白术叶片再生植株和丛生芽快繁的研究

白术是菊科的一种重要药用植物。为满足白术的药用需求，扩大其资源供应，避免传统开荒育苗种植模式对生态环境的破坏，为白术的大规模工厂化育苗及获取药用次生代谢产物提供有效的途径和方法，笔者以白术叶片为外植体经愈伤组织再生植株和丛生芽增殖两种方式建立了白术无菌苗的快速繁殖技术，分析了不同植物激素种类和浓度对白术叶片再生植株及丛生芽增殖的影响，研究了温度和光照条件对白术叶片愈伤组织褐变的影响。研究结果显示在培养基MS+ 6-BA1 mg/L+NAA0.2 mg/L上白术丛生芽增殖倍数最高，可达4.45倍；以白术的叶片愈伤组织诱导及再生植株的最佳培养基为MS +KT 1mg/L+NAA0.2 mg/L，愈伤组织诱导率可达96.7%；芽分化率为90%。不同的细胞分裂素种类与浓度处理差异显著，在白术叶片的愈伤组织诱导中，KT的效果要优于6-BA，但在丛生芽增殖中则表现出高浓度的6-BA要优于KT。白术叶片愈伤组织继代培养中褐变程度与温度、光照条件有关，1000 lx光照强度，20±0.5℃的温度条件下继代培养能有效控制褐变。     

马齿苋组织培养的优化

用野生马齿苋的种子得到无菌苗。以无菌苗的下胚轴和子叶为外植体,在18个不同浓度6_BA,2,4-D,NAA和KT组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导、不定芽分化和增殖及生根的培养。得到诱导马齿苋愈伤组织的最佳条件是:初代培养基:MS 3%蔗糖 6_BA 1 mg/L 2,4_D 1 mg/L;丛生芽增殖培养基:MS 3%蔗糖 KT 3 mg/L NAA 0.5 mg/L;生根培养基:MS 3%蔗糖。     

野生软枣猕猴桃组织培养及褐变处理

以野生软枣猕猴桃嫩芽、幼嫩叶片以及茎段作为外植体,研究野生软枣猕猴桃组织培养整个过程,以建立快速高效的野生软枣猕猴桃再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片、茎段愈伤组织的培养基分别为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA和MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;诱导出愈伤组织在MS+0.6 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培养基上能很好地分化不定芽苗;诱导幼芽产生丛生芽的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;较适宜的生根培养基为1/2MS。愈伤组织继代中发现细胞生长素NAA可以防止愈伤褐化。在愈伤组织分化中,发现将分化出的芽苗再次愈伤化,可以提高分化率。     

大蒜花梗组织培养再生植株

取生殖期大蒜花梗,在N_6+2,4-D 2mg/L+KT 1mg/L培养基上暗培养30天后,得到微黄色愈伤组织。将愈伤组织转到N_6+2,4-D 0.5mg/L+KT 0.5mg/L培养基上继代二次,然后于N_6+BA 5mg/L+KT 1mg/L+IAA 0.01mg/L,MS(1/2大量元素)+BA 5mg/L+KT 1mg/L+IAA 0.01mg/L和MS+BA 5mg/L+KT 1mg+IAA 0.01mg/L培养基上光照培养。3周后愈伤组织上出现绿色丛生芽,将小芽转到MS(1/2大量元素)+NAA 0.01mg/L培养基上,一周后发生白色根并形成完整植株。2,4-D和KT对大蒜花梗愈伤组织发生是必要的,高浓度的细胞分裂素和低浓度的生长素有利于芽分化,高浓度NH_4~+有利于根分化,低浓度NH_4~+有利于芽分化。愈伤组织低温处理对芽的分化是必要的。另外,对花梗愈伤组织发生进行了细胞学观察。     

锥花福禄考叶片愈伤组织诱导与植株再生

以锥花福禄考的叶片为外植体,进行愈伤组织诱导、不定芽分化增殖及生根培养,确定了锥花福禄考快繁体系的最适培养条件：（1）初代培养基：MS+BA0.4 mg/L +NAA1.5 mg/L;（2）丛生芽增殖培养基：MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+GA31.5mg/L;（3）生根培养基：1/2MS+ +NAA0.1mg/L。     

