27种中草药对根癌土壤杆菌的抑菌效果

采用纸片法检测了27种中草药对根癌土壤杆菌的抑菌效果。结果表明,黄连的抑菌效果明显,其抑菌圈直径为22mm,最低抑菌浓度（MIC）为15．62mg／ml;大黄和穿心莲也有抑菌作用,其抑菌圈直径分别为19．5和18．9mm,MIC均为31．25mg／ml。在此基础上,对抑菌效果好的黄连和大黄采用高效液相色谱法进行有效成分的鉴定和分析。     

根瘤菌,根癌土壤杆菌与寄主植物相互识别的机制

介绍了豆科植物－根瘤菌和双子叶植物－根癌土壤杆菌两个互作体系中关于病菌吸附专化性的理论，评述了奇主－细菌相互识别的机制。     

两种根癌土壤杆菌介导的荧光素酶在植物体内表达分析

根据报道的荧光素酶(Luciferase,Luc)基因设计引物,PCR扩增获得Luc基因,经BamH I和Pst I酶切连接到栽体pCHF3上,成功构建植物表达栽体pCHF3-Luc.将pCHF3-Luc分别转入根癌土壤杆菌株EHAl05和LBA4404细胞内,利用根癌土壤杆菌渗入法导入本氏烟和大麦,荧光检测仪内检测本氏烟和大麦叶片中瞬时表达的Luc活性.结果表明:两种根癌土壤杆菌介导的Luc可以在本氏烟中成功表达,而在大麦中不能表达;利用根癌土壤杆菌渗入法在本氏烟中表达外源基因时,EHA105菌株优于LBA4404菌株.     

18种中草药对大肠杆菌抑菌效果的研究

[目的]研究鹿蹄草(WINTERGREEN)、功劳叶(CHINESE HOLLY LEAF)、金樱子(CHEROKEE ROSE FRUIT)和大黄(RHEUMOFFICINALE)等18种中草药提取物的抑菌作用。[方法]采用水煎法提取中草药的有效成分,以大肠杆菌作为供试菌,利用滤纸片法测定中草药提取物的抑菌作用,并用2倍稀释法测定抑菌效果最好的4种中草药的最小抑菌浓度。[结果]18种中草药中有15种对大肠杆菌有抑制作用;其中鹿蹄草的最小抑菌浓度为31.25 mg/ml,功劳叶、金樱子和大黄的最小抑菌浓度均为62.50 mg/ml。[结论]鹿蹄草对大肠杆菌具有较好的抑制效果。     

拮抗根癌农杆菌的真菌筛选与抑菌作用

从土壤中筛选出对根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens T-37有拮抗作用的真菌菌株,采用琼脂柱法筛选真菌菌株,滤纸片法测定抑菌活性,结果表明,从土壤中分离纯化出来的52株真菌中首次筛选到1株对根癌农杆菌T-37有抑制作用的拮抗真菌Xj-Ⅴ-2,当Xj-Ⅴ-2菌株26℃,140 r·min-1,摇瓶发酵到第9天的发酵液其抑菌效果最为明显,抑菌圈直径为5.2cm,同时,生物量也达到最大,为0.460g·40mL-1.Xj-Ⅴ-2菌株所产生的抑菌成分主要向胞外分泌,且抑菌效果与生物量呈正相关关系.     

一些杀菌剂和抗菌素对根癌菌和根癌抑制菌的作用

采用抑菌留法测定了6种杀菌剂和抗菌素对不同生物型根瘤上壤杆菌及其抑制菌的作用。结果表明，福美双对生物Ⅲ型根癌菌所有菌株都有较强抑制作用，抑菌圈直径（DBA）最大达23．2mm，对Ⅰ，Ⅱ型的个别菌株也有轻微抑制作用；多菌灵、乙磷铝和加瑞农对3种生物型的根癌菌无抑制作用；青霉素钠对Ⅰ，Ⅱ型根癌菌无抑制作用，对Ⅲ型抑制作用较强，最大DBA为27．0mm。硫酸链霉素对Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型根瘤菌抑制作用显著，DBA最大值达40．8mm。对于根癌抑制菌，福美双在＜1000μg·g-1时．对K84和E26无作用，对HLB－2作用微弱，DBA为11．7mm。多菌灵、乙磷铝对3种根癌抑制菌均无作用。加瑞农对K84无作用，对E26和HLB－2作用轻微，最大DBA分别为13．2mm和10．2mm。青霉素钠对K84，HLB－2无作用，对E26的最大DBA达375mm。硫酸链霉素对HLB－2和E26无作用，对K84的最大DBA达26．2mm.     

