体内的感染情况,2011年1-12月,在北京市部分地区的27个大中型动物医院,随机抽取犬、猫血清样品1 082份,进行犬猫弓形虫病的流行病学调查。调查结果显示,1 082份犬、猫血清,阳性样品共有16份,阳性率为1.50%。其中犬血清906份,阳性样品9份,阳性率为1.00%;猫血清176份,阳性样品7份,阳性率为4.00%。     

柑橘黄龙病的发生及流行研究进展

柑橘黄龙病的出现和蔓延已经引起各柑橘种植国家的广泛关注。为了更好地开展预防和治理工作,本文概述了柑橘黄龙病发生情况,从高接换种、生态条件、品种、栽培管理、气候诱发、柑橘木虱虫口密度及黄龙病病原因素等方面分析了该病的发病因素,以期为预防黄龙病提供必要的理论依据。     

柑橘黄龙病菌在柑橘病树不同部位中的定量分布情况研究

采用实时荧光定量PCR检测了柑橘黄龙病菌在广东省阳江市4个柑橘品种9个不同部位中的定量分布情况,为病害防控提供依据。结果表明,柑橘成熟叶片的叶脉样品和叶肉样品中的黄龙病菌靶标基因平均含量分别为5 210 808.08和1 328 972.53拷贝/每克植物组织,均显著高于柑橘新叶的叶脉样品和叶肉样品(分别为18 274.26和7 754.41拷贝/每克植物组织)。果实样品中的柑橘黄龙病菌靶标基因平均含量顺序为囊壁样品橘络样品种皮样品果实中柱样品果皮样品。本研究表明,柑橘黄龙病菌广泛分布于4个柑橘品种的多个部位,但在不同的柑橘个体及不同部位样品中,柑橘黄龙病菌含量均有一定差异。     

沃柑黄龙病亚洲种Nested-PCR检测与调查分析

[目的]探究沃柑感染黄龙病的田间症状表现及各症状与感染黄龙病的相关性,为种植者尽早鉴别黄龙病树和及时做好黄龙病防控工作提供参考依据.[方法]从广西不同地区沃柑果园采集沃柑黄龙病疑似样品,对样品按症状分类并记录,用试剂盒法提取叶脉和果柱基因组DNA,采用黄龙病亚洲种的16S rDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2进行巢式PCR(Nested-PCR)扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,统计不同症状样品的阳性率.[结果]收集的214份黄龙病疑似样品中,不同症状样品均检出黄龙病亚洲种病原菌,检出阳性率表现为典型红鼻子果=斑驳黄化叶>果蒂稍红果>均匀黄化叶>叶脉黄化叶>僵果>缺锌黄化叶>其他黄化叶>正常叶.各症状类型与感染黄龙病均存在相关性,但存在差异,其中,典型红鼻子果和斑驳黄化叶阳性率均为100.0%,与感染黄龙病相关性最大;其次果蒂稍红果阳性率为90.9%,与感染黄龙病相关性很大;夏、秋梢均匀黄化叶阳性率为46.5%,与感染黄龙病相关性大.沃柑感染黄龙病后症状复杂,大多出现两种以上复合症状,结果树最初症状为出现果蒂稍红果,落果较多,未结果树以夏、秋梢黄化居多,根系容易受损;正常叶阳性率达16.7%,说明沃柑感染黄龙病早期不易显症.[结论]沃柑出现典型红鼻子果和斑驳黄化叶,可田间诊断为黄龙病树;出现果蒂稍红果,并严重落果,基本可田间诊断为黄龙病树;夏、秋梢均匀黄化黄龙病检出率高,但确诊还需与其他疑似症状(叶脉黄化叶、僵果、缺锌黄化叶、其他黄化叶和正常叶)一样通过PCR进一步检测.Nested-PCR检测技术灵敏性高,可作为沃柑感染黄龙病的早期鉴定技术.     