喜树快速繁殖与再生体系建立

喜树(Camptotheca acuminata)是珙桐科(Nyssaceae)的一种落叶阔叶树,为我国南方特有树种, 含有抗肿瘤作用的喜树碱.本研究建立了喜树愈伤诱导,器官发生与植株再生体系以及喜树成年茎段和无菌苗子叶节的快繁体系.以喜树无菌苗子叶和胚轴为外植体,采用不同激素组合诱导愈伤组织,只有培养在NN69 6-BA (1.0 mg/L) IAA (0.05 mg/L) AS (afenine sulfate ,10 mg/L)的培养基上的愈伤组织出现器官分化.每个愈伤分化的芽数平均为6个,分化率达86%.培养在附加0.5 mg/L的6-BA和0.1 mg/L的KT的NN69培养基上的芽生长既快又好.以子叶节和茎段为外植体,附加6-BA (0.5 mg/L), IAA (0.1 mg/L) 的NN69培养基对喜树茎段丛生芽的诱导效果较好,子叶节丛生芽诱导培养基为NN69附加6-BA (0.2 mg/L), IBA (0.05 mg/L) ,AS (afenine sulfate,10 mg/L),附加6-BA (0.25 mg/L), IAA (0.05 mg/L)的培养基对丛生芽增殖效果明显.所诱导的芽苗在附加0.5 mg/L IBA, 0.1 mg/L KT, 10 mg/L AS的B5培养基上诱导生根,生根率可达90%,平均根数6-8条.本研究为喜树的遗传转化提供了前提.     

薄荷离体培养及植株再生的研究

以薄荷茎段为外植体,研究了不同植物激素对薄荷愈伤组织的诱导及其增殖、不定芽分化和诱导生根的影响。结果表明,愈伤诱导最适培养基为MS 6-BA1.5mg/L 2,4-D0.5mg/L NAA0.5mg/L,其愈伤组织生长良好;最佳愈伤增殖培养基为MS NAA1.0mg/L或MS IAA2.0mg/L,其褐化率均较低;最佳诱导分化培养基为MS 6-BA2.0mg/L NAA0.1mg/L,分化率达77%;生根培养基为1/2MS NAA2.0mg/L,且根较为粗壮。     

‘黑珍珠’番茄植株再生体系的研究

为了研究‘黑珍珠’番茄植株再生,以‘黑珍珠’番茄幼嫩叶片为外植体诱导愈伤组织,通过愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、不定芽增殖培养、生根培养和试管苗移栽,建立高效快速的‘黑珍珠’番茄再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片愈伤组织的培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,叶片外植体愈伤组织诱导率最高可达98.2%;诱导出的愈伤组织在MS+ 1.5 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA培养基上能很好的分化出不定芽;MS+4.0 mg/L KT+ 0.01 mg/L IBA 培养基可实现不定芽芽增殖;最适宜的生根培养基为1/2MS+ (0.05~0.08) mg/L NAA,试管苗移栽成活率达92%。     

西部沙樱枝条愈伤组织诱导、增殖及分化培养

以西部沙樱一年生枝条为材料,研究不同激素配比条件下外植体愈伤组织的诱导、增殖及分化诱导。结果表明:西部沙樱茎段在2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75)的MS培养基上可诱导出愈伤组织;愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75);愈伤组织分化的最佳培养基为MS+NAA 0.3 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75),经分化可获得无性系芽,继而产生丛生苗。西部沙樱愈伤诱导及分化的成功为西部沙樱资源的保护、开发和利用提供了理论依据和技术保障。     

章丘大葱子叶再生体系建立及再生株倍性鉴定

以章丘大葱子叶为材料,研究了不同激素配比对愈伤组织诱导和继代、芽分化、芽点的伸长及根诱导的影响,并对获得的再生植株进行了鉴定。结果表明,诱导章丘大葱子叶产生愈伤组织、愈伤组织的继代培养、愈伤组织芽分化、芽点的伸长及诱导生根的最佳培养基及激素配比分别为：MS+2,4-D 2.0mg/L+KT 0.5mg/L、MS＋2,4-D 2.5mg/L＋KT 0.5mg/L、MS+2,4-D 0+KT 1.0mg/L、MS+KT 0.5mg/L和MS基本培养基;试管苗经驯化移栽后,共有22株成活,成活率为92%,对成活的再生植株进行形态学、叶片气孔及根尖染色体鉴定表明,共有3株发生变异,其中2株为外部形态上的变异,而另一株为染色体的加倍变异。     

玉米胚性愈伤组织诱导与分化的影响因素

以玉米自交系黄早4、综31、金黄96B、GY237、478及海921为材料,通过改良培养基上附加成分的组成及浓度,对影响玉米胚性愈伤组织的诱导及分化等几个关键因素进行了研究。结果表明,基因型对玉米胚性愈伤诱导的影响是显著的,而且基因型和基本培养基之间存在互作;在培养基上附加水解酪蛋白(casein hydrolysate,CH)、L-脯氨酸(L-proline)对于玉米胚性愈伤组织的诱导分化是必要的,而附加L-谷氨酰氨、甘露醇、AgNO3对提高胚性愈伤组织的诱导作用不显著;结果还发现胚性愈伤组织诱导培养基和胚性愈伤组织分化培养基的组合对成苗率有明显的影响作用。     