根癌农杆菌对中华猕猴桃的转化

猕猴桃含有丰富的维生素Ｃ，被誉为“水果之王”本实验用中华猕猴桃无菌苗的茎段和叶片被根癌农杆菌感染后，能够自主生根，但茎段的生根率与叶片的生根率有一定的差异。     

根癌农杆菌转基因的分子机制

根癌农杆菌将T-DNA转移并插入寄主细胞的基因组,需要趋化与附着、vir区活化、T-DNA切割及转运、T-DNA整合及表达等步骤。本文对这些步骤分子机制的研究进展进行了综述。     

根癌农杆菌对结球白菜的转化

为了给外源有用基因导入结球白菜并高效稳定地表达提供依据，以结球白菜的子叶－子叶柄为外植体，采用农杆菌共培养法把外源基因C58／pV11导入结球白菜，在选择最优的转化条件－根癌农杆菌侵染外植体15min，农杆菌培养和共培养时在培养基中均加入AS，培养基pH为5．2，共培养3d的条件下，获得转基因植株，其中抗性植株的抗草丁膦试验，转基因植株DNA的PCR及PCR－Southern斑点杂交鉴定等结果表明，50％的抗性植株的基因组中有外源基因的整合。     

根癌农杆菌共培养转化谷子技术体系的建立

分析了影响农杆菌共培养转化谷子的因素,初步建立的谷子农杆菌共培养适宜转化体系为:以幼穗诱导的愈伤组织为转化材料,农杆菌浓度OD_(600)为0.5,已酰丁香酮为100μM,浸菌附加超声波或真空处理,22℃共培养2～3d后水洗2遍,于含羧苄西林钠和头孢唑林钠各250mg/L的0.1％甘露醇浸泡30min除菌,接于选择培养基上进行筛选并继代和再生,最后于1/2MS中生根成为完整小植株。用含Bt基因的双元裁体农杆菌LBA4404和EHA101,按所建立的转化程序,对豫谷1号、高39、鲁谷10号等优良品种的愈伤组织进行了转化。共获致密型抗性愈伤组织75个,经再生获得35株抗性植株。     

农杆菌介导的玉米转基因研究进展

从转基因技术、农杆菌介导的受体以及影响农杆菌转化的因素和玉米转基因的现状等方面,综述了在玉米中农杆菌介导转基因的进展。     

农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化体系优化研究

以甘肃主栽品种的茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性出芽的影响,初步建立了马铃薯品种“陇薯3号”和“台湾红皮”的遗传转化体系并获得了转化植株。卡那霉素生根筛选和PCR鉴定结果表明,再生的转化植株假阳性率比较高,要获得预期的转基因植株群体需加大遗传转化工作中转基因植株的数量。     

根癌农杆菌感受态细胞的制备及保存方法研究

研究不同培养基、转化溶液、保存方法对根癌农杆菌感受态细胞转化率的影响,确定高转化率根癌农杆菌感受态细胞的制备及保存方法。结果表明,使用YEB培养基,单菌落接种培养过夜后以1∶100的比例扩大培养10.5 h,用20 mmol/L CaCl2＋80 mmol/L MgCl2溶液处理,所制备新鲜感受态细胞的转化率为1.59×10^5转化子/μg质粒DNA。浓度为7%的DMSO对新鲜感受态细胞保存效果较好。     