广西砂糖橘黄龙病亚洲种的Nested—PCR检测

【目的】利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品,为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据。【方法】选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品,用试剂盒法提取叶脉基因组DNA,采用柑橘黄龙病亚洲种16S rDNA特异引物进行PCR扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,统计待检样品柑橘黄龙病病原菌亚洲种的带菌率。【结果】对214份样品的Nested-PCR扩增结果,部分样品可得到1160 bp左右的特异条带,与预期大小相符但条带明暗不同。来自广西9市17个采样点的砂糖橘叶片样品均检测出黄龙病亚洲种病原,平均检出率均在66.0%以上,其中检出率最高的是来自东兴市的样品,检出率为100.0%,检出率最低的是来自南宁市的样品,检出率为66.9%;斑驳、缺素型黄化、叶脉黄化、小叶和无症状叶片样品中均可检测出黄龙病亚洲种。【结论】Nested-PCR技术具有灵敏度高、特异性强的特点,能够快速、准确检测出各种症状样品的黄龙病病原,可用于柑橘黄龙病的早期诊断。     

梅州市柑橘黄龙病的调查与综合防控措施

柑橘黄龙病(cirtus Huanglongbing,HLB)是细菌性病害,本文作者通过聚合酶链式反应(PCR)对梅州地区柑橘黄龙病发生情况进行调查,对梅州地区一共761个疑似黄龙病样本进行检测分析,并在此基础上提出梅州市柑橘黄龙病的综合防治策略,为梅州的柑橘产业发展提供参考。     

广西砂糖橘黄龙病亚洲种的Nested-PCR检测

[目的]利用柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA序列的特异引物检测疑似黄龙病的砂糖橘叶片样品,为砂糖橘黄龙病的综合防控提供理论依据.[方法]选取采自广西9市17个采样点的214份疑似黄龙病及无症状砂糖橘叶片样品,用试剂盒法提取叶脉基因组DNA,采用柑橘黄龙病亚洲种16S rDNA特异引物进行PCR扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测,统计待检样品柑橘黄龙病病原菌亚洲种的带菌率.[结果]对214份样品的Nested-PCR扩增结果,部分样品可得到1160 bp左右的特异条带,与预期大小相符但条带明暗不同.来自广西9市17个采样点的砂糖橘叶片样品均检测出黄龙病亚洲种病原,平均检出率均在66.0%以上,其中检出率最高的是来自东兴市的样品,检出率为100.0%,检出率最低的是来自南宁市的样品,检出率为66.9%;斑驳、缺素型黄化、叶脉黄化、小叶和无症状叶片样品中均可检测出黄龙病亚洲种.[结论]Nested-PCR技术具有灵敏度高、特异性强的特点,能够快速、准确检测出各种症状样品的黄龙病病原,可用于柑橘黄龙病的早期诊断.     

规模场奶牛新孢子虫病感染调查

本调查旨在初步了解安阳市奶牛新孢子虫病流行情况,于2017年3月至2017年9月应用ELISA技术对安阳市6个奶牛养殖场按20.0%随机采集438份血液样品进行奶牛新孢子虫病血清抗体检测。结果显示,418份血液样品中有63份检测为新孢子虫病血清抗体阳性,平均阳性率为15.07%,6个奶牛场血清抗体阳性率为8.06%～19.05%;不同年龄阶段奶牛新孢子虫病血清抗体阳性率存在一定差异,流产奶牛较未流产奶牛阳性率高。结果表明,奶牛新孢子虫病感染在安阳市广泛存在,应引起养殖户重视。     

仁化县贡柑主要病害的调查与检测

【目的】贡柑生产是广东省韶关市仁化县的支柱性产业之一。近年来,其种植面积逐渐扩大;2019年仁化县柑橘产业园入选为广东省第二批省级现代农业产业园。但关于该地区贡柑上主要病害的调查和研究还未见详细报道。【方法】通过QPCR(probe)和RT-PCR的方法分别对采集的150个样品进行贡柑黄龙病和病毒病(衰退病、碎叶病、裂皮病、黄脉病)的检测;除此之外,在田间调查时有些果园的真菌病害发病较重,因此采用常规的真菌分离方法并利用真菌的通用引物转录间隔区ITS对采集自该地区的病样进行主要病原菌的分离和分子生物学鉴定。【结果】2019年4月抽检样品的黄龙病平均阳性率为13.2%;10月除黄坑镇黄坑村的失管园外,抽检阳性率均在17%以下。值得注意的是,来自黄坑镇黄坑村的失管果园,柑橘黄龙病的阳性检出率从2019年4月的18.2%上升到10月的87.5%;丹霞街葛布村果园的阳性检出率则从6.7%上升到14.3%。同时,衰退病毒病的平均抽检阳性率4月为41.2%,10月为100%,其他病毒病均未检测到;柑橘溃疡病、柑橘炭疽病和柑橘褐斑病也有发生,个别果园发生较严重。【结论】仁化县贡柑黄龙病有一定程度的发生,可通过加强以田间管理为重点的优质高产可持续发展的分类防控等综合防治措施进行防控,尽量减轻黄龙病对柑橘产业的危害,延长柑橘园的丰产年限和生产寿命。但柑橘衰退病毒病的发病率较高,建议在种苗生产或种植前加强对贡柑衰退病毒病的检测;同时加强对该地区柑橘炭疽病和柑橘褐斑病等病害的科学防治,合理用药,减少化学农药用量。     