脱落酸对棉花体细胞胚胎发生的影响

【目的】研究脱落酸(Abscisic acid, ABA)对棉花体细胞胚胎发生过程中下胚轴脱分化和再分化的影响,优化体细胞胚胎发生体系和初步解析脱落酸调控棉花体细胞胚胎发生分子机制。【方法】以棉花品种中棉所24(CCRI 24)下胚轴为外植体,设置5个ABA浓度0、0.02、0.04、0.06、0.08μmol·L^-1,分别以A0、A1、A2、A3、A4表示,添加至MSB(MS培养基+B5维生素)培养基诱导愈伤和胚性愈伤,研究ABA对棉花下胚轴初始细胞脱分化、愈伤组织诱导和胚性愈伤组织诱导的影响。【结果】ABA促进下胚轴初始细胞脱分化;显著提高愈伤组织的脱分化率和增殖率;0.02μmol·L^-1ABA显著提高胚性愈伤分化率,0.04~0.08μmol·L^-1ABA显著降低胚性愈伤分化率。ABA处理后胚性愈伤和非胚性愈伤的增殖率均显著提高且质地受到影响。0.02~0.08μmol ABA处理下,LBD和LBD在愈伤起始期上调表达。0.02μmol·L^-1ABA处理下,在愈伤增殖早期和中期BBM、LEC1和AGL15上调表达,愈伤增殖后期FUS3、LEA、ABI3基因上调表达。【结论】脱落酸调控的棉花体细胞胚胎发生与相关标记基因的时空性表达密切相关,这些基因表达水平的增加是ABA调控愈伤和胚性愈伤分化的分子基础。     

花曲柳愈伤组织悬浮培养及秦皮甲素积累研究

为建立花曲柳的愈伤组织诱导、增殖与悬浮培养体系,采用WPM为基本培养基,选取休眠芽刚萌发的叶片及叶柄为外植体,采用均匀试验设计研究不同浓度及配比的生长调节剂对花曲柳愈伤组织的形成和增殖的影响。1.8 mg/L NAA和0.1 mg/L TDZ的生长调节剂组合适合形成绿色、松散的愈伤组织,1.2 mg/L NAA和0.07 mg/L TDZ的组合适合形成增殖迅速的悬浮愈伤组织团。花曲柳愈伤组织诱导的最佳培养基为WPM+1.5 mg/L NAA+ 0.1 mg/L TDZ;增殖的最佳培养基为WPM+ 1.874 mg/L NAA+ 0.127 mg/L TDZ;愈伤组织悬浮培养基为1/2WPM+ 1.2 mg/L NAA+ 0.07 mg/L TDZ,秦皮甲素最大积累量出现在悬浮培养的第9天,最高可达0.800 mg/g。     

Cu2+对杜仲愈伤组织诱导及增殖的影响研究

以杜仲嫩叶为外植体,诱导愈伤组织并进行增殖试验.在培养基中添加不同浓度的Cu2,研究Cu2对杜仲愈伤组织诱导及增殖的影响.结果表明:诱导培养基中附加1.0 mg/L的Cu2+时,有利于杜仲愈伤组织形成,诱导率最高.在增殖培养基中添加0.7 mg/L的Cu2+时,可明显改善愈伤组织的生长状态,增加愈伤组织增殖生长量.杜仲愈伤组织诱导率及增殖生长量随着Cu2+浓度的升高而逐渐升高,但当Cu2+浓度超过1.0 mg/L时,诱导率及生长量下降.     

4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究

为建立4个玉簪新品种的组培再生体系,以MS为基本培养基,添加不同质量浓度6-BA和2,4-D,研究其外植体组培苗的愈伤组织诱导以及继代扩繁的最适生长培养基。愈伤组织的诱导中,高浓度的6-BA(≥3.0mg/L)与低浓度的2,4-D(≤0.1mg/L)配比有利于愈伤组织的生成。MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+35g/L蔗糖+12g/L琼脂的培养基可以使HostaBigDaddy（编号H1）和‘金鹰’（编号H2）的增殖倍数分别达2.54和2.78,而MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+11g/L琼脂可以使‘小黄金叶’（编号H6）的增殖倍数达3.01,而最适宜H15增殖的培养基则是MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+12g/L琼脂。研究结果为4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究提供了有利数据依据,在此方法下愈伤组织诱导率最大,并且扩繁增殖倍数最大。     