根癌农杆菌介导真菌遗传转化的影响因素及应用

综述了根癌农杆菌介导真菌遗传转化的特点、影响因素及其在真菌育种、基因功能鉴定及基因标记与克隆等方面的应用现状,并对其应用前景进行了展望。     

肉果秤锤树叶提取物的抑菌作用研究

[目的]探讨秤锤树叶的逐级提取物的抑菌作用。[方法]采用试管稀释法测定秤锤树叶的各级提取物一总浸液、正丁醇萃取液、乙酸乙酯提取液对各试验菌的最小抑菌浓度(MIC)。[结果]各级提取物对试验菌分别有不同程度的抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最为明显;各提取物的抑菌强度依次为:乙酸乙酯萃取液(对4种实验菌均明显抑制:MIC≤31 mg/ml)、正丁醇萃取液(金黄色葡萄球菌:MIC≤62 mg/ml、其余3种菌的MIC相似:MIC≤125)、总浸液(仅对金黄色葡萄球菌抑制明显:MIC=125 mg/ml)。[结论]秤锤树叶的乙酸乙酯提取物具有广谱抗茵作用,其逐级提取物富集的抑茵活性逐级增强。     

苦参对鸡大肠杆菌的抑菌作用及其机理研究

【目的】阐明苦参的抑菌作用及机理，为生产实践提供理论依据。【方法】采用牛津杯法及液体倍比稀释法对鸡大肠杆菌等常见致病细菌进行了敏感性试验；通过电镜观察，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白表达的研究，生长曲线的绘制以及流式细胞仪对菌体细胞周期的分析，对苦参碱粗提物的抑菌作用及机理进行研究。【结果】苦参对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有明显抑制作用，抑菌谱广；药物是通过抑制鸡大肠杆菌功能蛋白的表达，从而影响菌体的细胞周期，使I期菌数增加，R期菌数下降，最终菌体不能达到正常对数生长期而直接进入衰亡期；菌体形态结构发生明显变化，表现为菌体缢缩变形，中间凹陷呈规则元宝状，细胞质固缩，质壁分离，最终细胞壁破损，内容物泄漏而使菌体死亡。【结论】苦参碱对鸡大肠杆菌抑菌机理是抑制调控细菌生长、分裂相关蛋白的合成，阻滞其分裂和生长，并且与细胞内的蛋白质结合，细胞质固缩、解体而死亡。     

农杆菌介导北方粳稻转化体系的研究

通过农杆菌介导的方法将Bar-Bt基因（抗除草剂基因和抗虫基因构建在同一载体上的双基因）整合到北方优质粳稻龙稻6号、松粳9号等品种中;分别以供试品种的幼胚和成熟胚为外植体诱导愈伤组织,携带有Bar-Bt基因双元载体PCAMBIA1301号的根癌农杆菌EHA105为载体,GUS基因的瞬时表达率为衡量指标,对影响农杆菌介导的龙稻6号、松粳9号等品种的转化效率的主要因素进行了研究。结果表明：农杆菌侵染愈伤组织的菌液浓度以D（600nm）=0.8～1.0较为适宜,最佳共培养时间为2～3 d,预培养时间为5 d,共培养培养基中添加100μmol·L^-1乙酰丁香酮的转化效率有明显提高。     

红菇子实体提取液的抑菌作用研究

[目的]为红菇的开发与利用提供理论依据。[方法]采用超声波提取法、微波提取法和浸提法分别处理红菇子实体干品以获得提取液,并研究其抑菌作用。[结果]红菇子实体的超声波提取液对细菌、霉菌和酵母菌均有一定的抑制作用,抑菌效果随超声时间的增加而增强。红菇子实体的微波提取液对不同菌种也有一定的抑菌作用,但较弱。以无水乙醇为提取剂时,红菇子实体提取液对细菌、霉菌、酵母菌均有抑制作用,但以无菌水为提取剂时其仅对黑曲霉有抑制作用。红菇子实体的浸提法提取液只对黑曲霉有一定的抑制作用。[结论]超声波提取法所获得的提取液对不同菌种的抑菌作用较其他提取方法要强。     

农杆菌介导的PEPCase基因导入小麦的初步研究

利用根癌农杆菌遗传转化系统,以普通小麦扬麦158为材料,将玉米泛生素基因启动子(Ubi)驱动下的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)基因,以及潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)导入预培养10~12 d小麦胚性愈伤组织中。经过在含100~150 mg.L-1潮霉素(hyg)的筛选培养基上连续筛选,获得了hyg抗性植株。经GUS组织化学染色检测和PCR鉴定,其中的9棵含有Ecppc基因,PCR阳性植株比例为3.03%。初步鉴定已成功地建立了小麦遗传转化系统,为进一步探讨PEPCase基因在植物中的转化和表达奠定了基础。