琼中绿橙黄龙病及“四位一体”综合防治技术

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是世界柑橘生产上毁灭性病害,严重制约柑橘产业的健康发展。2006年,海南省琼中县首次发现柑橘黄龙病入侵,给琼中绿橙产业发展造成极大影响。本文总结了琼中绿橙发生危害情况及发生特点,简要分析传播途径、发病机理和发病规律,并结合实践与试验成果,提出黄龙病"四位一体"综合防治技术,以期为生产提供参考。     

丽水市莲都区柑橘黄龙病防控与治理浅析

回顾丽水市莲都区柑橘黄龙病发生情况和10多年来坚持不懈组织积极防控所取得的成效,分析认为违章调运橘苗、橘园失管和橘农防控意识淡薄是当地柑橘黄龙病发生的主要原因,总结提出健全队伍,落实责任,筹措经费,加强宣传培训,落实疫情调查监测,健全柑橘种苗检疫监管制度,防治柑橘木虱,及时挖除病株等对策措施。     

丽水市莲都区柑橘黄龙病防控技术措施

柑橘黄龙病为我国检疫性农业植物疫病,对柑橘生产造成极大的危害。浙江省丽水市莲都区柑橘黄龙病始发于2001年,通过开展黄龙病防控工作,至2015年,柑橘黄龙病病株率被控制在0.13%,防控工作取得了明显成效。为给类似地区提供防治借鉴,现对莲都区柑橘黄龙病的发生情况及采用的防控技术措施进行总结介绍。     

柑橘黄龙病病原菌的鉴定及16S rDNA序列分析

采用Nested-PCR技术检测顺昌果园红心柚树中柑橘黄龙病病原的携带情况,通过黄龙病病原菌16S rDNA测序和构建系统发育树比较不同类型柑橘黄龙病原菌之间的进化关系,采用特异引物扩增16S rDNA片段鉴别不同黄龙病病原菌,结合限制性内切酶酶切确定该红心柚园黄龙病病原的类型,并分析不同类型柑橘黄龙病病原16S rDNA序列差异性.结果表明:所取的12株红心柚树叶片样品中有7株树的叶片中检测出黄龙病病原,黄龙病病原的阳性检出率为58.33％,其中4个为显性性状,3个为隐性性状.柑橘黄龙病病原菌16SrDNA进化分析及限制性内切酶XbaI酶切结果表明,顺昌柑橘黄龙病病原菌属于亚洲型.不同类型柑橘黄龙病病原菌16S rDNA的序列差异性分析表明,亚洲种与非洲种的差异性为2.75％,非洲种与美洲种的差异性为3.90％,亚洲种与美洲种的差异性为3.44％.     

遂川县柑橘黄龙病发生动态及综合防控技术

近年来,遂川县柑橘黄龙病比较严重,严重威胁着柑橘产业发展。本文介绍了遂川县柑橘黄龙病的发生情况,分析了该病主要来源,提出了综合防控技术,以期为科学防控柑橘黄龙病提供参考。     

梧州市柑橘黄龙病发生的原因及综合防控措施

目前,梧州市柑橘种植面积达2.6万hm~2,柑橘已成为梧州市的支柱产业,但是近年来,全市柑橘大面积发生黄龙病,已经严重影响柑橘的产量和品质,成为广大果农十分关注的热点和难点问题,严重威胁梧州市柑橘产业的可持续发展。作者分析了梧州市柑橘黄龙病发生的原因,并提出了综合防控具体技术措施。