大麦成熟胚胚性愈伤组织的高频诱导和植株再生

大麦成熟胚的初代愈伤组织是水质、柔软的非胚性愈伤组织，在继代培养中能以一定频率出现胚性愈伤组织。本文研究了基因型、有机添加物和胚切割等因素对大麦胚性愈伤组织诱导频率的影响。结果表明：供试的１０个大麦品种在胚性愈伤组织诱导率和植株再生率上有显著差异；培养基中添加水解酷蛋白、Ｌ－脯氨酸以及提高维生素Ｂ１和肌醇的浓度可以促进胚性愈伤组织的形成；胚芽段比全胚或胚根段更易形成胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转入无     

桃叶卫矛茎段愈伤组织诱导及不定芽再生体系的建立

为完善及优化桃叶卫矛组培繁殖再生体系,解决以腋芽萌发为再生途径进行组培增殖时增殖系数小的问题,以桃叶卫矛幼嫩茎段为材料,分别用20%的次氯酸钠和0.10%的升汞进行消毒处理,处理时间分别为8、10、12 min获取其消毒最佳方案;以桃叶卫矛茎段为材料,通过调节6-BA和NAA浓度,诱导桃叶卫矛茎段产生愈伤组织;以桃叶卫矛愈伤组织为材料,采用6-BA和NAA正交试验诱导产生不定芽;以桃叶卫矛不定芽为材料,调节6-BA和NAA浓度,提高继代增殖系数;以桃叶卫矛继代增殖苗为材料,调节IBA和NAA浓度,获取桃叶卫矛生根苗。研究结果表明：（1）桃叶卫矛幼嫩茎段消毒最佳方案为20%的次氯酸钠处理12 min,污染率2%;（2）茎段愈伤组织诱导最佳培养基为1.0 mg/L 6-BA+ 0.10 mg/L NAA,诱导率80.00%;（3）不定芽诱导最佳培养基为0.5 mg/L 6-BA+ 0.10 mg/L NAA,诱导率91.11%;（4）继代增殖最佳培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.10 mg/L NAA,增殖系数6;（5）生根培养最佳培养基为1/2MS+ IBA 0.3 mg/L,生根条数平均为5条。本研究利用桃叶卫矛无芽茎段诱导出愈伤组织,并将继代增殖系数提高至6,且完成了桃叶卫矛组培再生体系的优化。     

降香黄檀愈伤组织培养与植株再生研究

为了实现降香黄檀工厂化快速繁殖和扩大栽培,并为降香黄檀抗寒基因导入打下一定的基础,以降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖为外植体,MS为基本培养基,对各器官愈伤组织诱导与分化的最适培养基成分进行了研究。结果表明,可从降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖成功地进行愈伤组织培养和植株再生。茎段、叶片、根尖诱导愈伤组织的最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L、1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L和1/4MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;茎段、叶片、根尖的愈伤组织诱导丛生芽最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 4.0 mg/L、1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L和1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L;茎段、叶片、根尖来源的单芽,其最佳生根培养基分别为MS+NAA 1.5 mg/L、MS+NAA 1.0 mg/L和MS+NAA 2.0 mg/L。比较茎段、叶片与根尖的愈伤组织诱导率、丛生芽诱导率和单芽生根率,得出以无菌实生苗根尖作为外植体是降香黄檀愈伤组织培养和植株再生的最佳选择。     

Genotypic differences in organogenesis from callus of ten triticale lines

Summary Callus was obtained from immature excised embryos of triticale using MS medium supplemented with 3 mg/l 2,4-D and 1 mg/l kinetin. The presence of 2,4-D was essential for continued callus proliferation. Plantlets were induced from the calli by sub-culturing on medium either devoid of auxin or containing 0.1 mg/l 2,4-D. The capacity to produce callus and to form organs and plantlets differed markedly among the genotypes used. Lines also had distinct response to presence and absence of 2,4-D in the regeneration media. The callus of most triticale lines used differentiated into organs more readily on MS medium supplemented with 0.1 mg/l 2,4-D than on medium without growth regulators. Very high frequencies (up to 75%) of plantlet regeneration were observed in several of the triticale lines studied.     

杜仲愈伤组织诱导及胚性愈伤组织的判别

为探索杜仲胚性愈伤组织诱导的条件,建立杜仲体细胞胚胎发生初步体系,以杜仲幼嫩叶片和未成熟合子胚为外植体、MS为基本培养基,探究外源激素配比、未成熟合子胚发育阶段与基因型对愈伤组织诱导的影响,并从形态学和细胞学对愈伤组织进行胚性的判断。试验结果表明：4种不同激素配比的培养基诱导出的叶片愈伤组织在形态上具有差异,MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L和MS+ 2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L有利于叶片胚性愈伤组织诱导;在培养基MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L上,以未成熟合子胚为外植体诱导出4种类型愈伤组织,其中圆球形和颗粒型突起的愈伤组织具有胚性;未成熟合子胚采集时间对愈伤组织诱导率具有显著差异,6月14日采集的外植体愈伤诱导率最高,不同基因型差异不显著。